间充质干细胞和单个核细胞异种移植治疗小鼠肝损伤的研究

目的：研究大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）和单个核细胞（MNCs）在四氯化碳（CCl4）诱导性小鼠肝损伤治疗中的作用。方法：无菌条件下取雄性Wistar大鼠骨髓分离MNCs,培养纯化及流式细胞仪筛选获得MSCs;采用CCl4制作雌性Balb/c小鼠肝损伤模型,随机分为MSCs移植组、MNCs移植组和肝损伤对照组。2个细胞移植组分别在CCl4损伤后立即经尾静脉注入大鼠MSCs或MNCs,各组分别于移植细胞输入前即刻（T0）、输入后第1（T1）、7（T2）、14（T3）、28（T4）、42 d（T5）断尾取血检测谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）。6周后处死小鼠,比较肝脏质量指数,肝病理学切片检测肝损伤程度,PCR检测大鼠Sry基因片段植入小鼠肝脏的情况。结果：MSCs CD44、CD90均表达阳性,而CD45表达阴性;2个细胞移植组在T1~5时点ALT和AST浓度差异有统计学意义（P＜0.05）;与肝损伤对照组比较,MSCs移植组ALT和AST浓度在T1~5时点均降低; MSCs移植组肝损伤修复程度明显好于MNCs移植组和肝损伤对照组;仅MSCs移植组肝内有大鼠Y染色体阳性细胞存在。结论：体外分离培养及扩增的大鼠MSCs可植入到CCl4诱导性肝损伤小鼠的肝组织中,并改善CCl4导致的肝损伤。     

“主线教学-课题设计”为基础的课堂讨论法在免疫学教学中的应用

目的探索“主线教学一课题设计”为基础的课堂讨论法在免疫学教学中的作用。方法选择药学系2008级和2009级2届五年制学生进行新的教学方法的试点。教学方法包括主线教学、课题设计、课堂讨论和实验操作。通过问卷调查和考试成绩比较,分析评价教学效果。结果问卷调查结果显示,73．5％以上的实验班学生认为“主线教学一课题设计”为基础的课堂讨论法有助于激发学习热情及提高综合能力;经t检验,实验班与对照班学生平均成绩比较,差异有统计学意义（P=O．0028）。结论“主线教学一课题设计”为基础的课堂讨论法是免疫学教学的有效方式,值得进一步推广应用。     

大鼠间充质干细胞在小鼠肝损伤中的作用

目的 研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)在四氯化碳(CCl4)导致小鼠肝损伤中的作用,为临床进行细胞移植治疗肝脏疾病提供新策略.方法 无菌条件下取雄性Wistar大鼠骨髓,分离培养及流式细胞仪检测MSC;采用CCl4制作雌性BALB/c小鼠肝损伤模型,肝损伤小鼠随机分为MSC移植组和肝损伤对照组.MSC移植组在CCl4损伤后立即经尾静脉注入大鼠MSC,6周后处死小鼠,检测小鼠肝损伤程度和大鼠MSC植入情况.结果 流式细胞仪结果显示:第3代大鼠MSC CD45-/CD90 细胞为94.54%,CD45-/CD44 细胞为91.25%;肝组织学观察显示:MSC移植组肝损伤修复程度明显好于肝损伤对照组;PCR方法证实只有MSC移植组肝内有大鼠Y染色体阳性细胞存在.结论 体外分离培养及扩增的大鼠MSC移植到CCl4肝损伤小鼠体内,可参与肝损伤修复,减轻CCl4导致的肝损伤.     

人β防御素-2联合HPV16E7c免疫小鼠的免疫学效应实验研究

目的 探讨以人β防御素-2为佐剂的HPV16 E7c免疫功能及细胞免疫应答.方法 将30只小鼠按随机数字表法分为3组:PBS组、pcDNA3.1(+)/E7c组、pEGFP-C1/HBD2-E7c组,每组10只.PBS组采用PBS 100 μg·只-1 行股四头肌肌内注射,进行初次免疫;pcDNA3.1(+)/E7c组采用pcDNA3.1(+)/E7c质粒100 μg·只-1 行股四头肌肌内注射,进行初次免疫;pEGFP-C1/HBD2-E7c组采用pEGFP-C1/HBD2-E7c联合质粒100 μg·只-1行股四头肌肌内注射,进行初次免疫.3组初次免疫后,再间隔2周,以上述方法和剂量加强免疫2次.共免疫3次.3组小鼠免疫1周后,断颈处死小鼠,取小鼠脾脏称重,计算脾脏脏器指数及计数脾淋巴细胞数量,流式细胞仪检测淋巴细胞亚群CD4+、CD8+细胞数量及比值;采用摘眼球采血法收集小鼠血清,采用ELISA法检测小鼠血清E7抗体水平.结果 pcDNA3.1(+)/E7c组、pEGFP-C1/HBD2-E7c组小鼠脾脏脏器指数均明显低于PBS组(均P＜0.01).pEGFP-C1/HBD2-E7c组、pcDNA3.1(+)/E7c组小鼠CD4+、CD8+阳性细胞比例、绝对数均明显高于PBS组(均P＜0.05),pEGFP-C1/HBD2-E7c组、pcDNA3.1(+)/E7c组小鼠CD4+/CD8+比值均明显低于PBS组(均P＜0.05),pEGFP-C1/HBD2-E7c组、pcDNA3.1(+)/E7c组小鼠血清E7抗体水平均明显高于PBS组(均P＜0.01),pEGFP-C1/HBD2-E7c组小鼠血清E7抗体水平明显高于pcDNA3.1(+)/E7c组(P＜0.05).结论 人β防御素-2可明显改善HPV16 E7c基因的免疫原性,提高HPV16E7特异性抗体水平,升高免疫小鼠脾CD4+和CD8+T淋巴细胞数量.     

