白细胞介素8－251A/T单核苷酸多态性及其血浆水平与冠心病易感性的关系

目的研究白细胞介素8-251A/T单核苷酸多态性及其血浆水平与冠心病易感性的关系。方法应用聚合酶链反应限制片长多态性检测冠心病组与对照组白细胞介素8-251A/T单核苷酸多态性,酶联免疫吸附法测定白细胞介素8血浆水平。结果白细胞介素8血浆水平在冠心病组显著高于对照组(P<0.05),-251A/T基因型频率、等位基因A和T频率在两组间差异无统计学意义(P>0.05)。但是与其他冠心病患者相比,急性冠状动脉综合征患者AA基因型明显减少(OR=0.43,95%CI为0.2～0.97,P<0.05)。结论白细胞介素8血浆水平与冠状动脉粥样硬化病变有相关性。-251A/T位点单核苷酸多态性与冠心病无相关性,但可影响冠心病的临床表现。AA基因型或许能降低急性冠状动脉综合征的发病风险。     

3种基因工程藻对中华按蚊幼虫杀灭作用的实验研究

本实验观察了３种基因工程杀蚊幼蓝藻对中华按蚊Ⅲ龄幼虫的杀灭作用。结果表明，当喷施工程藻浓度高于３．０×１０５ｃｅｌｓ／ｍｌ时，作用２４ｈ后，中华按蚊幼虫死亡数较低，而在４８ｈ、７２ｈ后蚊幼虫大部分（６７％以上）死亡；在喷施工程藻浓度低于３．０×１０４ｃｅｌｓ／ｍｌ时，２４ｈ、４８ｈ和７２ｈ的杀蚊幼效果均较差，此结果明显低于工程藻对淡色库蚊幼虫的作用效果。因此在应用基因工程藻进行现场控制蚊幼虫时，特别是在有较多按蚊幼虫的孳生地，应该考虑联合应用其它防治方法。     

ApoE基因多态性与血管性痴呆关系的实验研究

目的　探讨 Apo E基因多态性与血管性痴呆 ( Va D)的相互关系。方法　应用聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性 ( PCR-RFLP)技术 ,检测脑卒中后 Va D组与未发生 Va D的对照组患者的 Apo E基因型分布及出现频率。结果　 Apo E基因的ε4 / 4基因型 ,在 Va D组的出现频率明显高于未发生 Va D的对照组 ( P<0 .0 5 ) ,其余各基因型的出现频率 ,两组间差异无显著性 ( P>0 .0 5 )。结论　Apo E基因的 ε4 / 4基因型与 Va D的发生密切相关 ;等位基因ε4可能是 Va D的一种遗传易感性因子。     

p21WAF1与p27KIP1真核双表达载体的构建鉴定及在胃癌细胞中的表达

目的 构建p21WAF1与p27KIP1真核双表达载体,体外转染胃癌7901细胞,观察其在胃癌细胞中的表达及相关特性.方法 提取人全血总RNA,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增p21WAF1和p27WAF1基因并将其分别克隆到真核双表达载体pIRES中构建重组质粒pIPES-p27KIP1-p21WAF1,经酶切和测序鉴定重组质粒.脂质体介导重组质粒plRES-p27KIP1.p21WAF1"转染胃癌7901细胞,收集并提取转染后12、24、48、72 h和5 d各细胞的总RNA,逆转录成cDNA,荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测各细胞中p21WAF1和p27KIP1在RNA水平的表达.带有绿色荧光蛋白的pIRES-EGFP作为对照.结果 RT-PCR扩增分别获得约500和600 bp大小的产物,重组质粒pIRES-p27KIP1.p21WAF1经酶切和测序鉴定证实为p21WAF1和p27KIP1基因.转染胃癌7901细胞48 h时转染率为68%.与空质粒对照组比较,重组质粒转染胃癌7901细胞12、24、48、72 h和5 d后FQ-PCR证实p27KIP1的Ct值(cycle threshold,Ct)分别减少8.2、10、10、7.4和6.7,p21WAF1的Ct值分别减少7.4、8.2、8.2、6.3和5.70其中24 h和48 h的Ct值减少最大.结论 真核双表达载体pIRES-p27KIP1.p21WAF1构建成功并能在胃癌7901细胞内高效表达.     

