慢性乙型肝炎和肝病中Fas和FasL表达的原位研究

目的了解慢性乙型肝炎和肝病时介导凋亡的Ｆａｓ／ＦａｓＬ表现。方法以免疫组化法原位检查各种慢性肝病４５例的活检肝组织。结果肝内浸润的淋巴细胞中检出ＦａｓＬ，肝细胞Ｆａｓ／ＦａｓＬ表达与炎症活动性一致，多分布在界面性炎症区。肝细胞表达ＦａｓＬ，可能也发挥细胞毒效应。结论新的发现是ＦａｓＬ可在肝细胞结节和肝癌细胞表达，提示有细胞毒效应的ＦａｓＬ在ＨＢ相关慢性肝病中有发病学意义。肝癌细胞中未检出Ｆａｓ而检出ＦａｓＬ，可能是一种肿瘤逃避免疫攻击的机制     

原位杂交检测肝病患者肝组织中TTV DNA及其与病变的关系

采用ｃＤＮＡ探针，用原位杂交法对１５例病原不明肝炎和４４例慢性乙型肝炎肝组织标本进行ＴＴＶ ＤＮＡ检测，同时用巢式多聚酶链反应法检测其血清中ＴＴＶ ＤＮＡ，结合两组患进肝脏酶学改变、肝组织、ＨＡＩ积分以及慢性乙型肝炎中层得血清的ＨＢＶ ＤＡＮ水平进行分析。     

环氧合酶-2对鼻息肉炎症形成的作用研究与探讨

目的：检测研究环氧合酶-2在鼻息肉病、一般鼻息肉组织中的表达水平及其分布情况，深入认识鼻息肉炎性发病机制。方法：利用免疫组化染色以及逆转录-聚合链反应(RT-PCR反应)检测13例鼻息肉病、22例一般鼻息肉及23例下鼻甲标本的环氧合酶-2的表达。结果：环氧合酶-2主要分布于鼻息肉粘膜上皮、粘膜下腺体、血管内皮细胞以及炎性细胞的胞浆或胞膜，呈胞浆膜型及包涵体型。鼻息肉病组织中COX-2表达明显高于下鼻甲，又高于一股鼻息肉。结论：鼻息肉病组织中COX-2表达明显增高，鼻息肉以及鼻息肉病的发病过程中有前列腺素参与。     

Investigation of sporadic hepatitis E in Guangzhou City

To identify the etiology of non-A,non-B,non-C hepatitis,23 such patients succes-sively admitted in our hospital during 1988～1992 were investigated using an enzyme immunoas-say kit with two recombinant hepatitis E virus(HEV)antigens from Genelabs(Redwood City,CA.USA).Anti-HEV-IgG was detected in 18 cases of them.The disease was diagnosed as hep-atitis E.All 18 patients were Guangzhou residents.This is one of the first reports on the pres-ence of sporadic hepatitis E in a metropolis beyond the endemic areas.The present observationshowed that sporadic hepatitis E occurred out of season and was unlike the epidemic form in Xin-jiang.Fifteen of 18 patients aged from 20 to 50 years,suggesting that it usually prevailed amongthe young-to-middle-aged adults.The ratio of male to female was 14 to 4.The ratio of icterictype to anicteric type was 16 to 2.The jaundice of 16 icteric patients disappeared in 24.6 days(range,14～60 days).The average alanine aminotransferase level was 806 IU/L(range,74～1676 IU/L),which declined to normal in 30.4 days(range,19～77 days).All patients recov-ered completely in 4.7 weeks.This report also indicated that the course of sporadic hepatitis E,as of epidemic form,is self-limiting and has no chronic sequelae.     

表达CD95L的HepG2细胞自分泌和旁分泌的细胞毒效应

背景和目的清除感染ＨＢＶ的肝细胞主要由免疫细胞经ＣＤ９５途径,我们发现乙型肝炎时肝细胞可表达细胞毒效应分子ＣＤ９５Ｌ,为阐明其效应机制。方法ＨｅｐＧ２细胞诱导表达ＣＤ９５Ｌ,与ＨｅｐＧ２．２．１５细胞共培养;或以其培养上清液加于另一份未经诱导的ＨｅｐＧ２细胞中,以流式细胞仪检测后者的凋亡率;又以单个ＨｅｐＧ２细胞培养试验其自体凋亡。结果表达Ｃｈ９５Ｌ的ＨｅｐＧ２细胞杀伤表达ＣＤ９５的ＨｅｐＧ２．２．１５细胞,２４ｈ凋亡１６．５％,４８ｈ４３．０％;培养上清液引起的凋亡２４ｈ３８．７％,４８ｈ７３．３％,单个ＨｅｐＧ２细胞经诱导后的自杀率２４ｈ４３．８％,均高于对照。结论ＨｅｐＧ２细胞以其ＣＤ９５Ｌ的膜性或可溶性分子,经自分泌或旁分泌发生“自杀”或“同胞相杀”。     

新型无包膜DNA病毒恒河猴实验性感染的组织嗜性研究

目的：探讨恒河猴实验感染新型无包膜DNA病毒（TTV）的组织嗜性。方法：实验感染的恒河猴在病毒血症期间杀死5只，取组织，用聚合酶链反应（PCR）产物进行病毒半定量，并用原位杂交、负义探针斑点杂交和杂交／核酸保护试验，检查复制型病毒DNA分子。结果：肝、外周血单个核细胞（PBMC）和血清病毒含量（电泳带密度）依次为50．1％、31．0％和18．9％，相对比为2．65：1．64：1．00。肝、脾、胃、小肠各段及其淋巴结、PBMC、结肠和血清均可检出病毒，但正链病毒DNA（假定的病毒复制中间体），只稳定存在于肝、脾、小肠和淋巴样细胞中。结论：这一病毒具肝、小肠和淋巴样细胞嗜性，可解释其多途径传播。     

