免疫缺陷性皮肤病

20061317CRF07-DC亚型HIV的gag-pol区基因序列分析/关琪(辽宁沈阳医学院奉天医院检验科),王素芬,张卓然…∥中国艾滋病性病.-2006,12(1).-7~92株艾滋病病毒1型(HIV-1)CRF07-BC亚型病毒的完整gag基因和部分pol基因重组及耐药位点分析显示:与新疆地区流行的模式病毒毒株非常接近。未发现基因重组断点的变化,因而不存在天然耐药情况,适用于抗逆转录类药物的应用。图1表2参7(杨亚琴)20061318HIV抗体筛查实验阳性、确认实验可疑和阴性标本的对比分析/黑发欣(北京市疾控中心性病艾滋病防治所),张启云,孙伟东…∥中国艾滋病性病.-2006,12(1…     

螺旋体传染病

1988-2003年雅安市钩端螺旋体病流行特征；新型钩端螺旋体的毒力调查；1998-2003年河南石油勘探局新疆探区人群莱姆病监测结果分析；我国4个钩端螺旋体血清群lipL21基因序列分析及其表达产物的鉴定；福建省新丙五价钩端螺旋体菌苗接种后反应与免疫效果的观察。     

从GenBank获取基因序列及PCR引物设计的方法

去年9月,我参加中组部、团中央组织的“博士服务团”来到青海医学院工作,适逢格日力教授从美国回到青海组建高原医学研究中心,我发挥自己所长协助格教授筹建该中心所属的基因工程与分子生物学实验室。在青海半年多的工作实践中,我发现青海地区在医学科研方面与内地存在很大差距:缺乏进行深入研究必需的基本设备,人才严重缺乏,现有人员缺乏一些重要的基础知识,不能利用网络获     

心肌营养素1/破伤风毒素重链C端片段融合蛋白的构建及其靶向大鼠嗜铬细胞瘤细胞的研究

目的：探讨心肌营养素1（cardiotrophin 1，CT1）/破伤风毒素重链C端片段（tentanus toxin C fragment,TTC）（CT1/TTC）融合蛋白的构建及其对大鼠嗜铬细胞瘤（pheochromocytoma,PC12）细胞的靶向性。方法：采用聚合酶链式反应（PCR）、T-A克隆等分子生物学方法构建CT1/TTC融合蛋白。体外培养PC12细胞,并将CT1/TTC融合蛋白与PC12细胞共培养,红色荧光免疫组化染色后在激光共聚焦显微镜下观察融合蛋白能否在TTC的靶向作用下进入PC12细胞。结果：成功构建了CT1/TTC融合蛋白,测序显示融合基因序列正确,免疫组化染色结果显示融合蛋白能够进入PC12细胞，并发出红色荧光。结论：采用PCR和T-A克隆等分子生物学方法能成功构建CT1/TTC融合蛋白．并且TTC能够将CT1靶向进入PC12细胞。     

世界首例牛基因组排序完成

牛基因组测定排序计划领导小组日前宣布:世界首例牛的基因组排序目前已经完成,并将免费放入公共的数据库供全世界的生物学者和农业研究者使用。科研工作者可以从下列公共数据库得到该基因序列,GenBank(www.ncbi.nih.gov/Genbank)、EMBLBank(www.ebi.ac.uk/embl/index.html)、NCBI'sMapViewer(www.ncbi.nlm.nih.gov/mapview/)、UCSCGenomeBrowser(www.genome.ucsc.edu/)。为该项计划投资并参与该项工作的单位包括美国国家健康研究会,美国农业部农业研究服务中心,英国哥伦比亚基因研究中心,奶牛研究投资集团,澳大利亚联邦科学和工业研…     

尿路致病性大肠杆菌溶血素A基因的序列分析

目的分离尿路致病性大肠杆菌(UPEC)临床流行株,并进行序列分析。了解其基因变异情况。方法自临床尿路感染标本中分离溶血性大肠杆菌10株。按GenBank中的溶血素A(hlya)基因保守序列设计合成引物。以获得的UPEC基因组DNA为模板,用PCR方法扩增其hlya基因片段。对扩增的片段测序并进行同源性分析。结果扩增的hlya目的基因大小744bp。经PCR鉴定表明获得正确的片段。测序结果显示,10个分离株DNA序列同源性高于99.7%,其与GenBank中的hlya基因序列的同源性为99%以上。10个序列中共发生13处碱基的替代,但均属于同义突变,没有碱基的插入与缺失。结论UPEChlya基因高度保守。本研究在国内首次成功地扩增了UP-EC基因。为进一步研究hlya的结构、阐明UPEC的致病机制、探讨hlya作为特异性诊断靶点及保护性疫苗的研究奠定了基础。     

