石斛多糖对SHR氧化应激反应和晚期糖基化终产物代谢的影响

目的探讨石斛多糖对自发性高血压大鼠(SHR)氧化应激和晚期糖基化终产物(AGE)代谢的药效及其剂量。方法提取石斛多糖,将SHR大鼠随机分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组四个组,对照组给予开水,低剂量组、中剂量组和高剂量组分别给予石斛多糖100 mg/d、300 mg/d、500 mg/d,干预2个月,比较干预后各组超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、AGE、可溶性AGE受体(sRAGE)和全长AGE受体(RAGE)mRNA水平。结果对照组SOD、CAT和MDA平均水平分别为(111.26±23.36)U/L、(59.58±13.48)U/L和(19.77±1.61)μmol/L,低剂量组为(151.18±23.76)U/L、(63.36±12.40)U/L和(10.95±2.07)μmol/L,中剂量组为(177.03±29.00)U/L、(76.35±11.20)U/L和(8.83±1.91)μmol/L,高剂量组为(182.77±21.62)U/L、(85.83±11.58)U/L和(6.94±1.84)μmol/L。与对照组比较,低剂量组SOD水平较高,MDA水平较低,差异有统计学意义(P<0.01),中剂量组和高剂量组SOD、CAT水平较高,MDA水平较低,差异有统计学意义(P<0.01)。对照组AGE、sRAGE和RAGE mRNA平均水平分别为(6.43±0.78)mg/L、(1.09±0.18)mg/L和(0.94±0.11),低剂量组为(6.40±0.80)mg/L、(1.41±0.19)mg/L和(0.90±0.08),中剂量组为(5.99±0.67)mg/L、(1.70±0.20)mg/L和(0.84±0.15),高剂量组为(4.67±0.69)mg/L、(1.95±0.22)mg/L、(0.54±0.10)。与对照组比较,低剂量组、中剂量组sRAGE水平较高,差异有统计学意义(P<0.01),高剂量组AGE、RAGE mRNA水平较低,sRAGE水平较高,差异有统计学意义(P<0.01)。石斛多糖对MDA、SOD、AGE、sRAGE和RAGE mRNA平均水平有剂量效应关系,纠正SHR氧化应激功能紊乱的有效剂量为300 mg/d;纠正SHR晚期糖基化终产物及其受体功能紊乱的有效剂量为500 mg/d。结论石斛多糖可有效缓解SHR的氧化应激功能紊乱,降低AGE水平,提高sRAGE水平,降低RAGE基因的活化,对缓解SHR的血管重塑有积极的作用。其药效有剂量效应关系,中等剂量可有效改善氧化应激症状,高剂量能改善AGE其受体症状。     

金钗石斛总生物碱对侧脑室注射链脲佐菌素所致痴呆大鼠脑内胰岛素信号的影响

目的:观察金钗石斛总生物碱对散发型老年痴呆动物脑内胰岛素信号的影响。方法:采用双侧侧脑室注射链脲佐菌素制备大鼠散发型老年痴呆模型,空白对照组大鼠侧脑室注射溶媒。术后动物分为:模型对照组、金钗石斛总生物碱20 mg/kg、40 mg/kg组,另设空白对照组、空白+总生物碱(40 mg/kg)组。治疗组大鼠灌胃相应剂量的总生物碱,空白对照和模型对照组大鼠灌胃等体积蒸馏水,每天1次,连续28 d。灌胃结束前6 d采用Morris水迷宫检测大鼠行为学功能;麻醉处死大鼠并收集大脑,HE染色观察海马神经元形态及数量,Western blot法检测海马胰岛素受体(IR)、胰岛素底物-1(IRS-1)、蛋白激酶B(Akt)的蛋白表达水平及磷酸化程度。结果:水迷宫结果提示,与空白对照组大鼠相比,模型对照组大鼠逃避潜伏期明显延长;与模型对照组相比,给予金钗石斛总生物碱后大鼠逃避潜伏期显著缩短(P<0.01)。HE染色发现模型对照组大鼠海马CA3区神经元层次减少、排列紊乱、细胞深染,且神经元密度下降;给予金钗石斛总生物碱后部分改善了神经元的形态并提高了神经元密度(P<0.01)。模型对照大鼠海马组织IR的磷酸化水平较空白对照组大鼠明显下调,而IRS和Akt的磷酸化水平则显著下调,给予金钗石斛总生物碱40 mg/kg后显著上调了IR磷酸化、下调了IRS和Akt的磷酸化水平(P<0.01)。结论:金钗石斛总生物碱能减轻链脲佐菌素所致痴呆大鼠学习记忆功能的损害,可能与调节脑内异常的IR/IRS-1/Akt通路中关键靶点的作用有关。     

