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1.
目的 基于核酸试纸条技术,建立一种快速检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因的方法。 方法 煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,以蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因作为靶基因,采用NCBI primer-BLAST 5.0软件设计特异性引物并通过克隆转化鉴定PCR产物,建立并组装核酸试纸条,评价核酸试纸条的特异性、灵敏度和稳定性。 结果 蜡样芽胞杆菌DNA浓度为300 mg?L-1,纯度约为1.60。PCR产物阳性条带经切胶回收、克隆转化和测序比对,与GenBank数据库中已登记的entFM相似性为100%。在pH值7.0条件下,每100 μL 胶体金溶液加入3.3 μg链霉亲和素浓度标记,质控线浓度为1.8 g?L-1,检测线浓度为1 g?L-1时,硝酸纤维素膜上质控线与检测线均可与PCR产物反应出现清晰的红色条带。按照最适条件组装成核酸试纸条,PCR产物6 μL,样品展开液100 μL,检测10 min后可观察结果。核酸试纸条特异性与电泳结果一致,仅蜡样芽胞杆菌为阳性结果,与金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、大肠埃希菌和沙门氏菌皆无交叉反应,为阴性结果;灵敏度检测,核酸试纸条DNA质量浓度同时降至10-3 mg?L-1仍可准确检测,普通PCR电泳结果显示DNA质量浓度同时降至10-1 mg?L-1出现目的条带,核酸试纸条比普通PCR灵敏度提高100倍;稳定性检测,核酸试纸条在第6、9和12个月进行检测稳定性一致。 结论 建立的核酸试纸条检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因灵敏度高、特异性强且具有良好稳定性,适用于快速鉴别蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因。 相似文献
2.
3.
目的 探讨血管内超声虚拟组织学成像(VH-IVUS)与实时剪切弹性成像技术(SWE)评估颈动脉斑块稳定性及脑梗死的价值。方法 选取2018年12月~2020年12月在中国人民解放军联勤保障部队第960医院就诊的颈动脉粥样硬化斑块患者130例(201个斑块),分析不同性质斑块VH-IVUS评分及平均杨氏模量差异,及评估稳定性斑块的价值。130例颈动脉粥样硬化斑块患者近期发生脑梗死53例(脑梗死组),无脑梗死77例(无脑梗死组),比较两组甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、VH-IVU评分及平均杨氏模量水平,同时分析VH-IVUS评分及平均杨氏模量评估脑梗死的价值。结果 易损性斑块VH-IVUS评分高于稳定性斑块(P<0.05),而平均杨氏模量低于稳定性斑块(P<0.05);VH-IVUS评分、平均杨氏模量评估稳定性斑块的ROC曲线下面积分别为0.789和0.875。脑梗死组TG、LDL-C明显高于无脑梗死组(P<0.05),而HDL-C明显低于无脑梗死组(P<0.05);脑梗死组斑块VH-IVUS评分明显高于无脑梗死组(P<0.05),而平均杨氏模量明显低于无脑梗死组(P<0.05);VH-IVUS评分、平均杨氏模量评估脑梗死的ROC曲线下面积分别为0.658和0.822。结论 VH-IVUS与SWE技术评估颈动脉斑块稳定性及脑梗死方面有较好的价值,其中SWE评估价值较高。 相似文献
4.
《中华医院感染学杂志》2022,(9)
目的 对新冠肺炎定点医院隔离病区进行气溶胶采集和病毒核酸检测,为定点医院新冠医院感染防控工作提供科学依据。方法 于2021年8月14-24日,采用生物气溶胶采集器在某新冠肺炎定点医院隔离病区各布点区域进行空气气溶胶采集,所有标本同时采用荧光聚合酶链式扩增反应(PCR)和数字PCR两种方法进行新冠病毒核酸检测。结果 共采集空气气溶胶标本86份,荧光PCR检测结果全部为阴性,数字PCR检测结果显示,14份气溶胶标本检出新型冠状病毒核酸,检出率为16.28%。检出标本较集中的区域有病人卫生间和医务人员防护用品脱卸区;重症病房核酸检出率高于普通病房,但不同病区气溶胶病毒核酸检出率差异无统计学意义(χ2=7.871,P=0.248); CT值>30和CT值≤30病人区域气溶胶病毒核酸检出率差异无统计学意义(χ2=7.871,P=0.248); CT值>30和CT值≤30病人区域气溶胶病毒核酸检出率差异无统计学意义(χ2=0.232,P=0.630)。结论 在新冠肺炎患者病程中晚期,隔离病区空气气溶胶仍有病毒核酸存在,但所有检出标本新冠病毒拷贝数均不高。室内拥挤、通风不良,且与病例有关联的环境中气溶胶病毒核酸检出率较高,医务人员应做好个人防护,保持环境通风良好,并做好环境清洁消毒和空气净化工作。 相似文献
5.
