双氢青蒿素和氧化苦参碱对HaCaT细胞增殖及细胞因子表达的影响

[目的]探讨双氢青蒿素和氧化苦参碱对人角质形成细胞HaCaT细胞增殖及细胞因子表达的影响.[方法]用0,10,20,30,40 mg/L质量浓度双氢青蒿素和0,50,100,200,400 mg/L质量浓度的氧化苦参碱处理HaCaT细胞,用MTT法检测HaCaT细胞活力,RT-PCR法检测HaCaT细胞炎症相关细胞因子的表达水平,ELISA法检测细胞培养上清液中白细胞介素(IL)-17A和IL-23的表达水平.[结果]双氢青蒿素明显抑制HaCaT细胞增殖(P<0.05),且具有时间和浓度依赖性,而氧化苦参碱对HaCaT细胞增殖未见有明显抑制作用.双氢青蒿素和氧化苦参碱均显著增加HaCaT细胞抑炎性细胞因子IL-4和IL-10的表达(P<0.05),显著降低促炎性细胞因子人干扰素-γ,IL-17,IL-23的表达(P<0.05),同时氧化苦参碱显著增加抑炎性细胞因子IL-6的表达(P<0.05).ELISA法检测结果显示,双氢青蒿素和氧化苦参碱均明显降低细胞培养上清中IL-17A和IL-23的表达水平(P<0.05).[结论]双氢青蒿素和氧化苦参碱可能通过IL-23/IL-17轴影响HaCaT细胞炎性细胞因子的表达,认为有望成为治疗银屑病的新的中药单体.     

浅析提高医学免疫学理论教学效果的方法

<正>医学免疫学是医学生必修的一门基础医学课程,也是医学与生命科学的前沿学科[1]。其理论内容已渗透到生命科学的各个领域,并且免疫学理论与技术的每一次突破和进展,均会极大的促进生命科学和医学的发展。因此,学好这门课程不仅为学生将来从事临床医疗工作提供基础知识和实践技能,而且也为科研工作提供了相应的实验理论和技术[2]。但是,这门课程概念较多、内涵丰富、内容抽象、理论性和系统性强,很多学生感觉难以理解和掌     

免疫金银法检测抗角质蛋白抗体的影响因素

目的:探讨免疫金银法检测抗角质蛋白抗体(AKA)的影响因素。方法:收集AKA阳性的类风湿性关节炎患者血清20份,同时收集20份正常健康者血清作为对照,采用免疫金银法检测上述血清AKA,检测中采用不同的封闭液、不同浓度的金标抗体、不同的显色时间,比较分析不同条件下免疫金银法检测AKA的阳性率及结果易判断程度,以确定较合适的检测条件。同时采用免疫荧光法检测AKA,比较2种方法检测AKA的敏感性。结果:以含10%~20%的羊血清及1%BSA的封闭液、1:80~1:320的金标抗体、10~15 min的显色时间为较合适的检测条件。免疫金银法检测AKA较免疫荧光法敏感性高,且差别有统计学意义。结论:免疫金银法检测AKA对类风湿性关节炎具有较高的敏感性和特异性,临床上用于类风湿性关节炎的辅助诊断具有较高的诊断价值。     

结肠炎相关结直肠癌的发病机制研究进展

炎症性肠病与结直肠癌的发生密切相关。核因子κB和环氧合酶2、前列腺素通路的持续激活,释放促炎细胞因子,增强活性氧和活性氮水平导致炎症反复发作。炎症信号进一步增加氧化应激,促进DNA诱变,导致肿瘤的发生;激活上皮细胞促存活和抗凋亡途径,促进肿瘤的发展;创造肿瘤微环境,支持血管生成、迁移与肿瘤细胞浸润,促进肿瘤进展和转移。本文通过复习文献,主要综述了结肠炎相关结直肠癌的可能发病机制。     

快速斑点酶标法检测抗核抗体

目的建立一种快速、简便的抗核抗体(ANA)检测方法。方法采用快速斑点酶标法(Rapid-DotELISA,R-Dot-ELISA)检测20份ANA阳性系统性红斑狼疮(SLE)患者血清和20份阴性正常健康者血清的ANA。检测中采用不同浓度的核抗原、不同的封闭液、不同浓度的酶标抗体、不同显色时间,摸索最佳检测条件。确定检测条件后,采用R-Dot-ELISA法、ELISA法和免疫荧光法检测190例系统性自身免疫性疾病患者和50例健康者血清的ANA,比较R-Dot-ELISA法与ELISA法和免疫荧光法检测的一致性。结果核抗原浓度为40~160mg/L、封闭液为含1%牛血清白蛋白和10%~20%小牛血清的PBS,酶标抗体稀释度为1∶80~1∶320,显色时间3~5min。R-Dot-ELISA与ELISA法相比,检测结果一致率为95.4%(r=0.907,P0.05),与免疫荧光法相比,检测结果一致率为96.7%(r=0.932,P0.05)。结论 R-Dot-ELISA检测ANA具有较高的敏感性及特异性,且快速、简便,适用于基层流行病学调查和临床快速诊断。     

以教学方法的多样性和灵活性为切入点提高生理学教学质量的思索

在现代医学课程体系中,生理学是一门重要的基础医学理论课程.它以人体解剖学,细胞生物学和组织胚胎学为基础,同时又是药理学、病理学等后续课程的基础,起着桥梁学科的作用.作为一名临床医学系的生理学教师,我的学生将来都会是走向临床的医生,如果他们不具备生理的基本知识,就不能正确认识疾病;同时,生理学的基本理论为他们正确认识和处理临床实际问题提供了极为重要的科学思维方法和研究手段.然而,由于教材内容多,授课时间短,理论性强,且抽象难懂,尽管教师在有限的学时范围内花费了大量的精力,可教学效果仍不尽人意.如何提高生理学教学效果已成为广大生理学教师急需解决的一道难题.在此形势下,改革生理学的传统教学方式已势在必行.     

