附睾小体及其相关蛋白研究进展

附睾小体及相关蛋白与通过附睾管的精子相互作用,使精子发生一系列生化改变,从而获得运动和受精的能力。附睾小体以顶质分泌／顶浆分泌的方式由附睾上皮细胞分泌出来。对附睾小体相关蛋白及与精子相互作用的研究,不但有助于人们进一步了解附睾内精子成熟及调节附睾小体与精子相互作用的分子机制,     

垂体腺苷酸环化酶激活肽拮抗lactacystin细胞毒性的作用

背景：帕金森病的发病机制未明确,目前尚没有有效的治疗方法能从根本上阻止其病程进展。目的：分析垂体腺苷酸环化酶激活肽对lactacystin诱导的帕金森病多巴胺能PC12细胞凋亡的影响及其分子机制。方法：用神经生长因子将PC12细胞诱导分化成神经元的细胞模型,经不同浓度泛素-蛋白酶体抑制剂lactacystin处理,分别作用不同时间,取细胞存活约为50%的lactacystin作用浓度与时间,建立帕金森病细胞实验模型。实验分组：对照组、lactacystin组、垂体腺苷酸环化酶激活肽1-27干预组(干预1组)、垂体腺苷酸环化酶激活肽1-27和垂体腺苷酸环化酶激活肽6-27共同干预组(干预2组)。观察各组细胞形态变化;MTT法检测细胞活力;免疫印迹(Western blot)法检测内质网应激特异性蛋白caspase-12的表达情况。并观察垂体腺苷酸环化酶激活肽1-26及垂体腺苷酸环化酶激活肽6-27对lactacystin毒性作用的影响。结果与结论：不同浓度及作用时间的lactacystin处理PC12细胞后,细胞活力呈浓度及时间依赖性下降,其中lactacystin 20 μmol/L作用24 h使细胞活力下降约50%。在相同的lactacystin作用条件下(20 μmol/L,24 h),与对照组比较,lactacystin组细胞发生损伤性改变,细胞活力降低,caspase-12活性明显升高(P < 0.01);与lactacystin组比较,干预1组细胞损伤性改变明显好转,细胞活力增强,下调凋亡蛋白caspase-12的表达    (P < 0.01)。干预2组细胞状态则明显不如干预1组,与lactacystin组相差不大。结果提示泛素-蛋白酶体抑制剂lactacystin引起内质网应激导致细胞损伤;垂体腺苷酸环化酶激活肽1-27通过调节上述信号通路发挥保护作用。而作为垂体腺苷酸环化酶激活肽1-27的受体拮抗剂,垂体腺苷酸环化酶激活肽6-27则减弱了垂体腺苷酸环化酶激活肽1-27的这一作用。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

Livin在后发性白内障动物模型中的表达

目的:建立新西兰大白兔后发性白内障(posterior capsule opacification,PCO)动物模型,检测凋亡抑制因子Livin在PCO中的表达,从而探讨Livin在PCO形成过程中的作用。方法:选用健康新西兰大白兔30只,随机分为实验组(25只),分为A,B,C,D,E组,对照组(5只),实验组行右眼晶状体皮质吸出,分别于术后即刻;3,7,14,28d(每个时间点5只)对术眼行裂隙灯显微镜检查,并处死动物获取术眼晶状体后囊膜,对照组直接处死动物获取右眼后囊膜,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-blotting方法检测Livin在正常对照组及术后不同时间点PCO中的表达。结果:RT-PCR和Western-blotting在正常对照组及术后即刻A组均未检测到Livin的表达,实验组B,C,D,E术后不同时段的PCO组织中均可检测到不同程度Livin的表达,其中RT-PCR和Western-blotting均显示术后C组Livin表达较为明显,D组表达开始下降,但至E组仍有表达,B组表达最低。结论:Livin的表达在PCO的形成过程中具有相应的时相性,为进一步探索PCO的基因治疗提供了理论依据。     

藻黄胶囊Ⅲ号对人肾小球系膜细胞的影响

目的通过研究藻黄胶囊Ⅲ号（ZHC3）对人肾小球系膜细胞（GMC）的影响,从分子细胞水平探讨ZHC3防治慢性肾功能衰竭（CRF）的机理。方法ZHC3孵育体外培养的人GMC,采用MTT法检测GMC的增殖,ELISA法检测纤维连接蛋白（FN）、白细胞介素6（IL-6）和转化生长因子β1（TGF-β1）的分泌水平。结果ZHC3可显著抑制GMC的增殖（P〈0.01）,减少FN、IL-6、TGF-β1的分泌（P〈0.05或P〈0.01）。结论ZHC3可减少肾小球内细胞外基质堆积,延缓肾小球硬化,这可能是ZHC3防治CRF的机理。     

