疟原虫和其他病原体混合感染的研究进展

疟疾是一类在热带和亚热带地区非常流行的疾病,混合感染现象在疟疾流行区普遍存在。能够引起混合感染的病原体种类很多,其中比较常见的有HIV、结核分枝杆菌、血吸虫和钩虫。本文就疟疾和HIV、EB病毒,疟疾和蠕虫,以及疟疾和细菌的混合感染作一综述。     

卫氏并殖吸虫成虫的组织化学观察

本文对卫氏并殖吸虫体内16种组化物质的定位和分布进行了观察。研究结果表明:糖原颗粒在虫体内的实质组织中最丰富,特别是在各脏器周围的实质组织中更为显著。蛋白质、RNA和DNA则以生殖器官和卵黄腺内含量最多。脂肪在肠壁和肠内容物中反应最明显,在卵黄腺、卵巢和卵内可见均匀分布的脂滴。MAO主要分布在皮层、皮下、实质组织及肠上皮内;     

双歧杆菌完整肽聚糖对汉坦病毒核蛋白诱导细胞免疫应答的影响

目的探讨双歧杆菌完整肽聚糖作为佐剂对汉坦病毒核蛋白(HTNV-NP)诱导细胞免疫应答的影响。方法提取双歧杆菌完整肽聚糖(WPG),并将其与HTNV-NP混合后免疫BALB/c小鼠。于加强免疫后4周,检测小鼠NK细胞和CTL的杀伤活性、淋巴细胞增殖反应,采用ELISA法检测IL-2和IFN-γ分泌水平,同时观察WPG的安全性。结果注射HTNV-NP组和注射HTNV-NP+WPG组小鼠NK细胞活性、CTL细胞毒活性、淋巴细胞增殖反应刺激指数(SI)以及IL-2、IFN-γ的分泌水平分别为(5.16±1.34)%(、28.46±4.16)%、1.7(、89.65±7.63)pg/ml(、245.68±56.74)pg/ml和(9.85±0.87)%(、43.29±5.54)%、3.1、(204.48±36.17)pg/ml、(473.29±74.94)pg/ml,差异有显著性(P<0.01)。其间小鼠未出现明显不良反应。结论WPG可显著增强HTNV-NP的细胞免疫应答,是良好的疫苗佐剂。     

大平并殖吸虫后尾蚴的扫描电镜观察

大平并殖后尾蚴在扫描电镜下体表及吸盘上密生单生棘。口吸盘及腹吸盘上各具有两圈感觉乳突。体表除散在有感觉乳突外,在腹面两外侧各具有一排对称性感觉乳突。     

MultiSite Gateway技术在疟原虫条件性基因打靶载体快速构建中的应用

目的构建可条件性敲除约氏疟原虫ebl基因的打靶载体。方法以约氏疟原虫基因组DNA为模板,PCR扩增EBL-3U和EBL-5U1、EBL-5U2+EBL.orf同源臂片段,利用MultiSite Gateway技术,完成若干DNA片段的定性重组,构建打靶载体pCHD-EBL-RFT,并对质粒酶切和测序鉴定。PCR扩增约氏疟原虫UIS4-5U片段,置换质粒PbUIS4/flp中原有同源臂,并通过位点特异突变技术,获取AvrII和NheI两种线性化位点,构建插入载体PyUIS4/flp。结果构建出打靶载体pCHD-EBL-FRT和PyUIS4/flp,酶切鉴定和测序分析正确。结论将MultiSite Gateway技术成功地用于疟原虫条件打靶载体的构建,建立了以MultiSite Gateway技术为基础的打靶载体构建体系。     

疟疾传播媒介斑须按蚊唾液腺cDNA表达基因库的构建及原基因的筛选

目的为寻找编码按蚊唾液腺分泌性蛋白质的基因.方法应用RNeasy试剂盒提取斑须按蚊唾液腺总RNA;OrientExpressTMOligo(dT)cDNALibraryConstruction系统反转录合成双链cDNA,修饰后加上EcoRⅠ/HindⅢlinker,经酶切、大小分馏后,与λSCREEN-1臂相连,体外包装为λ噬菌体颗粒,构建成cDNA表达文库;在感染大肠杆菌ER1647后,检测cDNA表达文库的大小;应用兔抗唾液腺蛋白血清对部分文库进行免疫筛选,并将含cDNA片段的阳性λSCREEN克隆株转化成pSCREEN质粒,经EcoRⅠ/HindⅢ消化后,分析cDNA片段.结果cDNA表达文库容量为4×106/pfu.应用抗唾液腺蛋白血清筛选,获得3个阳性克隆株,酶切后cDNA片段的长度约为500pb.结论已筛选到与抗唾液腺蛋白的免疫血清反应的阳性克隆株,而且获得编码唾液腺蛋白抗原的基因片段,并将其转入pSCREEN质粒中,为进一步研究蚊唾液腺内编码分泌性蛋白质基因的作用奠定了基础.     

