凉血通瘀方干预高血压大鼠急性脑出血模型对脑组织中差异miRNA表达的影响＊

目的 研究凉血通瘀方对高血压大鼠急性脑出血模型脑组织miRNA表达的影响，对差异表达的miRNA靶基因进行分析，探索凉血通瘀方可能的药效机制。方法 将自发性高血压大鼠随机分成对照组（B）和实验组（C）。适应性饲养一周后，C组灌胃凉血通瘀方，B组灌胃等体积生理盐水，连续5天，每天1次。构建脑出血模型后收集脑组织，借助全转录组测序技术获得miRNA表达量，与miRBase数据库比对获取已知miRNA，使用miRDeep2预测新miRNA。差异分析软件为DESeq2，筛选阈值为|log₂FC| ≥1 并且P <0.05。对显著差异表达的miRNA进行靶基因预测，对靶基因进行GO功能、KEGG通路富集和PPI网络分析。结果 实验组和对照组对比，共发现21个显著差异表达的miRNA，上调有9个，下调有12个，共预测得到1243个有统计学意义的靶基因。GO富集分析发现，生物过程中突触囊泡分泌的调节、神经递质分泌的调节和神经递质运输的调节占前三位，神经元投射终点、全膜、质膜区域和细胞投射则是主要的细胞成分。分子功能分别为小GTPase绑定、底物特异性跨膜转运蛋白活性和离子跨膜转运体活性。通路分析结果显示，靶基因在癌证通路、pI3K-Akt信号通路、人类乳头瘤病毒感染、神经活性配体-受体相互作用和MAPK通路等分布广泛。采用STRING网站和Cytoscape软件，根据MCC算法筛选出ADRA2C、CASR、CCL28、CCR1、DRD2、GNAT3、GRM2、DYNC1LI1、GABBR1、GNAI1等核心靶基因。结论 凉血通瘀方对脑出血急性期鼠脑组织内miRNA的表达有重要影响；显著差异表达miRNAs可能通过靶向核心基因调控凉血通瘀方干预急性脑出血的病理过程及预后。     

蒙药安神补心六味丸预防给药对心肌缺血大鼠的保护作用及氧化应激水平的影响＊

目的 研究蒙药安神补心六味丸对大鼠心肌缺血损伤的保护作用和氧化应激机制。方法 将60只大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组（丹参滴丸）及蒙药安神补心六味丸低、中、高剂量组，使用腹腔注射异丙肾上腺素方法制备大鼠急性心肌缺血模型，记录并观察大鼠心电图活动变化，然后进行腹主动脉取血，分离血清，测定乳酸脱氢酶（Lactic dehydrogenase，LDH）、肌酸激酶（Creatine kinase，CK）、磷酸肌酸激酶（Creatine kinase isoenzyme，CK-MB）、谷草转氨酶（Aspartate aminotransferase，AST）、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（Malondialdehyde，MDA）和谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-PX）含量变化。取心肌组织固定，对大鼠心肌组织进行HE染色，通过对心肌酶学和和心肌组织形态学两个方面来考察蒙药安神补心六味丸对大鼠心肌缺血模型的保护作用。结果 与空白组比较，模型组大鼠血清中LDH活性极显著升高（P<0.01），CK、CK-MB、AST、MDA活性均显著升高（P<0.05），SOD活性显著降低（P<0.05），GSH-PX活性高度显著降低（P<0.001），且差异均具有统计学意义；与模型组比较，蒙药安神补心六味丸组高剂量组大鼠血清中LDH、CK、CK-MB、MDA活性显著降低（P<0.05），SOD活性显著升高（P<0.05），GSH-PX活性极显著升高（P<0.01），且差异均具有统计学意义。从HE染色分析，蒙药安神补心六味丸能够改善因缺血而造成的心肌组织损伤。结论 蒙药安神补心六味丸能有效改善心肌组织病理状态，减轻大鼠心肌缺血损伤，以达到保护心肌作用，机制可能与氧化应激机制相关。     