石斛合剂对高脂高糖糖尿病大鼠心肌细胞Ca^2+代谢的影响

目的以糖尿病心肌病大鼠为研究对象,探讨石斛合剂对糖尿病心肌病心肌细胞Ca^2+代谢的影响。方法 Wistar大鼠24只,取5只作为正常组,余19只采用高脂高糖饮食联合链脲佐菌素腹腔注射进行糖尿病心肌病造模。成模后,随机分为模型组、二甲双胍组、石斛合剂组。二甲双胍组、石斛合剂组分别予二甲双胍、石斛合剂灌胃,正常组、模型组予生理盐水灌胃。4周后,测空腹血糖,取左心室心肌组织进行组织病理学观察和心肌细胞内游离钙(MyoCa^2+)浓度测定,Western blot法检测肌浆网Ca^2+-ATP酶(SERCA2a)、L型钙通道α1C亚单位蛋白(CACNA1C)蛋白表达,RT-PCR法测定SERCA2a mRNA表达。结果石斛合剂组心肌纤维较模型组、二甲双胍组排列整齐,断裂较少。与正常组比较,模型组血糖、心肌细胞MyoCa^2+含量和CACNA1C蛋白表达明显升高(P<0.01,P<0.05),SERCA2a mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.01)。与模型组比较,石斛合剂组血糖、心肌细胞MyoCa^2+含量和CACNA1C蛋白表达明显降低(P<0.01,P<0.05),SERCA2a mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.01,P<0.05);二甲双胍组血糖明显降低(P<0.01)。与二甲双胍组比较,石斛合剂组心肌细胞MyoCa^2+含量明显降低(P<0.01,P<0.05),血糖、SERCA2a mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论石斛合剂通过提高SERCA2a mRNA和蛋白表达,加快摄取Ca^2+的速率,降低细胞质Ca^2+负荷,缓解钙超载,最终达到维持糖尿病心肌病钙稳态的作用,有效维持心肌细胞的正常收缩舒张功能;其降糖作用不是预防糖尿病心肌病的主要机理,而在于抑制CACNA1C蛋白表达,抑制钙诱导钙释放过程。     

稀土元素镧、铈对铁皮石斛组培苗生长影响的研究

目的 探讨添加稀土元素镧、铈对铁皮石斛组培苗以及移栽后铁皮石斛苗的生长的影响,寻找能显著促进铁皮石斛生长发育的稀土元素,以获得品质优良的铁皮石斛苗.方法 以铁皮石斛小苗为外植体,通过添加不同浓度硝酸镧、硝酸铈的培养基上进行培养,并对其性状特征、生理活性、移栽后生长状况等进行统计比较研究.结果 通过90 d的培养后,添加稀土元素组别的铁皮石斛的鲜质量、根数、株高、叶绿素含量均高于空白组,分蘖数低于空白组,而且随着硝酸镧和硝酸铈浓度的增高,铁皮石斛组培苗的鲜质量、株高、根数、叶绿素含量基本呈递增的趋势,分蘖数呈递减的趋势,硝酸铈浓度为40 mg/L时,其鲜质量、根数、株高最大,分蘖数最少;铁皮石斛移栽培养30 d后,稀土元素组比空白组中的存活率和抽芽率高,硝酸铈为40 mg/L时其生长情况最佳;一定浓度的稀土元素La 、Ce能增强铁皮石斛组培苗的T-SOD酶、CAT酶活性和根系活力,添加10.0～40.0 mg/L La3+,SOD酶活性和CAT酶活性均呈现先增后降的趋势;添加10.0～40.0 mg/L Ce3+,SOD酶活性逐渐增强,但CAT酶活性在Ce3+10～ 30.0 mg/L时逐渐增强,40.0 mg/L时又稍下降;添加10.0～40.0 mg/L La3+,根系活力呈先增后降的趋势,10～ 30.0mg/L时根系活力逐渐上升,40.0 mg/L时略有下降;添加10.0～40.0 mg/L Ce3+,根系活力逐渐上升,40.0mg/L时最高.结论 稀土元素镧、铈对铁皮石斛组培苗的生长及T-SOD酶、CAT酶活性和根系活力均有较显著的影响,本文结果为铁皮石斛组培苗的壮苗以及品质的提高提供了依据.     