p21waf1基因转染对乳腺癌细胞中心体复制和增殖活性的影响

目的 观察p21waf1基因转染对人乳腺癌细胞增殖活性和中心体复制的影响.方法 应用脂质体介导法将pIRES-p21waf1真核表达载体转染人人乳腺癌细胞系MCF-7,MTF法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期分布,免疫荧光技术检测乳腺癌细胞的中心体复制情况.结果 p21waf1基因转染后乳腺癌细胞生长显著受抑制,细胞周期停滞于G1期,转染组G1期、S期和G2/M期细胞比例分别为(70.52±3.21)%、(16.38 4±1.17)%、(9.42 ±0.98)%,未转染组则为(49.84±1.58)%、(36.83±1.36)%、(15.64±1.09)%,两者比较差异有统计学意义,P值分别《0.01、《0.05、《0.05.中心体复制异常的乳腺癌细胞数较转染前明显减少(P《0.01).结论 p21waf1基因转染能够抑制人乳腺癌细胞增殖和中心体的异常复制,进而阻止乳腺癌的发生发展,可能成为乳腺癌治疗的一种新手段.     

不同温度下淡色库蚊增殖能力的实验研究

在六个不同温度（１６，１９，２２，２５，２８和３１℃）下观察了淡色库蚊种群的发育、存活和繁衍的动态，证明该蚊种的卵、幼虫及成蚊的发育历期和生殖营养周期在观察温度范围内均随温度的升高而缩短，在温度低于１６℃和高于３１℃时该蚊种卵的孵化率、幼虫的存活率及成蚊的产卵力极低，而且不易存活。在表示种群增殖的参数中，内禀增长能力（ｒｍ）和周限增长速率（λ）在１６～２８℃时随温度的升高而逐渐增强（ｒｍ由０．１３５４到０．１９９５，λ由１．１４５０到１．２２０８），而在３１℃时却呈降低的趋势（ｒｍ＝０．１８７７，λ＝１．２０６５）。其中２５～２８℃时的增殖能力最强。经统计显示，潜在性传播丝虫病的蚊虫比例在１９～３１℃时高达６０％以上，传病潜能极大。     

靶向多药耐药基因mdr1 RNA干扰载体的构建及鉴定

目的 构建靶向人多药耐药基因mdr1的microRNA(miRNA)干扰表达载体并进行鉴定. 方法 设计并合成4对编码mdr1 pre-miRNA的单链寡核苷酸,退火成双链后将其连接入miRNA干扰载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR,构建成重组质粒,酶切并测序鉴定其正确性. 结果 获得的重组质粒经酶切测序证实其插入片段大小与预期相符,序列完全正确. 结论 成功构建了4个靶向mdr1的miRNA干扰载体.     

RhoA、RhoC串联RNA干扰载体的构建及在结直肠癌细胞中的表达

目的 探讨RhoA、RhoC串联RNA干扰载体的构建及在结直肠癌细胞中的表达.方法 设计合成4对靶向RhoA与RhoC基因的各两对寡核苷酸序列,退火后分别克隆入shRNA表达载体;通过一系列的酶切与连接,将该4段干扰片段串联起来,构建一个同时表达4个shRNA的重组质粒.经酶切和测序鉴定重组质粒.脂质体法转染HCT116,荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测各细胞中RhoA、RhoC mRNA的表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖活性.结果　经酶切和测序证实重组质粒pGenesil2.7-A1+A2+C1+C2构建成功.转染该重组质粒后细胞中RhoA、RhoC mRNA的表达水平分别为(0.78±0.11)和(0.90±0.21),明显低于空白对照组(0±0.15、0±0.09)和阴性对照组(-0.05±0.12、0.11±0.10,P＜0.05),且细胞的生长增殖率(63.8±12.5)%也显著低于对照组和质粒对照组(101.6±13.7)%(P＜0.05).结论　成功构建4个shRNA串联的重组表达载体,该载体可在体外高效表达.

