ARMS与NGS对比检测NSCLC患者标本EGFR、KRAS、BRAF、EML4-ALK融合等基因探索

目的 探讨突变扩增阻滞系统(ARMS)法和下一代测序(NGS)法检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者标本多驱动基因改变上的差异,指导临床个体化治疗.方法 51例NSCLC患者标本首先采用ARMS法,对所有样本进行表皮生长因子受体(EGFR)、鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)、鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌基因同源体B1 (BRAF)、棘皮动物微管相关类蛋白4-间变性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)等基因检测,随后采用NGS对上述标本进行高通量检测对比,收集临床资料,定期随访.结果 51例NSCLC样本应用ARMS法与NGS检测EGFR、KRAS、EML4-ALK突变阳性率(48.9％vs53.3％、11.1％ vs 8.9％、13.7％ vs 5.9％)差异无统计学意义.两种方法检测出的EGFR-19del突变组比EGFR-L858R突变组靶向治疗生存期较长,差异有统计学意义(P=0.0L0),但两组在性别、年龄、靶向治疗阶段等方面差异无统计学意义.NGS法检测出EGFR-19del、L858R突变患者肿瘤特有基因平均数量分别为7.1、4.6个,EGFR-L858R多为抑癌基因突变(91％).2例EGFR/KRAS双突变患者较EG-FR单突变患者预后差.结论 ARMS法和NGS均适用于NSCLC患者突变驱动基因检测.对于DNA点突变检测,NGS不仅显示ARMS检测的遗漏,还显示突变丰度、伴随突变及非常规突变等,对ARMS检测有补充作用.EGFR-19del患者靶向治疗生存期比EGFR-L858R突变患者长,EGFR-L858R主要为抑癌基因突变.EGFR合并KRAS双突变患者预后较差,但仍需进一步研究证实.     

南极磷虾肽改善高尿酸血症机制研究

目的 探究南极磷虾肽(AKP)对于高尿酸血症模型小鼠的降尿酸功效及其作用机制。方法 采用HPLC法体外筛选出具尿酸合成关键限速酶--黄嘌呤氧化酶(Xanthine oxidase, XOD)抑制活性的AKP,体内动物实验验证AKP的降尿酸活性。雄性SPF级Balb/c小鼠采用高嘌呤饲料(25%酵母浸粉)喂养联合腹腔注射尿酸酶抑制剂(氧嗪酸钾,200 mg.kg^-1.BW^-1)建立高尿酸血症小鼠模型,造模21天后进行AKP干预。小鼠随机分为正常对照组(生理盐水),模型对照组(生理盐水)、阳性药组(非布司他)、AKP低剂量组(450 mg.kg^-1.BW^-1),AKP高剂量组(900 mg.kg^-1.BW^-1),干预30天后检测血清尿酸含量(Uric acid, UA),肝脏尿酸合成关键酶酶活,肾脏及肠道尿酸转运蛋白mRNA的转录水平及形态学改变。结果 AKP体外XOD抑制率可达24.4%。动物实验验证表明AKP可显著降低高尿酸模型小鼠的UA,作用机制为通过抑制肝脏尿酸合成关键酶XOD及腺苷脱氨酶(Adenosine Deaminase, ADA)酶活,从而抑制肝脏尿酸生成;上调肾脏及肠道尿酸分泌转运体三磷酸腺苷结合盒转运蛋白(ATP binding cassette superfamily G member 2, ABCG2)、有机阴离子转运体(organic anion transporter 1, OAT1)转录水平,并抑制尿酸重吸收转运体葡萄糖转运体9(glucose transporter 9, GLUT9)、尿酸转运体1(urate transporter 1, URAT1)转录水平,从而促进肾脏及肠道尿酸排泄。AKP可显著降低血清尿素氮(Blood urea nitrogen, BUN)含量,肾脏及肠道切片观察结果进一步表明,AKP可以显著改善高尿酸血症造成的肾脏及肠道损伤,维护肾脏及肠道尿酸排泄功能。结论 AKP可通过抑制肝脏尿酸生成,促进肾脏及肠道尿酸排泄,维护肾脏及肠道形态及功能,从而改善高尿酸血症。     