不同干燥工艺对金钗石斛叶品质的影响

目的:研究不同干燥工艺对金钗石斛叶品质的影响,为改进该药材的初加工和扩大石斛药材的药用部位提供理论依据。方法:以金钗石斛叶为原材料,采用热风干燥、微波干燥、真空干燥和真空冷冻干燥4种不同干燥方式对金钗石斛叶进行干燥,探讨4种方式对金钗石斛叶色泽、微观结构、总多糖和石斛碱含量的影响。结果:真空冷冻干燥产品色泽保持最好,优于其他3种干燥方式。不同干燥方法对样品所呈现的微观结构有所区别。金钗石斛叶经真空冷冻干燥、真空干燥、热风干燥及微波干燥后总多糖质量分数分别为3.11%,3.02%,2.81%和2.74%。不同干燥工艺对金钗石斛叶总多糖含量的影响较大,而对石斛碱含量则影响很小。结论:从成本方面考虑,热风干燥方式下的金钗石斛叶色泽较好,有效成分含量较高,且所需设备简单、节能、处理量大,在企业加工中值得推广应用。     

中药石斛类药材的历史与现状

综述石斛类药材品种的源流和现状。石斛类药材品种十分复杂,已由一种中药单一基源发展到有众多植物基源,涉及的种类达三、四十种。经众多学者考证历代本草中石斛的相关记载,以及近30年的研究整理,其品种基本厘清,其成果体现在历版《中国药典》之中。作者认为,2005版《中国药典》新增的“及其近似种”值得商榷;由于鼓槌石斛的化学成分、功能主治与其他石斛似不一致,应将鼓槌石斛从石斛条中分出单列;希望重视霍山石斛的质量标准研究,尽早为《中国药典》收载。     

铁皮石斛的PCR-RFLP鉴别方法

目的:建立铁皮石斛专有的分子鉴别方法。方法:通过对铁皮石斛及其近缘种石斛的叶绿体matk基因序列进行对比分析,根据鉴别位点设计特异的铁皮石斛鉴别引物,通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)技术进行鉴别。结果:本试验中鉴别引物可成功扩增铁皮石斛及其近缘种石斛,PCR产物为331 bp,铁皮石斛的PCR产物可被Tru9 Ⅰ限制性内切酶切开,而近缘种石斛不能被切开,可通过琼脂糖凝胶电泳成功鉴别。结论:本试验建立的PCR-RFLP鉴别方法可以鉴别铁皮石斛及其近缘种石斛。     

石斛属菲类成分及其药理作用研究进展

菲类化合物是石斛属植物的特征成分之一,可分为简单菲、二氢菲、双菲及菲醌（酮）等菲衍生物4种类型。综述了金钗石斛、铁皮石斛、束花石斛、细茎石斛、流苏石斛、密花石斛、鼓槌石斛、曲轴石斛、石斛兰和绒毛石斛10种石斛属植物中毛兰菲、鼓槌菲、杓兰素等20个菲类活性成分,并介绍其抗肝纤维化、抗肿瘤、抗炎、抗氧化、降血糖等药理活性,希望为该属植物的新药研发和临床应用提供参考。     

HPLC法测定有瓜石斛中原儿茶酸的含量

目的:建立有瓜石斛中原儿茶酸的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱(HPLC)法.色谱柱为Zorbax SB-Aq色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液;检测波长为220nm;流速为1.0mL·min-1;柱温为30℃. 结果:原儿茶酸达到基线分离,线性关系良好(r=1.0000);平均加样回收率为101.71%,RSD为2.48%(n=6). 12批市售样品含量在0.0374~0.203mg·g-1范围内,差异相对较大. 结论:该方法灵敏,可靠,可用作有瓜石斛药材的质量评价指标之一.     

铁皮石斛多糖对高糖诱导的血管内皮细胞Bax、Bcl-2表达的影响

目的优化铁皮石斛多糖提取工艺,研究其对高糖诱导的静脉血管内皮细胞(HUVEC)的保护作用机制。方法在单因素实验基础上,利用响应面法优化多糖的提取工艺;体外培养HUVEC细胞,将对数生长期的细胞分为空白对照组、正常血糖组、高糖刺激组和不同铁皮石斛多糖浓度+高糖刺激组,分别作用24和48 h后,采用MTT法检测的HUVEC凋亡的影响,用RT-PCR法检测内皮细胞Bax、Bcl-2的表达情况。结果铁皮石斛多糖提取的最优条件为:提取次数为2.8次,液(m L)料比(g)15.75∶1,提取时间2 h,在此条件下,理论计算提取率达到25.1%,实测提取率为24.9%,与模型高度拟合。与正常组相比,高糖组抑制细胞的生长,增强Bax的表达,抑制Bcl-2的表达,在高糖诱导下,铁皮石斛多糖促进细胞生长,抑制Bax的表达,增强Bcl-2的表达。结论通过响应面法优化的工艺,得率高,提取效果好。铁皮石斛多糖可通过抑制高糖诱导的血管内皮细胞Bax的表达,增强Bcl-2的表达,从而抑制血管内皮细胞凋亡,在一定程度上可防治糖尿病血管病变。