Abstract：

Objective To construct and identify recombinant RhoA and RhoC shRNAs Tandem expression vector pGenesil2. 7-A1 + A2 + C1 + C2 and observe its expression in human colorectal carcinoma cells HCT116. Methods Four pairs of hairpin-like oligonucleotide sequences special for human RhoA or RhoC gene were designed and synthesized. The annealed oligonucleotide fragments were subcloned into four plasmids each with a different promotor. Then the four oligonucleotide fragments were series connected to construct an efficient multiple shRNAs expression system. The tandem array multiple shRNAs expression vector was confirmed by enzyme digestion and DNA sequencing and then was transfected into HCT 116 usingLipofectamneTM 2000. The expression of RhoA or RhoC mRNA was detected by fluorescence quantitative polymerase chain reaction (FQ-PCR). Cellular proliferation inhibitory activity was determined by methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay. Results Enzyme digestion and DNA sequencing showed that the oligonucleotide fragments were correctly inserted into pGenesil2. 7-A1 + A2 + C1 + C2 plasmid. After transfection, the expression of RhoA or RhoC mRNA was (0.78 ±0. 11)or (0.90 ±0.21) ,significantly lower than that in control group (0 ±0. 15、0 ±0. 09) and plasmid control group ( -0. 05 ±0. 12、0. 11 ±0. 10)(P＜0. 05) ,and the proliferation rate (63. 8 ± 12. 5)% was also lower as compared with control group and plasmid control group ( 101.6 ± 13.7 ) % ( P ＜ 0. 05 ). Conclusion The recombinant tandem array multiple shRNAs expressing vectors can effectively silence the expression of RhoA or RhoC in human colorectal carcinoma cells.     

全反式维甲酸对兔颈动脉内膜损伤病灶中内膜增生和IL-8及PECAM-1表达影响

目的观察全反式维甲酸(ATRA)对兔颈动脉内膜损伤病灶中内膜增生和白细胞介素-8(IL-8)、血小板内皮细胞黏附分-1(PECAM-1)表达的影响。方法将54只新西兰大白兔随机分为假手术组、对照组和治疗组3组。对照组和治疗组给予高脂饮食,2周后,用空气干燥法制作颈动脉内膜损伤病灶模型,治疗组于术前3d开始给予ATRA灌胃。假手术组给予普通饮食,2周后分离暴露颈动脉但不损伤内膜。于术后第7、14、28天分别处死各组动物,取损伤血管进行形态学观察,采用免疫组化法检测IL-8和PECAM-1的表达水平。结果假手术组未见内膜增生,IL-8无表达,PECAM-1仅有微量表达;对照组术后7d内膜开始增生,14、28d时内膜增生明显,管壁有粥样斑块形成,管腔狭窄,IL-8和PECAM-1表达量增多;治疗组内膜增生相对于对照组较轻,14和28d时内膜面积显著低于对照组(t=4.041、3.896,P<0.05),治疗各组IL-8和PECAM-1的阳性表达指数也显著低于对照组(t=3.368～4.421,P<0.05)。结论 ATRA可通过抑制IL-8和PECAM-1的表达从而抑制动脉内膜损伤病灶中的内膜增生,维持粥样斑块的稳定性。     

非小细胞肺癌及癌旁组织中血管内皮生长因子C 及其受体mRNA的表达与临床意义

非小细胞肺癌(NSCLC)转移依赖于肿瘤局部血管生成的理论已经得到证实，而事实上NSCLC似乎更易于经淋巴道转移。由于缺乏明确的淋巴管生成因子和标记因子，对淋巴转移的研究进展缓慢，血管内皮生长因子(VEGF)C是迄今发现的惟一淋巴管内皮细胞刺激因子。有研究显示，多种恶性肿瘤中VEGF-C高表达，并且和肿瘤的淋巴转移正相关。