鸡白痢沙门菌SpiC蛋白的原核表达及其应用

目的进行鸡白痢沙门菌Spi C蛋白原核表达并建立以Spi C蛋白为检测抗原的间接ELISA。方法以鸡白痢沙门菌S06004基因组DNA为模板,PCR扩增384 bp的spi C基因。将spi C基因克隆至原核表达载体p ET30a中,构建重组原核表达质粒p ET30a-spi C,再转化到表达宿主菌E.coli BL21(DE3)中,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析鉴定,纯化His-Spi C蛋白,建立Spi C蛋白为检测抗原的间接ELISA并检测临床血清样品。结果通过对诱导后重组菌裂解产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,重组菌可以表达相对分子质量(Mr)约19 200的可溶性重组蛋白His-Spi C。重组蛋白GST-Spi C免疫无特定病原体鸡,所获得的高免血清能识别重组蛋白His-Spi C,表明体外表达的重组蛋白His-Spi C有良好的免疫反应原性。所建立的以重组蛋白His-Spi C介导的间接ELISA有较好的特异性,能够区分spi C基因缺失型疫苗候选株免疫与野生菌自然感染。结论重组蛋白His-Spi C呈可溶性表达,具有良好的免疫原性,以重组蛋白His-Spi C建立的间接ELISA,可以作为区分感染和免疫动物(DIVA)鸡白痢疫苗免疫的鉴定方法。     

髓源性生长因子促进血管生成能力的实验研究

目的 观察骨髓源性生长因子(MYDGF)对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生的促进作用,明确MYDGF对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及成管能力的作用.方法 新鲜种鸡蛋孵化7d选择其中发育正常鸡胚随机分为对照组、PBS组、低剂量MYDGF组、中剂量MYDGF组、高剂量MYDGF,每组各10枚.通过气室分别向各组加入30μl样品(低、中和高剂量MYDGF组为溶于PBS中浓度分别为10、100和500 ng/ml的MYDGF溶液).2 d后拍照记录CAM血管生长情况,利用计算机软件IPP 6.0分析血管生成面积(VA)与CAM面积并计算两者之比(VA/CAM).体外培养HUVEC,用CCK-8法检测MYDGF对HUVEC细胞的增殖能力的影响.成管实验检测MYDGF对HUVEC成管功能的影响.结果 血管交叉点数(VN)分别为PBS组(20.80±2.49)个,中剂量MYDGF组(27.60±3.17)个,高剂量MYDGF组(28.60±3.27)个,中剂量MYDGF组、高剂量MYDGF组分别与PBS组比较,差异有均统计学意义(P<0.05).VA/CAM值分别为PBS组(23.53±1.96)％,中剂量MYDGF组(27.87±3.10)％,高剂量MYDGF组(29.26±2.73)％,中剂量MYDGF组、高剂量MYDGF组分别与PBS组比较差异均有统计学意义(P<0.05).与对照组比较,MYDGF(100 ng/ml)可促进HUVEC增殖(P<0.05)、成管(P<0.05)的功能,差异有统计学意义.结论 MYDGF可促进CAM血管新生,增强HUVEC细胞的增殖及成管能力.     

Apoptin对C6胶质瘤细胞凋亡的诱导作用

目的：探索apoptin对C6胶质瘤细胞凋亡的诱导作用。 方法：构建荷C6胶质瘤Wistar大鼠的肿瘤模型,随机分为荷瘤对照组、化疗对照组和pvVP3组,给予不同的药物,通过超微结构分析、TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡率,观察apoptin诱导C6胶质瘤细胞的凋亡情况。 结果：pvVP3组肿瘤细胞异染色质边集,细胞核固缩,凋亡小体形成,而荷瘤对照组则未见明显凋亡改变。TUNEL法检测肿瘤细胞pvVP3组凋亡率为51.11%,明显高于荷瘤对照组(28.96%)(P<0.01)。 结论：apoptin能够诱导C6胶质瘤细胞凋亡。     

抗载脂蛋白apoB鸡卵黄抗体(IgY)的制备

目的 制备抗载脂蛋白apoB鸡卵黄抗体（IgY）,并观察鸡蛋黄中抗体的产量、纯度及稳定性。方法 用载脂蛋白apoB免疫本地良种产蛋鸡,通过水溶法提取蛋黄中抗体IgY,Bradford法测定抗体含量,SDS-PAGE电泳检测抗体纯度,Western blot免疫印迹法测定抗体的特异性,ELISA检测热处理后的抗体活性。结果 经提纯的抗体含量为7.5 mg/ml,抗体纯度达到90%,Western blot免疫印迹法证明该抗体具有高度的特异性,70℃以下稳定性良好。结论 抗载脂蛋白apoBIgY抗体的制备为下一步免疫学检测奠定了基础。     