加味香砂六君子汤对胃癌大鼠的实验研究

目的:探究并分析加味香砂六君子汤通过抑制Wnt信号通路对胃癌大鼠桩蛋白(paxillin)、大鼠凋亡相关蛋白(RelA)表达的影响。方法:选取健康成年Wistar大鼠120只,按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组60只,对2组大鼠进行胃癌造模处理,对照组大鼠又随机分为未处理组、处理(生理盐水)后8周组、处理(生理盐水)后12周组,每组20只。观察组大鼠又随机分为未处理组、处理(汤药)后8周组、处理(汤药)后12周组,每组20只。观察2组大鼠处理前、处理后8周、处理后12周paxillin、RelA。结果:2组大鼠处理前后体质量差异有统计学意义(P<0.05),2组大鼠处理前体质量比较差异无统计学意义(P>0.05),处理后,2组大鼠体质量有所降低,但观察组大鼠降低程度明显小于对照组(P<0.05);2组大鼠处理前后wnt-1、paxillin、RelA水平差异有统计学意义(P<0.05),2组大鼠处理前wnt-1、paxillin、RelA水平比较差异无统计学意义(P>0.05),处理后,2组大鼠wnt-1、paxillin、RelA水平呈降低趋势,但观察组大鼠wnt-1、paxillin、RelA水平明显小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:加味香砂六君子汤能有效通过抑制wnt以降低胃癌大鼠paxillin、RelA的表达。     

当归饮子对血虚风燥型湿疹模型幼鼠的影响及作用机制＊

目的 研究当归饮子对血虚风燥型湿疹模型幼鼠的影响并探讨其作用机制。方法 采用2，4-二硝基氯苯（DNCB）、乙酰苯肼（APH）结合物理刺激制备血虚风燥湿疹模型，50只SD大鼠随机分为空白组、模型组、当归饮子高剂量组（30 g·kg^-1）、当归饮子低剂量组（15 g·kg^-1）、地氯雷他定组（0.8 mg·kg^-1），连续灌胃15天。观察幼鼠体重、脾脏指数、胸腺指数；通过湿疹皮损评分、HE染色组织病理学改变评价当归饮子对血虚风燥湿疹的治疗效果；采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清γ-干扰素（IFN-γ）、白介素-4（IL-4）、免疫球蛋白E（IgE）、白三烯B4（LTB4）、白三烯C4（LTC4）含量；采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测皮肤组织半胱氨酰白三烯受体1（CysLTR1）和半胱氨酰白三烯受体2（CysLTR2）表达水平，以探索当归饮子治疗血虚风燥湿疹的作用机制。结果 与正常组相比，模型组幼鼠体重明显减轻（P<0.05），脾脏指数增大、胸腺指数减小（P<0.05）；幼鼠背部出现红斑、糜烂、渗出、水肿、鳞屑等皮损；病理学呈现大量中性粒细胞浸润、表皮海绵水肿、角化过度伴角化不全；IFN-γ水平下降（P<0.05），IL-4、IgE、LTB4、LTC4水平及皮肤CysLTR1和CysLTR2受体表达水平上调（P<0.01）。与模型组相比，当归饮子高、低剂量组及地氯雷他定组体重均明显上升（P<0.05），脾脏指数减小、胸腺指数增大（P<0.05）；皮损均明显改善（P<0.05），病理改变呈表皮炎症消失，真皮乳头水肿消失；IFN-γ水平显著上升（P<0.05），IL-4、IgE、LTB4、LTC4水平明显下降（P<0.05）；皮肤CysLTR1和CysLTR2受体表达水平均明显下降（P<0.05），其中以当归饮子高剂量组最为明显（P<0.05）。结论 当归饮子治疗血虚风燥型湿疹模型幼鼠疗效明显，机制可能与其调控湿疹幼鼠Thl／Th2失衡、下调血清LTB4、LTC4水平及皮肤CysLTR1、CysLTR2受体表达水平有关。     

Biofunctionalized peptide-based hydrogel as an injectable scaffold for BDNF delivery can improve regeneration after spinal cord injury

Background

The complex pathophysiological events occurring after traumatic spinal cord injuries (TSCI) make this devastating trauma still incurable. Peptide amphiphile (PA) hydrogels are nanobiomaterials displaying desirable properties for application in regenerative medicine because they are absorbable, injectable, allowing biofunctionalization, controlling release of trophic factors and mimic extracellular matrix (ECM). In this study, we explored the potentiality of the IKVAV-functionalized PA hydrogel to provide a permissive environment for cell migration and growth as well as sustained release of BDNF at the lesion after severe compression injury model.

