基于基因功能分析的乳酶生与表飞鸣生产用菌株质量比对研究

目的:利用高通量测序和生物信息学技术,从基因组水平上评价、比较微生态活菌制品乳酶生(乳酶生株)和表飞鸣(表飞鸣株)生产用菌株的安全性和有效性,为微生态活菌制品生产用菌株的质量研究、一致性评价等提供依据。方法:以DIAMOND技术为核心,结合个性化数据库构建检索技术,通过序列比对寻找目标基因并分析其功能。结果:乳酶生和表飞鸣生产用菌株均为屎肠球菌,两株菌的基因组间共线性关系较好,存在少量的插入、缺失、倒位和易位等基因重排事件。表飞鸣株在毒力基因、耐药性基因、细菌素基因、生物胺基因、原噬菌体以及移动遗传元件等6个方面的安全性与乳酶生株相似,但是在包括应激反应基因、抗菌/拮抗活性基因、抗氧化活性基因以及附着力基因等益生性功能等方面,表飞鸣株优于乳酶生株。结论:本文初步建立了基于特定基因功能分析的微生态活菌制品生产用菌株质量评价方法,进一步完善了微生态活菌制品的质量研究和质量评价体系。     

乙酰半胱氨酸口服溶液抑菌剂抑菌效力研究

目的对乙酰半胱氨酸口服溶液中所添加的抑菌剂抑菌效力进行确认。方法将金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌和黑曲霉作为挑战菌株,分别加入到抑菌剂含量为处方浓度0、80%、100%和120%的4组乙酰半胱氨酸口服溶液中,在不同时间段检测样品中微生物的存活情况。结果不含抑菌剂的乙酰半胱氨酸不具有充分的抗菌活性,抑菌剂含量为处方浓度80%、100%和120%的乙酰半胱氨酸口服溶液,均可有效抑制微生物的生长繁殖。结论可选择1.95 mg·m L-1的苯甲酸钠和1.49 mg·m L-1的羟苯甲酯钠,复合使用,作为乙酰半胱氨酸口服溶液的抑菌剂。     

氢溴酸加兰他敏口服液添加抑菌剂筛选与抑菌效力研究

目的:探索氢溴酸加兰他敏口服液中抑菌剂的合理添加剂量。方法:根据药物成分的特性,选择若干适宜的抑菌剂,并对不同配比浓度抑菌剂的抑菌效果进行初步考察,筛选出适宜的供试品抑菌剂加入量。选择有代表性的挑战微生物加入供试品中进行挑战试验,测试微生物在不同时间段的存活情况。结果:0.02%的对羟基苯甲酸丙酯与0.02%的对羟基苯甲酸甲酯复合使用对5种挑战微生物的生长有良好的抑制作用,为最低有效剂量。结论:0.02%的对羟基苯甲酸丙酯与0.02%的对羟基苯甲酸甲酯复合使用可作为氢溴酸加兰他敏口服液的抑菌剂。     

基于ITS2序列的翻白草与委陵菜分子鉴定

目的 应用DNA条形码技术对翻白草及易混品委陵菜进行分子鉴定,保障药材质量和临床用药安全。方法 提取翻白草及委陵菜的基因组DNA,扩增内转录间隔区2（ITS2）序列并双向测序,所得序列用SeqMan软件校对、拼接;在线双序列比对翻白草对照药材（F_R）及委陵菜对照药材（W_R）的ITS2序列,并预测其二级结构;从GenBank下载部分相关序列,运用MEGA X软件进行多序列比对,分析序列变异位点,计算种内、种间遗传距离,采用邻接法（NJ）构建系统进化树。结果 所有样品均成功扩增出ITS2序列,翻白草和委陵菜的ITS2序列长度均为210 bp。双序列比对结果表明,F_R与W_R的ITS2序列相似性为92.9%,二级结构存在明显差异。多序列分析结果表明,翻白草ITS2序列平均鸟嘌呤（G）+胞嘧啶（C）占比为63.0%,存在2个变异位点,种内遗传距离为0~0.009 6;委陵菜ITS2序列平均G+C占比为64.4%,存在5个变异位点,种内遗传距离为0~0.019 3;种间遗传距离为0.054 8~0.075 8。NJ树结果显示,翻白草、委陵菜聚为不同分支,可明显区分。结论 利用ITS2序列可以准确鉴别翻白草与委陵菜,为保障其安全用药提供了新的技术手段。     

脑心通片微生物限度检查细菌计数方法的研究

目的：对有特殊抑菌情况的品种脑心通片建立适合的细菌计数方法。方法：采用测定菌回收率的方法，在2005年版药典规定的三种方法验证用细菌的基础上增加一种从样品中污染的细菌中分离纯化得到的菌株Z1进行脑心通片的细菌计数方法学验证。结果：用常规法对脑心通片细菌计数方法进行验证，2005年版药典规定的各试验菌回收率可达到70％以上，但微生物检查结果仍显示样品具有抑菌作用，且Z1的回收率达不到70％。改用培养基稀释法后，2005年版药典规定的各试验菌及Z1的回收率均达到70％以上，微生物检查结果正常。结论：单纯用药典规定的三种细菌试验菌对某些药品进行细菌计数方法验证不具有完全代表性，菌落计数方法验证应该是动态的研究过程。本试验确定的细菌计数方法能有效地消除脑心通片对各种细菌的抑菌作用，充分反映样品被污染情况。     

透明质酸钠眼内植入物细菌内毒素检查

目的建立透明质酸钠眼内植入物细菌内毒素检查法。方法制备供试品的浸提液,确定其细菌内毒素限值,进行干扰试验。结果制成每1 mL含供试品1 mg的浸提液对试验无干扰作用。结论此品可采用细菌内毒素检查法。     

阿奇霉素滴眼液抑菌剂筛选与抑菌效力研究

目的:探索阿奇霉素滴眼液中抑菌剂的合理添加剂量。方法:根据药物成分的特性,选择若干适宜的抑菌剂,并对不同配比浓度抑菌剂的抑菌效果进行初步考察,筛选出适宜的供试品抑菌剂加入量。选择有代表性的挑战微生物加入供试品中进行挑战试验,测试微生物在不同时间段的存活情况。结果:0.003%的苯扎氯铵对5种挑战微生物的生长有良好的抑制作用,且为最低有效剂量。结论:0.003%的苯扎氯铵可作为阿奇霉素滴眼液的抑菌剂。     

甲苯磺酸妥舒沙星滴眼液开封挑战试验

目的:评价甲苯磺酸妥舒沙星滴眼液在开封使用过程中抗环境微生物污染能力。方法:将供试品随机分组,开盖后暴露于普通室内环境,分别在不同时间段随机抽取样品进行微生物限度检查,结合监测到的环境微生物进行结果分析。结果:160支供试品试验前后微生物限度检查结果无显著差异,受环境菌污染而发生的阳性率低于对照组。结论:甲苯磺酸妥舒沙星滴眼液在开封使用期内可有效抵抗环境微生物的污染。     

盐酸消旋山莨菪碱注射液细菌内毒素检测方法的研究

目的建立盐酸消旋山莨菪碱注射液细菌内毒素检查的方法。方法采用不同厂家生产的鲎试剂对不同厂家生产盐酸消旋山莨菪碱注射液进行细菌内毒素检查法的干扰实验。结果供试品1∶8稀释后,对细菌内毒素检查法无干扰作用。结论本品采用细菌内毒素检查法,方法可行。