聚乙二醇干扰素α－2a 治疗 HBeAg 阴性慢性乙型肝炎的疗效及影响因素

目的：观察聚乙二醇干扰素（PEG －IFN）α－2a 治疗 HBeAg 阴性慢性乙型肝炎（CHB）患者的疗效及其影响因素。方法收集2009年5月－2012年12月在南方医科大学南方医院感染内科就诊的 HBeAg 阴性的 CHB 患者103例,给予 PEG －IFNα－2a 135μg 治疗,平均疗程为13个月,治疗后随访48周,在治疗及随访期间每3个月检查肝功能、HBV DNA 定量。组间频数比较采用χ2检验,均数比较采用 t 检验,采用二分类多元 Logistic 回归法分析疗效的影响因素。结果103例患者治疗结束时,取得联合应答者84例,联合应答率为81．6％。随访过程中复发33例,复发率为39．3％,治疗后随访1年持续应答患者49例,持续应答率47．6％。经单因素和多因素分析,抗－HBe 阳性是唯一的与持续应答相关的独立影响因素（OR ＝3．69,P ＝0．013）,HBV DNA 定量、HBV 基因型、前 C ／BCP 区变异、肝脏病理等其他治疗前基线特征与持续应答无相关性。结论PEG －IFNα－2a 治疗 HBeAg 阴性 CHB 能够取得较好的疗效,但复发率较高;抗－HBe 阳性患者的持续应答率较高。     

肽核酸钳制PCR早期检测乙型肝炎病毒YMDD耐药变异

目的建立乙型肝炎病毒肽核酸钳制PCR(PNA-PCR)耐药监测方法,以提前监测乙型肝炎病毒YMDD耐药株的产生。方法选取rtM204(IATT)、rtM204V(GTG)突变型质粒与野生型质粒rtM204(ATG)按照不同比例混合后,用PNA-PCR法及直接测序法对耐药位点进行检测,评价两种方法的灵敏度及特异性;选取临床耐药检测患者血清标本85例,采用PNA-PCR法及直接测序法进行耐药检测,比较两种方法的耐药检出率。结果 PNA-PCR法可在105倍野生型YMDD基因背景下检测出突变,灵敏度为0.001%,可检测到最低限为101拷贝。而直接测序法可检测的基因突变的最低极限为104拷贝,检测灵敏度为10%。85例临床耐药检测患者中,PNA-PCR法YMDD检测阳性率为85.9%(73/85∶YIDD∶40,YVDD∶23,YIDD+YVDD∶10),而PCR产物直接测序法检阳性率仅为40%(34/85∶YIDD∶21,YVDD∶11,YIDD+YVDD∶2)。阴性对照,两种方法均未测出HBV病毒,两种方法的特异性均较好。结论 PNA-PCR方法在灵敏度及特异性上均优于直接测序法,而且操作简便,快捷,在科研和临床上都有很好的应用前景。     

一种新型DNA病毒(TTV)对恒河猴的实验感染

1材料和方法收集潜伏期病人粪便，st0．01mol／LPBS液制成20o粪提取液，静脉（10mU只）和灌胃（20mU，qW种恒河猴，再以阳性报粪便经0传优．以一只猴淮阴性粪便法并行检测对照．每日收集粪便和隔日血液标本1周，继每周粪便，每月血液一次6个月．2只灌胃的猴在第48手术，第78杀死，另2，R＄4t种后6个月时手术，收集胆汁、肝脏和上中下3处空伍组织．rtPCR检测猴血液和粪便，原位杂交检测活俭或杀死税的空助和肝内的病毒．2结果与讨论静脉接种猴4-7d后血液检出病毒，几乎同时粪便也检出病毒。口服接种猴当B粪便检出病毒，可能是排出的接种…     

乙型肝炎病毒核壳蛋白变异株在HepG2细胞的HLA-Ⅰ表达

目的:研究HBV adr亚型野生株和核壳蛋白变异株在HepG2细胞表面的HLA-Ⅰ/抗原肽复合物的表达.方法:通过定点突变技术将1.2拷贝HBV野生型质粒p3.8Ⅱ构建成核壳蛋白变异株V60和L97.经序列测定和生物学活性检测后,野生株和变异株重组质粒分别亚克隆入EB病毒表达载体EBO-plpp以稳定表达.重组载体EBO-野生株、EBO-V60和EBO-L97分别作内切酶双酶切和序列测定鉴定,再用脂质体介导转染HepG2细胞,ELISA(Abbott)试剂盒定量检测各株培养上清HBV抗原,转染细胞用FITC标记的鼠抗HLA-ABC单抗染色,流式细胞术分析细胞表面HLA-I表达.结果:3株重组载体经内切酶消化,电泳后显示2条区带,分别与1.2拷贝HBV基因组和EBO载体大小相同.测序结果证实EBO-V60和EBO-L97分别在nt2078 C→G和nt2189 A→C,保持原定点突变.EBO-野生株的培养上清HBeAg定量S/CO值明显高于变异株V60和L97,3株HBsAg定量S/N值接近,HBsAg表达相近表明实验的转染效率相当.EBO空载体转染的HepG2细胞HLA-I轻微表达,3株重组载体转染细胞HLA-I的荧光强度不同,野生株增强为18.2,L97明显升高至34.5,而V60降低至3.4.结论:HBV能增强HepG2细胞表面HLA-I/抗原肽复合物的表达,核壳蛋白热点变异V60和L97可使宿主细胞HLA-Ⅰ表达发生变化.