目的 探讨应用自动心肌运动定量技术(aCMQ)联合Tei指数评估尿毒症患者左心室收缩功能的价值。方法 选取2020年8月至2021年10月合肥市第一人民医院接受血液透析的50例射血分数保留(EF≥50%)的尿毒症患者,作为观察组,并选择同期在本院接受体检,且性别、年龄相匹配的50例健康体检者作为对照组。尿毒症患者在透析后3天内行常规心脏彩超检查,分别测量并记录两组对象左房内径(LAD),室间隔舒张末期厚度(IVSTd),左室后壁舒张末期厚度(LVPWTd),左室舒张末期内径(LVIDd),左房容积(LAV),通过Simpons法测得左室射血分数(LVEF),同时连接心电图,在心尖五腔心切面,脉冲多普勒(PW)条件下,测量Tei指数。使用aCMQ技术分析左室标准心尖三腔、四腔及两腔、左室短轴各切面心脏动态图像,比较观察组和对照组的左心室18个节段长轴整体纵向收缩峰值应变(LPS)、心尖部三腔心长轴应变(LVAP3LS)、四腔心长轴应变(LVAP4LS)及两腔心长轴应变(LVAP2LS),左室短轴圆周应变整体(GCS),左室短轴二尖瓣(SAXB)、乳头肌(SAXM)及心尖段(SAXA)各节段收缩期峰值应变。结果 观察组LAD、IVSTd、LVPWTd、LVIDd 和LAV均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),两组间LVEF差异无统计学意义(P>0.05),观察组LVGLPS及LVAP3LS、LVAP4LS、LVAP2LS均低于对照组(P<0.05),观察组与对照组间左室GCS、SAXB、SAXM、SAXA差异无统计学意义(P>0.05)。结论 aCMQ技术联合Tei指数可以早期检测尿毒症患者左室收缩功能的变化。 相似文献
6.
目的探讨多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP-1)单核苷酸多态性(SNP)与晚期胃癌患者化疗反应及生存时间的关联性。方法选择2016年5月至2019年12月于苏州科技城医院肿瘤内科收治的161例晚期胃癌患者,给予奥沙利铂联合替吉奥化疗,化疗前抽空腹静脉血5 ml用于提取基因组DNA。TaqMan探针法鉴别PARP1基因rs907187C/G、rs1805414T/C和rs1136410T/C多态性位点的基因型,分析各多态性对化疗客观反应率(ORR)及总生存期(OS)的影响。结果rs907187C/G多态性与化疗敏感性存在明显关联,变异等位基因G携带者化疗ORR显著升高,CC、CG、GG基因型分别为23.2%、42.2%、53.7%(P=0.007)。杂合基因型CG化疗ORR为CC基因型的2.362倍(P=0.035);纯合变异基因型GG化疗ORR为CC基因型的3.812倍(P=0.003);CG+GG基因型化疗ORR为CC基因型的2.854倍(P=0.005)。Kaplan-Meier分析显示rs1136410T/C多态性与患者OS显著相关,变异等位基因C携带者中位OS明显延长,TT、TC、CC基因型分别为10.0、13.1、16.9个月(P=0.006);TC+CC基因型患者中位OS为14.5个月,较TT组OS显著延长(P=0.004)。Cox比例风险模型分析显示,rs1136410T/C多态性仍是晚期胃癌患者OS的独立影响因素(P=0.010,OR=1.667,95%CI:1.131~2.458)。未发现rs1805414T/C多态性与化疗ORR及预后之间存在统计学关联。结论PARP1基因rs907187C/G多态性能影响晚期胃癌患者的ORR,而rs1136410T/C多态性可能是评估生存时间的预测指标。 相似文献
7.
