小鼠卵母细胞玻璃化冷冻的研究

目的　对小鼠卵母细胞玻璃化的方法和冷冻液进行研究。方法　用两种玻璃化冷冻液EFS4 0 (高钠 )、DEFS4 0 (低钠 )对ICR、C57BL 6J小鼠卵母细胞进行冷冻 ,0 5mol L蔗糖液解冻 ,体外授精前对部分解冻后的C57BL 6J小鼠卵母细胞进行透明带切割。结果　DEFS4 0冷冻液冷冻效果明显高于EFS4 0冷冻液 ,ICR小鼠卵母细胞解冻后成活率达 75 2 %、体外授精率 (2 4 6 % )与对照组相比差异无显著性 ,C57BL 6J小鼠卵母细胞解冻后成活率为 87 1%、卵母细胞切割后体外受精率 (36 0 % )与对照组相比差异也无显著性。结论　冷冻液中钠离子浓度影响小鼠卵母细胞冷冻效果 ,用DEFS4 0 (低钠 )冷冻液进行玻璃化冷冻可以取得理想的冷冻效果。     

Functional expression of the renal organic cation transporter and P-glycoprotein inXenopus laevis oocytes

The hypothesis that P-glycoprotein (P-gp) mediates the renal secretion of organic cations was tested by functional expression of mRNAs in theXenopus laevis oocyte system. Efflux of 2-deoxytubercidin (dTub), a substrate for the renal organic cation transporter (OCT) but not for P-gp, was enhanced by injection of renal mRNA but not by injection of mRNA from P-gp-overexpressing cells (MDCK cells transduced with the cDNA for humanMDR1). The functional capacity of the MDCK-MDR mRNA was established by its ability to reduce, the steady-state uptake of a classical P-gp substrate, vinblastine. Thus, these data indicate OCT and P-gp to be distinct entities. TheXenopus oocyte system provides a functional approach to further characterize the OCT.Work supported by NIH Grant RO1DK41606 from the Institute for Digestive Diseases and Kidney, and NIH Cancer Center Core Grant, CA 16672 from the National Cancer Institute     

PCR技术在鼠肺支原体检测中应用的初步研究

目的　研究不同培养条件对小鼠卵母细胞体外成熟及体外受精率的影响。方法　小鼠卵母细胞分别在含有FSH、BSA和胰岛素的培养液中体外成熟,在Whitten 氏液中体外受精,比较体外成熟率、体外受精率。结果　1- 裸卵(DO) 的体外成熟率、体外受精率(81-4% ,31-0 % ) 均高于卵丘卵母细胞复合体(COC)(48-6 % ,27-1% ) 。2- 在培养液中添加FSH、胰岛素和BSA,卵母细胞的体外成熟率为77-9 % ,82-3% 、60-7% ;体外受精率为77-2 % 、72-6 % 、26-7% ;2 - 细胞率为49-2 % 、34-2 % 、10-0% 。胰岛素组的卵母细胞IVM 率最高,但IVF率、2 - 细胞率低于FSH 组。3- 添加BSA的两组的体外受精率只有26-7 % 、25-8 % ,显著低于其他组,其体外成熟率也较添加FSH 和胰岛素的组成。4- 排出第一极体(PbI) 的卵母细胞的体外受精率和2 - 细胞率(85-9 % ,22-4% ) 均高于GV期卵母细胞(71-1 % ,12-9 % ) 。结论　1- 卵丘卵母细胞(COC) 较裸卵(DO) 的体外成熟率、体外受精率都低,差异显著(P成熟< 0-01;P受精< 0-05) 。2-FSH 和胰岛素均能提高小鼠卵母细胞的体外成熟率、体外受精率。3-BSA可以降低小鼠卵母细胞体外受精率,差异极显著。4-GV 期卵母细胞的体外受精率显著低于体外培养的排出第一极体的卵母细胞(P2 - cell < 0-05,P受精<0-05)     

多囊卵巢综合征患者中未成熟卵母细胞体外培养成熟后体外受精的初步研究

目的:探讨未成熟卵母细胞体外培养成熟后体外受精、胚胎培养技术在多囊卵巢综合征患者中的初步应用及其影响因素。方法:用小剂量促性腺激素促使卵泡生长后,根据优势卵泡直径分为2组,直径6～8mm者为组1,10—12mm者为组2。采集未成熟卵母细胞,经体外培养成熟后,再进行体外授精和胚胎培养。结果:组1的GV期卵的成熟率和受精率低于组2者,但两组的MI期卵的成熟率、受精率没有明显差别。两组卵裂率没有明显差别,但形成胚胎的质量组2优于组1。总计成熟率69.3％,成熟卵中正常受精率61.5％。结论:可以用小荆量Gn促使卵泡生长后,采集未成熟卵,用体外成熟-体外授精(IVM/IVF)的方法使多囊卵巢患者在避免OHSS的情况下获得质量良好的胚胎。     