浙江丽水地区家庭螨类分布情况调查

目的 了解浙江丽水地区家庭螨类常见种类,为防制相关疾病提供基础资料.方法 从丽水地区51个采集点随机采集房舍尘样,在实验室进行螨类分离、鉴定.结果 共采集1 785份样品,螨的检出率为34.51％.检出的主要螨种有9种,其中热带无爪螨的检出率最高,检出率为43.98％；其次为粉尘螨,检出率为15.97％.结论 具有典型山地立体气候的丽水地区房舍螨类种类繁多,尤以热带无爪螨最为普遍.     

杨梅素通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路诱导MTB感染巨噬细胞发生自噬的研究

目的 对杨梅素通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路诱导MTB感染的巨噬细胞发生自噬进行研究,从而探讨杨梅素抗结核作用的机理。方法 用CCK8法检测杨梅素对细胞增殖的影响,确定安全的用药范围;以H37Ra菌株感染的小鼠巨噬细胞Raw 264.7为模型组,并设空白组和药物处理组。按感染复数(MOI,即细菌∶细胞=10∶1)加入模型组、药物处理组,共孵育4h后,磷酸盐缓冲液(PBS)洗3次以弃掉未进入胞内的MTB。药物处理组分别用不同浓度(12.5、25、50、100μmol/L)的杨梅素作用24h, Western blot法检测自噬相关蛋白即“微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和p62”表达水平的变化,并以此筛选出杨梅素促进自噬的最佳作用浓度;100μmol/L杨梅素作用于感染细胞72h后,0.1%聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)冰上裂解细胞10min,菌落形成单位(CFU)法检测巨噬细胞胞内荷菌量;杨梅素作用感染细胞不同时间(30、60、180min)后Western blot测定PI3K/Akt/mTOR信号通路中Akt、mTOR的磷酸化水平。以Image J软件做蛋白定量分析,用GraphPad Prism 7.0制图,采用单因素方差分析(ANOVA)进行统计分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果 杨梅素在100μmol/L浓度以下细胞生存率在90%左右,对细胞毒性较小;Western blot结果显示:与模型组(0.52±0.01)相比,杨梅素不同浓度(12.5、25、50、100μmol/L)处理均能促进LC3Ⅱ的表达(0.59±0.02、 0.65±0.01、 0.71±0.01、 0.83±0.01),差异有统计学意义(t=2.97、P=0.04,t=7.91、P=0.00,t=9.77、P=0.00,t=16.37、P=0.00);而较模型组p62蛋白(0.86±0.02),药物处理亦能抑制p62的表达(0.72±0.01、0.86±0.00、0.60±0.02、0.58±0.01),25μmol/L杨梅素处理组差异无统计学意义(t=0.81、P=0.46),12.5、50、100μmol/L处理组差异均有统计学意义(t=6.50、P=0.00,t=9.53、P=0.00,t=12.01、P=0.00);杨梅素促进自噬的最佳药物浓度为100μmol/L;100μmol/L杨梅素作用于感染细胞72h后,对胞内MTB的抑制率为21.02%;模型组细胞在MTB感染后30、60、180min时,PI3K/Akt/mTOR通路中Akt蛋白的磷酸化(p-Akt)水平(1.23±0.01、1.52±0.01、0.74±0.02)明显增加,而杨梅素作用相同的时间后,可明显抑制Akt蛋白的磷酸化(0.99±0.01、0.96±0.01、0.43±0.01),差异有统计学意义(t=27.60、P=0.00,t=30.06、P=0.00,t=18.60、P=0.00);而模型组磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白水平仅在MTB感染后180min(0.57±0.00)明显增加(t=94.61、P=0.00),杨梅素作用180min亦能抑制mTOR蛋白的磷酸化(0.46±0.01),差异有统计学意义(t=21.60、P=0.00)。结论 杨梅素通过抑制Akt和mTOR蛋白的磷酸化来抑制PI3K/Akt/mTOR通路,从而诱导MTB感染的巨噬细胞发生自噬来杀灭胞内的MTB。     

恒河猴IL-4与变异IL-4促进外周血单核细胞向树突状细胞转化功能的比较

 【目的】比较重组的恒河猴IL-4与变异IL-4在促进外周血单核细胞向树突状细胞转化方面功能的异同。【方法】 利用葡聚糖-泛影葡胺梯度离心法分离恒河猴外周血单个核细胞,阴性筛选非CD3+细胞,随后贴壁分离外周血单核细胞并进行流式细胞技术确定筛选结果。将所分离的外周血单核细胞分为阴性对照组,IL-4+GM-CSF组和vIL-4+GM-CSF组进行体外培养,收集细胞并表面染色CD14、CD1a、CD11c和CD83进行流式细胞分析。【结果】 利用三步分离的方法得到了纯度达90%的未激活的外周血单核细胞。培养后的细胞进行流式分析,结果提示与阴性对照组相比,IL-4+GM-CSF组和vIL-4+GM-CSF组细胞的CD14表达明显下降,而CD1a、CD11c和CD83表达明显上调,两实验组间无差别。【结论】 与IL-4相同,vIL-4亦能促进外周血单核细胞转化为树突状细胞。