何首乌醇提物对人正常肝细胞L02的毒性作用及其机制

目的:探究何首乌醇提物(PME)对人正常肝细胞L02的毒性损伤和作用机制,为何首乌合理安全用药提供依据。方法:以PME(5,10,20 g·L^-1)作用于L02细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;Hoechst 33342染色法观察细胞核形态;Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡率;相关试剂盒检测细胞中乳酸脱氢酶(LDH)释放率、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;JC-1法检测细胞线粒体膜电位(MMP)变化;流式细胞术检测活性氧(ROS)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9前体(pro Caspase-9)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3前体(pro Caspase-3)的表达水平。结果:与空白组比较,L02细胞在PME作用下存活率下降,呈时间浓度依赖性;Hoechst 33342染色后荧光下可见细胞核皱缩,碎裂,染色质凝集;Annexin V-FITC/PI双染法结果表明PME20 g·L^-1组凋亡率上升;PME 20 g·L^-1组LDH释放率显著增加(P<0.01),细胞内ROS水平显著上升(P<0.01),SOD活力显著下降(P<0.01),PME 5,10,20 g·L^-1组MMP明显降低(P<0.05)。与空白组比较,随着PME给药组浓度增加,PME 10,20 g·L^-1组pro Caspase-3,pro Caspase-9蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),PME 5,10,20 g·L^-1组Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.01),PME 20 g·L^-1组Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:PME对L02细胞存在毒性损伤作用,可一定程度破坏肝细胞的结构,促进ROS水平升高,诱导氧化应激,激活线粒体途径,活化凋亡通路相关蛋白引起肝细胞损伤,提示ROS介导的线粒体通路参与了PME诱导肝细胞凋亡的过程。     

蛇床子素对L02细胞的毒性作用及其机制研究

目的 探究蛇床子素（osthole,Ost）对L02细胞的毒性损伤和作用机制,为中药蛇床子及其制剂的安全合理应用提供实验依据。方法 以不同浓度Ost作用于L02细胞,MTT法检测细胞活性;乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒测定细胞LDH释放率;Hoechst 33342染色法检测细胞核形态;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot检测Bcl-2、Bax、pro-caspase-3、cleaved-caspase-3（p17）、p-Histon H3（Ser10）的表达。结果 L02细胞在Ost作用下活性下降,LDH释放率提高,且呈浓度依赖;Hoechst 33342染色荧光下可见细胞核皱缩碎裂;AnnexinV/PI双染法结果表明凋亡率随浓度提高而上升。与对照组比较,50,100,200 μmol·L^-1 Ost作用24 h后,Bcl-2、pro-caspase-3、p-Histon H3（Ser10）表达水平降低,Bax、cleaved-caspase-3表达水平升高。结论 Ost对L02细胞有毒性损伤作用,呈一定的时间和浓度依赖性,可促进细胞凋亡,抑制细胞增殖。