多重PCR 系统的建立及其在社区型甲氧西林耐药性金黄色葡萄球菌中PVL噬菌体分型中的应用

 目的从基因组型和表型两方面解析从医院环境中分离出的社区型甲氧西林耐药性金黄色葡萄球菌（MRSA）,对携带杀白细胞素（ PVL）基因的MRSA 中的PVL 溶原噬菌体进行分型。方法聚合酶链式反应（PCR）解析菌株所携带的SCC_mec 基因岛型及PVL毒素基因;凝固酶试验测定菌株的凝固酶型;设计8 组PCR 反应组合检测PVL溶原噬菌体型。结果36株菌株所携带的SCC_mec 基因岛分型多样化。携带郁c 型SCCmec 的菌株占多数,为16 株（44.4%）,其次为携带域型SCC_mec 的菌株,为10 株（27.8%）。各菌株所携带的SCC_mec 型别与菌株的凝固酶分型高度一致。经多重PCR 检测,6 株PLV阳性菌株所携带的PVL 噬菌体型分别为ψ108PVL型（3 株）,_ψ 2958PVL 型（1株）和_ψ Sa2mw 型（2 株）。结论院内分离的社区型MRSA的基因型和表型多样化,PVL噬菌体分型的多重PCR系统具有可应用性,应用此系统对鉴别具有异构六角形头部和伸长形头部的PVL 溶原噬菌体有意义。     

吡喹酮对卫氏并殖吸虫作用的组织化学观察

为了进一步探讨吡喹酮对卫氏并殖吸虫杀虫机理。我们对感染卫氏并殖吸虫病犬。一次ig吡喹酮150mg/kg.于药后1～48h取虫。应用组织化学方法观察吡喹酮对虫体的组化物质的影响。结果表明:给药后1～6h,虫体内16种组化物质均未见变化。给药后12h,其中部分组化物质出现变化。1.糖原:给药后12h,部分虫体内的糖原开始减少。尤以卵黄腺周围的实质组织为甚。给药后36～48h,大部虫体断面糖原     

抗汉坦病毒核衣壳蛋白单链抗体基因的克隆与鉴定

目的将已筛选出的抗汉坦病毒核衣壳蛋白（NP）抗原单链抗体基因克隆入原核表达载体pGEX-6p-1,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-scFv。方法提取含抗NP抗原单链抗体基因的T7噬菌体DNA,此为模板,PCR扩增单链抗体基因,BamHI和SalⅠ双酶切,经连接酶与BamHⅠ和SalⅠ双酶切的表达载体pGEX-6p-1连接;重组DNA转化入宿主菌E．coli BL-21（DE3）,琼脂糖凝胶电泳初筛选阳性重组质粒,并用PCR法、双酶切法及DNA测序鉴定。结果重组质粒pGEX-6P-1-scFv经BamHⅠ和SalⅠ双酶切,片段大小分别为5000bp和750bp,与预期值一致;重组质粒PCR产物大小为750bp,与预期值一致;测定重组质粒序列,并与scFv序列比较,结果相一致。抗NP单链抗体基因序列克隆人表达载体pGEX-6p-1。结论成功构建了含抗汉坦病毒NP抗原单链抗体基因的重组原核表达质粒pGEX-6P-1-SCFv。     

免疫-PCR早期诊断肾综合征出血热的研究

目的 建立一种敏感、特异的肾综合征出血热(HFRS)早期诊断方法。方法 应用免疫-PCR方法检测不同病程、临床诊断为HFRS的患者血中抗HFRS-IgM抗体，同时与ELISA和IFAT二种方法进行比较。结果 免疫-PCR检测96份HFRS患者血清中抗HFRS-IgM抗体的阳性率为76％，对51份发热期患者的阳性检出率为62．7％。而ELISA法和IFAT法对同批患者的阳性检出率分别为57．3％和39．2％，及49％和31．4％。20份甲型肝炎阳性血清、30份正常人血清及20份HFRS-IgM阴性并掺入类风湿因子阳性的血清，免疫-PCR检测均为阴性。结论 免疫-PCR检测抗HFRS-IgM抗体敏感性高，特异性强，可作为HFRS早期诊断方法。