ICSI联合IVM技术在卵巢低反应高龄患者中的应用

目的：探讨胞浆内单精子注射（ICSI）联合未成熟卵母细胞体外成熟（IVM）技术在卵巢低反应高龄患者中的应用价值。方法：回顾性分析2016年1月—2018年9月于郑州大学第一附属医院生殖医学中心行ICSI助孕治疗81个周期，年龄≥35岁，获卵数≤3个，且卵母细胞均未成熟。按促排卵方案分为微刺激方案组（n=37）和拮抗剂方案组（n=44），统计2组患者基础情况、实验室结果及妊娠结局。结果：①2组患者年龄、不孕时间、基础内分泌、基础窦卵泡数及抗苗勒管激素（AMH）比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；②拮抗剂方案组Gn总量较微刺激方案组高，差异有统计学意义（P＜0.05）；③微刺激方案组与拮抗剂方案组体外培养成熟率、2PN率、卵裂率、可利用胚胎率及优胚率比较差异均无统计学意义（P＞0.05）；④微刺激方案组与拮抗剂方案组的胚胎存活率、种植率和临床妊娠率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：对于卵巢低反应的高龄患者行ICSI联合IVM培养有利于提高卵母细胞成熟率及胚胎利用率，增加妊娠机会，微刺激方案Gn用量少对卵巢低反应患者是经济有效的选择。     

Oocytes from stem cells

Folliculogenesis describes the process of activating an oocyte-containing primordial follicle from the ovarian reserve and its development to the mature ovulatory stage. This process is highly complex and is controlled by extra- and intra-ovarian signaling events. Oocyte competence and capacity for fertilization to support a viable pregnancy are acquired during folliculogenesis. Cancer and cancer-based therapies can negatively affect this process, compromising fertility. Currently, preservation of fertility in these patients remains limited to surrogacy, oocyte freezing, oocyte donation, or in vitro maturation (IVM). Recent reports of stem cells being used to produce fully competent oocytes and subsequently healthy offspring in mice have opened up a novel avenue for fertility preservation. However, translating these findings into human health first relies on enhancing our understanding of follicle growth and mimicking its intricacies in vitro. Indeed, the future of oocytes from stem cells in humans comes with many possibilities but currently faces several technical and ethical obstacles.     

卵母细胞发育和受精中的重编程及对雄原核重编程的影响

哺乳动物发育过程中细胞的重编程是当前细胞生物学、转化医学等领域研究的热点之一,因其在体细胞核移植、诱导多能干细胞及再生医学中的应用前景引起了广泛关注。表观遗传学修饰是重编程的主要内容,包括DNA甲基化、组蛋白翻译后修饰、基因组印迹、非编码RNA调控等,这些均可通过不同的机制调控基因组的表达。如卵母细胞发育与成熟过程伴随着基因组的从头甲基化、减数分裂相关基因的去甲基化和组蛋白翻译后的修饰等。此外,受精中,卵母细胞又与进入其中的雄原核发生相互作用,为雄原核基因组的去甲基化等过程提供重编程的环境。总结近年来关于卵母细胞发育和受精过程中重编程机制的研究进展及在胚胎发育中的意义,并探讨自然生殖状况下卵母细胞环境对外源性雄原核重编程的影响。     

海藻糖在生育力保存中的应用

肿瘤诊疗技术的进步显著提高了患者的生存率,但放化疗可能造成人类生育力的下降乃至丧失。如何有效保存生育力已成为近年来研究的热点。海藻糖属于非渗透性冷冻保护剂,是一种具有特殊生物学性能的双糖,能够在干燥、脱水、冷冻等恶劣条件下有效保护蛋白质等大分子不变性失活。随着研究的逐步深入,海藻糖已被广泛应用于生育力保存等医学领域中,有学者将其用于保存精子、精原干细胞、卵母细胞、胚胎、卵巢组织和睾丸组织并取得了显著成果。综述海藻糖的生物学性质、作用机制假说以及在生育力保存中的应用研究现状和最新进展。     

核质置换技术治疗线粒体疾病的研究进展

线粒体疾病是线粒体基因组发生基因突变所导致的一类遗传疾病,目前尚无治愈方法。近年核质置换技术的出现为线粒体疾病的治疗提供了新思路。现有的核质置换技术包括生发泡移植、纺锤体移植、极体移植和原核移植技术,其中生发泡移植涉及的体外成熟可影响卵母细胞的发育潜能;纺锤体移植最大的挑战是纺锤体组装对机械刺激敏感,缺乏核膜包绕,操作过程可能对纺锤体造成损伤;极体移植违背了自然选择过程,其远期影响尚不明了;原核移植操作方便、基础研究证据充分,具有短期内向临床转化的潜能,但使用已经受精的合子作为胞质供体面临的伦理争议较大。本文就4种核质置换技术治疗线粒体疾病的应用现状进行综述。     

排卵后卵母细胞老化的研究进展

卵母细胞老化与许多不良因素有关,氧化应激和线粒体功能紊乱等均致其质量低下,影响进一步发育。作为卵母细胞老化的一种类型,排卵后卵母细胞老化（POA）在体外培养时较为常见,可造成卵母细胞质量下降、胚胎发育不良,导致妊娠率下降和出生缺陷增加。氧化应激是POA过程中的重要触发因素,可激活细胞凋亡通路,影响卵母细胞质量和胚胎发育潜能。现就近年来有关POA的影响因素、与氧化应激的相互作用关系以及使用不同抗氧化剂延缓POA的发生等方面研究进行综述。