HPI毒力岛缺失的EAggEC17-2突变菌株的构建及其功能研究

目的 构建HPI毒力岛缺失的EAggEC17-2突变株，初步研究EAggEC菌株携带的耶尔森菌HPI毒力岛合成铁载体Ybt的功能。方法以EAggEC17-2为出发菌株，irp8基因部分序列作为同源重组的一侧序列，irp5基因序列作为同源重组的另一侧序列，中间插入有氯霉素（Can）抗性基因（cat基因）标记。通过接合转移和同源重组，构建了缺失约24kb的HPI毒力岛功能核心区区域EAggEC17-2的仝岛缺失株EA85。应用流式细胞技术（FACS）检测指示菌株WA-CS irp1：：KN（pC3G3．3N）荧光强度的变化情况，对EA85缺失株和出发菌株进行了合成Ybt的功能比较研究。结果成功构建了EAggEC17-2HPI全岛缺失株EA85。EAggEC17-2菌株具有表达Ybt的功能，而缺失株EA85丧失了合成Ybt的能力。结论EAggEC17-2HPI毒力岛的缺失，使Ybt的合成彻底阻断。EAggEC17-2具有的合成Ybt的功能是由其染色体携带的HPI毒力岛所决定的。     

9株YONBAN相关TTV变异株全基因序列测定及其结构、分型的研究

目的：对9个TTV新分离株全基因序列测定，基因结构及基因分型的研究。方法：从9名TTV第4基因群感染阳性的婴儿血清中抽提取其DNA，用long inverted PCR扩增出全基因组，克隆和测定全基因组序列，并对测序结果进行计算机分析。结果：首次次测定了TTV第4基因群共9个新分离株的全基因序列，其中8个分离株代表核基因群首次报道的8个新基因型。结论：TTV基因组核酸序列具有高度异质性及基因型的高度多样性，但是，其独特的转录特性和基因组的基本结构在各自的基因群及基因型中十分保守。     

微生物学

0500672 HIV复制型痘苗病毒载体疫苗免疫原性分析，0500673 苦参素对HBsAg转基因小鼠血清Th1和Th2细胞因子水平的影响，0500674 肝癌高发区广西隆安县乙型肝炎病毒株全基因序列分析，0500675 我国广东、福建地区2000-2001年手足口病肠道病毒71型分离株的种系进化分析，0500676 贵州侗族、苗族和汉族人群乙型肝炎病毒基因型分布。     

人SNCA基因真核表达载体的构建及其在PC12细胞中的表达

目的:构建含人野生型及致病突变A30P、A53TSNCA基因的重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA,并通过稳定转染获得过表达人野生型及致病突变A30P、A53T α-synuclein(SNCA)的单克隆PC12细胞株.方法:通过RT-PCR方法扩增SNCA基因,T-A克隆后测序.在此基础上利用单核苷酸差异引物定点诱变法相继构建含SNCA基因编码区EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ两酶切位点的同义突变及其致病突变G88C(Ala30Pro)、G209A(Ala53Thr)的重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA,并以PCR、双酶切、测序鉴定.以重组质粒pEGFP-C3-SNCA通过脂质体转染方法转染PC12细胞;以G418进行筛选;以有限稀释法进行亚克隆获得稳定过表达人野生型及致病突变A30P、A53T α-synuclein的单克隆PC12细胞株,并以稳定转染pEGFP-C3的PC12细胞作为对照组细胞,通过RT-PCR、Western blot及荧光显微镜鉴定各单克隆PC12细胞株.结果:PCR、酶切及测序证明重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA构建成功.RT-PCR、Western blot及荧光显微镜确认目的基因序列在PC12细胞稳定过表达.结论:成功地构建SNCA基因WT及A30P与A53T突变型的重组真核表达载体pEGFP-C3-SNCA;成功获得过表达人野生型及致病突变A30P、A53T α-synuclein的单克隆PC12细胞株.