环氧化酶2基因沉默不影响人骨髓间充质干细胞定向分化的能力

背景：目前环氧化酶2基因沉默在干细胞中的研究还处在初级阶段。目的：构建携带环氧化酶2基因沉默的慢病毒载体,观察其在人骨髓间充质干细胞中的表达,以及其定向分化潜能变化情况。方法：应用重组慢病毒技术构建携带沉默环氧化酶2基因和绿色荧光蛋白的慢病毒载体,并用其转染体外培养第3代的人骨髓问充质干细胞,以无目的基因的慢病毒转染人骨髓间充质干细胞的实验组和未做处理的人骨髓间充质干细胞分别作为阴性对照组和空白组进行对比。转染后7d分别提取各组细胞的总RNA和蛋白检测环氧化酶2表达量。对环氧化酶2基因沉默的人骨髓间充质干细胞和正常人骨髓间充质干细胞定向诱导,观察环氧化酶2基因沉默对人骨髓间充质干细胞成脂、成骨、成软骨能力的影响。结果与结论：慢病毒转染3d后,荧光显微镜下可见人骨髓间充质干细胞发出绿色荧光,阴性对照组转染效率可达90％以上,实验组转染效率达85％以上。F盯．PCR和Westernblot检测结果显示,环氧化酶2基因在人骨髓间充质干细胞中的基因水平和蛋白水平均得到了明显抑制。环氧化酶2基因转染对人骨髓间充质干细胞成脂、成骨、成软骨能力无明显影响。     

藻黄胶囊Ⅲ号对人肾间质成纤维细胞的影响

目的 探讨藻黄胶囊Ⅲ号(ZHC3)治疗慢性肾功能衰竭的机理.方法 采用不同浓度的ZHC3孵育体外培养的人肾间质成纤维细胞(HRIF),观察24h和48h时HRIF增殖与凋亡情况,检测纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)、转化生长因子β1(TGF-β1)的分泌水平.结果 各浓度的ZHC3在24h和48h时可显著抑制HRIF的增殖(P<0.01);各浓度的ZHC3在24h时减少FN的分泌(P<0.01);25μg/ml和50μg/ml浓度的ZCH3可在48h时减少TGF-β1分泌(P<0.05);对LN的分泌及HRIF的凋亡无明显影响.结论 ZHC3可抑制HRIF的增殖,而且可以减少FN、TGF-β1的分泌,这可能是ZHC3治疗慢性肾功能衰竭的机理.     

环氧化酶2基因沉默不影响人骨髓间充质干细胞定向分化的能力

背景：目前环氧化酶2基因沉默在干细胞中的研究还处在初级阶段。 目的：构建携带环氧化酶2基因沉默的慢病毒载体,观察其在人骨髓间充质干细胞中的表达,以及其定向分化潜能变化情况。 方法：应用重组慢病毒技术构建携带沉默环氧化酶2基因和绿色荧光蛋白的慢病毒载体,并用其转染体外培养第3代的人骨髓间充质干细胞,以无目的基因的慢病毒转染人骨髓间充质干细胞的实验组和未做处理的人骨髓间充质干细胞分别作为阴性对照组和空白组进行对比。转染后7 d分别提取各组细胞的总RNA和蛋白检测环氧化酶2表达量。对环氧化酶2基因沉默的人骨髓间充质干细胞和正常人骨髓间充质干细胞定向诱导,观察环氧化酶2基因沉默对人骨髓间充质干细胞成脂、成骨、成软骨能力的影响。 结果与结论：慢病毒转染3 d后,荧光显微镜下可见人骨髓间充质干细胞发出绿色荧光,阴性对照组转染效率可达90%以上,实验组转染效率达85%以上。RT-PCR和Western blot检测结果显示, 环氧化酶2基因在人骨髓间充质干细胞中的基因水平和蛋白水平均得到了明显抑制。环氧化酶2基因转染对人骨髓间充质干细胞成脂、成骨、成软骨能力无明显影响。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

流式细胞术在精液检测中的应用

流式细胞术(FCM)是20世纪70年代发展起来的一种单细胞快速分析技术,已广泛应用于细胞生物学和医学的各个领域.精子质量检测是诊断男性不育的重要手段,由于检测精子数低及主观因素影响,常规的精液检查只能反映精子的形态特征和有限的功能,不能为生育力提供准确评估的依据.将FCM用于精液检查,可把定性的描述过渡到定量的研究,并可进行数据统计,大大提高了实验结果的科学性,而且可对精液进行高通量、多参数分析.因而FCM为客观地评价男性生育能力提供了有利的条件,有着广泛的应用前景.本文对流式细胞术在精液检测中的应用进行综述.