目的 探究DNA聚合酶η(POLH)对过氧化氢(H2O2)诱导的晶状体上皮细胞氧化应激和凋亡的防御机制。方法 以年龄相关性白内障患者的晶状体前囊膜组织和H2O2处理的晶状体上皮细胞系SRA01/04为研究对象,分别通过RT-PCR和免疫印迹实验验证POLH的表达并筛选H2O2最佳作用浓度用于后续实验,将培养的SRA01/04细胞分为H2O2组、H2O2+HA组和H2O2+OV-POLH组,采用RT-PCR和免疫印迹实验检测POLH mRNA和蛋白表达情况,免疫荧光法检测DNA氧化损伤标志物以及TUNEL实验检测细胞凋亡变化,免疫印迹实验检测细胞中BAX、BCL-2、Nrf2和Keap1蛋白表达。结果 RT-PCR结果显示,与透明晶状体前囊膜(1.00±0.22)相比,年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜组织中POLH mRNA相对表达量明显下降(0.38±0.62)(P<0.000 1)。RT-PCR和免疫印迹实验均显示,200 μmol·L-1 H2O2处理的SRA01/04细胞中POLH表达量最低;TUNEL实验检测结果显示, 200 μmol·L-1 H2O2处理后细胞的凋亡明显增加。RT-PCR和免疫印迹实验结果显示,与H2O2组和H2O2+HA组相比,H2O2+OV-POLH组SRA01/04细胞中POLH表达量显著升高(P<0.000 1)。免疫荧光染色结果显示,与H2O2+HA组相比,H2O2+OV-POLH组细胞的γH2A染色明显下降。免疫印迹实验检测结果显示,与H2O2组和H2O2+HA组相比,H2O2+OV-POLH组细胞促凋亡蛋白BAX表达量明显下降,而抑凋亡蛋白BCL-2表达量明显升高(均为P<0.01);与H2O2组和H2O2+HA组相比,H2O2+OV-POLH组细胞Keap1蛋白水平明显下降,而转录调控蛋白Nrf2表达明显升高(均为P<0.01)。结论 过表达POLH可通过增强DNA损伤修复功能抑制H2O2诱导的晶状体上皮细胞凋亡,其抑制氧化应激机制可能与Nrf2-Keap1-ARE通路有关。 相似文献
8.
目的 建立一种简单,快速的重组酶聚合酶核酸扩增技术检测鼠疫耶尔森氏菌的方法。方法 基于耶尔森氏菌的特异性序列设计引物及探针;通过对不同温度的检测来优化反应温度;通过对不同菌株的DNA模板进行检测评价该方法的特异性;通过对不同稀释浓度的样本DNA模板进行检测来确定灵敏性;通过模拟样品进行应用评价。结果 基于鼠疫耶尔森菌的DNA腺嘌呤甲基化酶基因设计特异性引物和探针所建立的荧光重组酶聚合酶扩增方法,35 ℃反应20 min内可成功检出低至100个拷贝的鼠疫耶尔森菌基因,而且与其他菌无交叉反应,对模拟样品的检测准确性达到98.0%。结论 重组酶聚合酶核酸扩增可广泛应用于简陋条件下鼠疫耶尔森菌的临床检测,促进鼠疫的防控。 相似文献
9.
目的 探讨影响1-羟基-2-氧-1,8-萘啶-3-甲酰胺类HIV整合酶链转移抑制剂(integrase strand transfer inhibitors, INSTIs)抗整合酶链转移(integrase strand transfer, INST)活性的主要微观结构因素。方法 采用遗传函数逼近法构建了10个1-羟基-2-氧-1,8-萘啶-3-甲酰胺类INSTIs的二维定量构效关系(2d-quantitative structure-activity relationship, 2D-QSAR)模型,从中优选出最优模型,并据此探析影响抑制剂抗INST活性的主要微观结构因素。结果 最优2D-QSAR模型的非交叉验证相关系数R2为0.8555,留一法交叉验证相关系数Q2loo为0.7761,外部交互验证相关系数R2ext为0.94,表明所建模型具有较好的统计学意义和稳定性。结论 1-羟基-2-氧-1,8-萘啶-3-甲酰胺类INSTIs的抗INST活性主要与描述符JX、Dipole_mag、Jurs_PNSA_1和Strain_Energy相关,可为抑制剂的进一步合理设计提供理论依据。 相似文献
10.
目的 建立一种能够快速鉴定人参和西洋参的双重实时荧光PCR方法。方法 通过对人参属及其近似种基因序列的分析比对,设计特异性的引物探针,建立双重实时荧光PCR检测方法。PCR反应体系为Premix Ex Taq (Probe qPCR) 10 μL,人参上下游引物各0.5 μL,西洋参上下游引物各0.3 μL,人参与西洋参特异性探针各0.4 μL,DNA模板2 μL,灭菌去离子水补至20 μL。反应条件为95℃预变性30 s;然后以95℃变性5 s,60℃退火延伸30 s进行40个循环。应用该方法测试了27份DNA样品,包括7份人参、6份西洋参、4份人参与西洋参混合样、10份其他人参属样品及其他常见中药材样品的DNA,以确定该方法的特异性。将人参与西洋参样品DNA混合后10倍稀释成不同浓度后进行检测,用以确定该方法的灵敏度。结果 人参及西洋参样品均在特定的荧光通道下出现典型的阳性扩增曲线,人参与西洋参混合样品均同时出现两条阳性扩增曲线,其它对照样品及空白对照均没有出现阳性扩增曲线。灵敏度检测结果显示该方法检测人参及西洋参的最低检测限均为2 pg DNA/反应。结论 本实验建立的双重实时荧光PCR方法能够同时快速、准确、灵敏地鉴别出人参和西洋参。 相似文献