脂氧素 A4的抗结肠纤维化作用及其机制

目的：观察脂氧素A4（LX A4）的抗结肠纤维化作用,并探讨其机制。方法将32只BALB／C雄性小鼠随机分为4组,每组8只。对照组不造模,仅给予生理盐水灌肠;模型组、CS组、CS／LX A4组建立结肠炎结肠纤维化模型后,分别给予生理盐水、壳聚糖纳米粒、壳聚糖／LX A4纳米粒灌肠。10 d后取结肠组织检测疾病活动指数（DAI）,HE染色法光镜下观察结肠组织组织学损伤指数（HI）,免疫组化法检测结肠组织转化生长因子－β1（ TGF－β1）和Smad3蛋白表达量。结果实验第10天,与对照组比较,其余3组大鼠DAI显著升高（ P＜0．01）;CS／LX A4组大鼠DAI低于模型组,但差异无统计学意义（ P＞0．05）。无论是结肠炎症程度、病变深度,还是隐窝破坏,其余3组结肠组织HI均显著高于对照组（P＜0．05,P＜0．01）,CS／LX A4组均显著低于模型组和CS组（P＜0．05,P＜0．01）。模型组结肠组织TGF－β1、Smad3表达量均较对照组显著升高（P＜0．01）;与模型组比较, CS／LX A4组和CS组结肠组织TGF－β1、Smad3表达量均明显降低（ P＜0．05）,但均显著高于对照组（ P＜0．05）。结论 LX A4可以通过下调TGF－β1和Smad3的表达,减轻炎症反应,进而遏制结肠纤维化的进展。     

VEGF、PCNA及Survivin与膀胱癌病理分级、临床分期的关系

目的探讨膀胱癌肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)、增殖细胞核抗原(PCNA)及Survivin的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测50例膀胱移行细胞癌组织及10例正常膀胱组织中VEGF、PCNA及Survivin蛋白的表达。结果膀胱癌患者肿瘤组织中VEGF、PCNA及Survivin的阳性表达率分别为56.1%(23/41)、56.5%(26/46)和60.0%(27/45),明显高于正常膀胱组织(P<0.01);并随着膀胱癌病理分级和临床分期的增加而升高(P<0.01)。结论 VEGF、PCNA及Survivin的阳性表达与膀胱癌的发生、发展密切相关。     

人β-防御素2联合乙肝疫苗对小鼠免疫效应的研究

目的:探讨人β-防御素2加强乙肝疫苗对小鼠免疫应答的作用。方法:采用乙肝疫苗2μg/次/只联合HBD2基因真核表达质粒pEGF-C1/HBD2 100μg/次/只,按间隔2周、共免疫3次的左后肢股四头肌肌肉接种方案免疫BALB/c小鼠,同时设立相应的对照。免疫后用双抗原夹心ELISA法测小鼠血清HBsAb水平。采用流式细胞仪检测脾脏CD4+T和CD8+T细胞百分率及CD4+/CD8+比值。应用CCK8试剂盒检测脾淋巴细胞在不同抗原刺激下的增殖反应。结果:pEGF-C1/HBD2质粒联合乙肝疫苗免疫小鼠抗体水平明显升高,CD4+T细胞百分率比其他免疫组都高,脾淋巴细胞体外增殖实验明显。与其他各免疫组相比,pEGF-C1空质粒联合乙肝疫苗免疫组抗体水平和淋巴细胞体外增殖情况及CD4+T细胞百分率都较低。结论:人β-防御素-2对乙肝疫苗在小鼠中的免疫功能有一定增强作用。     

间充质干细胞和单个核细胞异种移植治疗大鼠肝损伤的研究

目的:研究小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)和单个核细胞(MNCs)在四氯化碳(CCl4)诱导性大鼠肝损伤治疗中的作用.方法:无菌条件下取雄性Balb/c小鼠骨髓分离MNCs,培养纯化及流式细胞仪筛选获得MSCs;采用CCl4制作雌性Wistar大鼠肝损伤模型,随机分为MSCs移植组、MNCs移植组和肝损伤对照组.2个细胞移植组分别在CCl4损伤后立即经尾静脉注入小鼠MSCs或MNCs,各组分别于移植细胞输入前即刻(T0)、输入后第1(T1)、7(T2)、14(T3)、28(T4)、42(T5)天断尾取血检测丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST).6周后处死大鼠,比较肝脏质量指数,肝病理学切片检测肝损伤程度,PCR检测小鼠Sry基因片段植入大鼠肝脏的情况.结果:MSCs CD44、CD90均表达阳性,而CD45表达阴性;2个细胞移植组在T1-4时点ALT和AST浓度差异有统计学意义(P<0.05);与肝损伤对照组比较,MSCs移植组ALT和AST浓度在T1-4时点均降低;MSCs移植组肝损伤修复程度明显好于MNCs移植组和肝损伤对照组;仅MSCs移植组肝内有小鼠Y染色体阳性细胞存在.结论:体外分离培养及扩增的小鼠MSCs可植入到CCl4诱导性肝损伤大鼠的肝组织中,并改善CCl4导致的肝损伤.