基因重组心肌肌钙蛋白Ⅰ融合蛋白的抗肿瘤效应

目的研究基因重组心肌肌钙蛋白I与人工短肽的融合蛋白(CIS)对肿瘤生长的作用。方法用MTT法观察CIS体外对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生长的作用。利用鸡胚绒毛尿囊膜模型观察CIS对新生血管生长的影响。用6种小鼠肿瘤异位可移植模型观察CIS在体内对肿瘤生长的作用。结果 CIS对HUVEC细胞增殖具有明显抑制作用,并呈剂量依赖关系;鸡胚绒毛尿囊膜实验显示,CIS浓度为5、10 mg·L~(-1)时,新生血管生成的数量明显减少;荷瘤鼠体内异位移植模型实验显示:CIS(10 mg·kg~(-1))处理组肿瘤生长缓慢,瘤体明显小于模型对照组,对S180肿瘤瘤重抑制率85.3%,对Lewis肺癌肿瘤瘤重抑制率87.0%,对H22肝癌肿瘤瘤重抑制率84.2%,对人小细胞肺癌H446肿瘤瘤重抑制率60.42%,对人可移植性肝癌SMMC7721肿瘤瘤重抑制率61.62%,对人胃低分化腺癌BGC823肿瘤瘤重抑制率为41.84%。结论 CIS在体外抑制HUVEC细胞的生长,在鸡胚绒毛尿囊膜实验中,CIS对新生血管生成有明显的抑制作用。在体内,CIS融合蛋白可有效抑制小鼠可移植肿瘤细胞的生长。CIS抗肿瘤效应很可能是通过抑制肿瘤组织中血管内皮细胞的增殖,进而减少肿瘤组织中新生血管生成的数量而达到的。     

鸡胚发育过程中Shh超表达对脊髓神经纤维投射的抑制作用

目的探讨鸡胚发育过程中,sonic hedgehog(Shh)在脊髓中超表达后对神经纤维投射的影响。方法在鸡胚龄2.5~3d(E2.5~E3)时,利用鸡胚活体原位电转基因技术将Shh表达质粒和携带有报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的质粒共转入鸡胚脊髓,E6时取材切片,至少取3个材料,免疫荧光技术检验Shh的超表达,利用Open Book技术研究Shh在鸡胚脊髓中超表达后对神经纤维投射的影响。结果在脊髓组织切片水平上,免疫荧光结果表明,Shh在鸡胚脊髓中成功超表达,无论在组织切片上还是通过Open Book技术进行观察,与对照组相比,超表达后转染侧神经纤维都无法正常通过底板投射到对侧,表明Shh在鸡胚脊髓神经纤维投射方面具有重要作用。结论在鸡胚发育过程中,脊髓中Shh超表达后对神经纤维投射具有抑制作用。     

古代“口香糖”

<正>相传,唐代著名的宫廷诗人宋之问,在武则天掌朝时曾充任文学侍从。宋认为自己人长得仪表堂堂,出类拔萃,诗文也做得好,应该受到武则天的重视。可是武却一直未曾垂青于他。宋被冷落,又不甘心,于是他写了一首艳诗献给武则天,以期获得重视。然而武则天读后,竟一笑置之。后武与一位近侍说:"宋卿哪方面都不错,就是不知道自己有口臭的毛病。"宋闻之羞愧无比,从此,人们就经常看见他口含鸡     

单色光对鸡视网膜钟基因和钟蛋白昼夜节律表达的影响

禽类具有优越的视觉机能,不仅具有明暗觉,还具有色觉。本实验室前期研究发现,单色光可影响家禽的生长发育、免疫机能和生产性能。视网膜作为禽类生物钟3大中枢振荡器之一,可以感受光照,自发产生分子昼夜节律震荡,与下丘脑和松果体共同调节机体的生物节律。因此,本试验采用红、绿、蓝和白光饲养AA肉鸡,研究单色光对视网膜钟基因昼夜节律表达的影响。结果发现,1不同光色下,鸡视网膜钟基因除Clock外,Bmal1、Bmal2、Cry1、Cry2、Per2和Per3均呈昼夜变化,其中Bmal1、Cry1、Per2和Per3呈昼夜节律性表达,而Bmal2、Clock和Cry2不具有节律性。在表达水平上,与白光相比,绿光使正调控基因Bmal1、Bmal2和Clock表达水平升高;而红光使负调控基因Cry1、Cry2、Per2和Per3表达水平升高。在昼夜节律性表达上,与白光相比,绿光使Bmal1中值升高,振幅增大,相位提前;红光则使Bmal1中值降低,振幅减小,相位提前;同时,红光使Cry1和Per3中值升高,相位延迟;蓝光使Cry1、Per2和Per3中值降低,振幅减小。2不同光色下,鸡视网膜钟蛋白BMAL1、CLOCK均呈现昼夜变化,其中BMAL1呈现昼夜节律性表达,CLOCK的表达不具有节律性。在表达水平上,与白光相比,绿光使BMAL1和CLOCK表达水平升高。在昼夜节律性表达上,与白光相比,绿光使BMAL1中值升高,振幅增大,相位提前,红光则使BMAL1中值降低,振幅减小,相位提前。以上结果表明,单色绿光促进鸡视网膜正调控钟基因Bmal1、Bmal2、Clock的表达,使正调控钟蛋白BMAL1和CLOCK水平升高;红光则促进负调控钟基因Cry1、Cry2、Per2、Per3的表达。     

北京部分市售整鸡中沙门菌和弯曲菌协同定量污染研究

目的对2013年北京部分市售整鸡样品中沙门菌和弯曲菌的定量污染水平、沙门菌血清型和弯曲菌种水平分布进行研究。方法 2013年5—7月采集北京市售整鸡样品33份,进行样品中沙门菌和弯曲菌的定量检测,并分别对沙门菌和弯曲菌进行血清分型和种水平鉴定。结果 19个样品检出沙门菌,检出率为57.6%;5个样品检出弯曲菌,检出率为15.2%;阳性样品中沙门菌和弯曲菌平均污染水平分别为119.4 MPN/100g和58.6 CFU/g。分离出的166株沙门菌被鉴定为14种血清型,最常见的为肠炎沙门菌,其次为印第安纳沙门菌。从同一样品中分离到共11种2个以上不同血清型组合的沙门菌,最常见的血清型组合为肠炎-印第安纳沙门菌。结论 2013年5—7月北京部分市售整鸡中沙门菌污染率较高、污染水平严重、血清型复杂。