痛记忆模型大鼠ACC脑区蛋白质组学研究及电针干预

目的:采用蛋白质组学方法筛选痛记忆模型大鼠ACC脑区差异蛋白,并进一步筛选与电针干预痛记忆可能相关的差异蛋白,为电针干预痛记忆的深入研究提供理论支持。方法:将18只健康雄性SD大鼠随机分为空白组(生理盐水对照组)、模型组和电针组,每组6只。模型组及电针组大鼠通过二次角叉菜胶足跖注射建立痛记忆模型。对照组注射同等剂量的生理盐水。电针组于首次注射后5 h、1～5 d进行电针治疗。模型组与空白组仅作与电针组相同的束缚处理。分别检测3组大鼠造模前,首次注射后4 h、5 d和二次注射后4 h、72 h的机械痛阈。二次注射后第3天,大鼠处死后取ACC脑组织。以双向凝胶电泳分离,双向电泳后经不同波长光激发扫描得到不同样品的蛋白质组图谱,经Image Master2D 6. 0软件进行分析后,筛选相差在1. 5倍以上的蛋白作为差异表达的蛋白质,并进行质谱鉴定。结果:1)与空白组比较,模型组二次未注射角叉菜胶足跖痛阈显著下降(P 0. 05);与模型组比较,电针组二次未注射角叉菜胶足跖痛阈显著上升(P 0. 05)。2)经蛋白质组学分析共筛选出18个差异蛋白质。其中模型组有明显差异者有11个,4个表达呈现下调,分别为微管蛋白α-1A链、DAB2相互作用蛋白、NADH脱氢酶的辅酶黄素蛋白2、转凝蛋白-3; 7个表达呈现上调,分别为微管蛋白β-3链、肌动蛋白1、磷酸甘油酸激酶1、类固醇激素合成急性蛋白、肌动蛋白2、细胞色素c氧化酶6A1亚基、泛素40S核糖体蛋白S27a。与空白组比较,电针组有明显差异者有15个,3个表达呈现下调,分别为微管蛋白α-1C链、Rho GDP解离抑制因子、NADH脱氢酶的辅酶黄素蛋白2; 12个表达呈现上调,分别为微管蛋白β-2A链、微管蛋白β-3链、肌动蛋白1、乌头酸水合酶、丙酮酸激酶同工酶、异柠檬酸脱氢酶、磷酸甘油酸激酶1、Ras相关Rab-19蛋白、类固醇激素合成急性蛋白、肌动蛋白2、细胞色素c氧化酶6A1亚基、泛素40S核糖体蛋白S27a。电针组与模型组比较后呈现明显差异的有8个差异蛋白,2个呈现下调,分别是Rho GDP解离抑制因子、肌动蛋白2。6个呈现上调,分别是微管蛋白α-1A链、微管蛋白β-2A链、DAB2相互作用蛋白、乌头酸水合酶、异柠檬酸脱氢酶、Ras相关Rab-19蛋白。结论:经蛋白质组学分析发现,有11个差异蛋白参与痛记忆的唤醒过程;有8个差异蛋白参与电针干预痛记忆的过程。提示电针对痛记忆的干预可能与稳定神经细胞骨架蛋白,进而抑制神经突触可塑性改变有关。     

Suckling in litters with different sizes,and early and late swimming exercise differentially modulates anxiety-like behavior,memory and electrocorticogram potentiation after spreading depression in rats

Objective: Analyze the hypothesis that swimming exercise, in rats suckled under distinct litter sizes, alters behavioral parameters suggestive of anxiety and recognition memory, and the electrocorticogram potentiation that occurs after the excitability-related phenomenon that is known as cortical spreading depression (CSD).