鱼油和红花籽油对骨质疏松症小鼠脂肪酸合成的比较研究

摘要：骨质疏松患者通常伴发肥胖、高脂血症等脂代谢紊乱症状。鱼油（Fish Oil,FO）富含DHA、EPA等n-3 多不饱和脂肪酸（PUFA）,红花籽油（Safflowerseed Oil,SO）富含亚油酸等n-6 PUFA,研究发现其对骨质疏松、动脉粥样硬化等多种疾病都有很好的调节作用,然而对骨质疏松症模型小鼠脂肪酸合成的作用尚未见报道。目的与方法 本实验采用双侧去卵巢手术建立骨质疏松症模型,研究了鱼油和红花籽油对模型小鼠脂肪酸合成的影响及作用机制。 结果 FO显著增加骨强度,降低模型小鼠体脂比、血清总胆固醇 （Total Cholesterol,TC）、甘油三酯（Triglyceride,TG）等脂代谢表观指标,降低n-6 PUFA代谢中间产物——前列腺素E2（Prostaglandin,PGE2）、前列腺素E受体4（Prostaglandin E receptor,EP4）,以及下游炎症基因——核转录因子κB（Nuclear factor κB,NF-κB）、肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）的表达水平。由NF-κB介导的脂肪酸合成关键基因mRNA表达水平也显著下降：包括过氧化酶增殖因子活化受体γ（Peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ）、固醇调节元件结合蛋白-1c（Sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP1c）、脂肪酸合成酶（Fatty acid synthase,FAS）、乙酰辅酶A羧化酶（Acetyl-CoA carboxylase,ACC）。SO降低骨强度,显著提高模型小鼠体脂比、TC、PGE2含量以及脂肪酸合成调控基因SREBP1c的mRNA表达水平。 结论 提示通过介导PPARγ和NF-κB炎症通路,鱼油显著改善模型小鼠的脂质积累,而红花籽油则使模型小鼠的脂肪酸合成发生紊乱。     

海藻提取物对小鼠酒精性胃溃疡的保护作用

目的 探究海藻提取物对乙醇诱导小鼠急性胃溃疡的保护作用及其作用机制。方法 将8周龄雌性健康BABL/C小鼠随机分为正常组、模型组、海藻提取物低剂量组（7.2 mg·kg-1·bw-1）、海藻提取物高剂量组（21.5 mg·kg-1·bw-1）。预灌胃2周后,模型组和海藻提取物组灌胃10 mL·kg-1·bw-1 85%乙醇,建立小鼠急性胃溃疡模型。测定各组小鼠胃腺部出血状况、胃溃疡抑制率,以及血清谷草转氨酶（Aspartate aminotransferase,AST）、谷丙转氨酶（Alanine aminotransferase,ALT）,丙二醛（Malondialdehyde,MDA）、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase,SOD）和白介素-6（Interleukin-6,IL-6）、肿瘤坏死因子-α（Tumor?necrosis?factor-α,TNF-α）含量,进一步检测胃组织中核转录因子κB（Nuclear?factor?κB,NF-κB P65）、pNF-κB P65的蛋白表达水平。结果 海藻提取物可显著改善模型小鼠胃溃疡病理学变化,且呈剂量效应关系提高SOD的表达水平,降低MDA、AST、ALT、TNF-α和IL-6表达水平,以及NF-κB通路关键蛋白（IkB、p-IkB、NF-κB P65、pNF-κB P65）的表达。结论 海藻提取物通过调节NF-κB介导的炎症通路,对乙醇所致急性胃溃疡有保护作用。     

非小细胞肺癌患者eml4-alk基因检测及eml4-alk阳性患者临床特征分析

目的 探讨棘皮动物微管相关蛋白4(eml4)与间变性淋巴瘤激酶(alk)融合基因阳性非小细胞肺癌(NSCLC)患者的检测、临床特征、治疗、预后以及与egfr、kras、braf基因表达情况之间的联系.方法 选取190例NSCLC患者石蜡包埋(FFPE)标本,采用免疫组化(IHC)法进行eml4-alk融合基因阳性NSCLC患者(eml4-alk+NSCLC)筛选,对于IHC阳性的标本使用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测验证.收集整理eml4-alk+NSCLC的临床资料,并对其随访;对所有患者标本采用RT-PCR法进行egfr、kras、braf突变检测.结果 190例NSCLC患者中,经IHC筛查及RT-PCR确证,共检出17例eml4-alk+NSCLC,其中手术标本最多,占47.1%(8/17)(X2=25.999,P=0.000),<60岁的占76.5%(13/17)(X2=5.813,P=0.016).未显示eml4-alk融合基因与egfr、kras或braf突变同时出现的患者.在手术患者Ⅰ期未显示eml4-alk阳性肺癌,在Ⅱ~Ⅲa期检出8例eml4-alk阳性肺癌,经术后化疗25%(2/8)复发,2年生存率为100%.9例晚期eml4-alk阳性肺癌患者化疗有效率低(4疗程化疗后仅12.5%缓解),已有5例死亡.一线化疗后病情稳定或缓解的患者维持阶段口服克唑替尼的客观缓解率(ORR)与疾病控制率(DCR)分别达50%、100%.多线治疗后进展患者三线口服克唑替尼2个月ORR与DCR仍可达33.3%、66.7%.结论 通过IHC筛查及随后RT-PCR可在各种病理标本中有效检出eml4-alk+NSCLC,其临床特征为<60岁的患者多见,而与性别、吸烟史等其他特征无明显关联.能够手术的较早期(Ⅱ~Ⅲa期)eml4-alk+NSCLC,接受术后辅助化疗预后较好;晚期患者一线化疗后病情稳定或缓解患者口服克唑替尼疗效较好.经多线治疗后使用克唑替尼仍然可提高其ORR及DCR,但获益有限.