Methods: Male Wistar rats were suckled in litters with six or 12 pups (L₆ and L₁₂ groups). Animals swam at postnatal days (P) 8–23, or P60–P75 (early-exercised or late-exercised groups, respectively), or remained no-exercised. Behavioral tests (open field – OF and object recognition – OR) were conducted between P77 and P80. Between P90 and P120, ECoG was recorded for 2 hours. After this ‘baseline’ recording, CSD was elicited every 30 minutes over the course of 2 hours.

Results: Early swimming enhanced the number of entries and the percentage of time in the OF-center (P?<?0.05). In animals that swam later, this effect occurred in the L6 group only. Compared to the corresponding sedentary groups, OR-test showed a better memory in the L6 early exercised rats, and a worse memory in all other groups (P?<?0.05). In comparison to baseline values, ECoG amplitudes after CSD increased 14–43% for all groups (P?<?0.05). In the L₆ condition, early swimming and late swimming, respectively, reduced and enhanced the magnitude of the post-CSD ECoG potentiation in comparison with the corresponding L₆ no-exercised groups (P?<?0.05).

Discussion: Our data suggest a differential effect of early- and late-exercise on the behavioral and electrophysiological parameters, suggesting an interaction between the age of exercise and the nutritional status during lactation.     

基于PI3K/AKT信号通路的谷红注射液抗H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的机制研究

目的基于PI3K/AKT信号通路,探讨谷红注射液(guhong injection,GHI)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用。方法培养H9c2心肌细胞,CCK-8比色法筛选GHI实验剂量。将细胞随机分为8组:正常组、模型组、GHI低、中、高剂量组(30、60和90μL·mL^-1)、阳性药组(维拉帕米注射液7.5μL·mL^-1)、GHI+LY294002(PI3K抑制剂)组和LY294002组。除正常组外,其他组均建立缺氧4 h复氧16 h的H/R损伤模型。ELISA检测各组细胞内肌酸激酶同工酶(CKMB)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,Western blot法检测各组细胞内p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT及GSK-3β蛋白表达水平。结果与模型组相比,各给药组LDH、CK-MB均降低(P<0.05),MDA降低(P<0.01)、SOD升高(P<0.01)。p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT及GSK-3β蛋白表达水平均升高(P<0.01)。给予LY294002后,与模型组相比,LDH、CK-MB、MDA及SOD无显著性差异,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT及GSK-3β蛋白表达水平均降低(P<0.01)。结论GHI可以明显减轻H/R对H9c2心肌细胞造成的损伤,表现出抗氧化应激与抗凋亡的作用,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。     

一种新型病证相结合肝阳上亢证颈性眩晕大鼠模型的制备方法

目的：建立一种简单、可靠的符合肝阳上亢证的颈性眩晕大鼠模型，同时建立一种简便可行的反应动物眩晕程度的评价方法。方法：选用SPF级雄性SD大鼠24只，8周龄，体重280~320 g，随机进行分组（每组6只），使用局部注射聚桂醇注射液（硬化剂）与附子汤灌胃相结合的方法制备肝阳上亢证颈性眩晕大鼠模型（联合造模组），与单用局部注射硬化剂的大鼠（硬化剂组）、单用附子汤灌胃的大鼠（附子汤组）、空白对照组进行对照，以大鼠通过一段玻璃管的时间（跑管时间）反应大鼠的眩晕程度，分别于造模前、造模后第2周、造模后第3周进行观测。结果：附子汤组与空白对照组跑管时间比较差异无统计学意义；联合造模组与硬化剂组跑管时间比较差异无统计学意义；硬化剂组与联合造模组跑管时间延长，不仅与对照组差异有统计学意义（P<0.05），且与附子汤组的差异有统计学意义（P<0.01）。造模后的跑管时间较造模前相比，差异具有统计学意义（P<0.05）；比较造模后2、3周的跑管时间，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：该造模方法能有效制成肝阳上亢证颈性眩晕大鼠模型，且跑管时间能在一定程度上反映大鼠的眩晕程度，为今后颈性眩晕的动物研究提供了一种简便可行的动物模型与眩晕的检测方法。