低分子质量肝素联合更昔洛韦体外抗人巨细胞病毒的作用

目的 研究低分子质量肝素(LMWH)联合更昔洛韦(GCV)体外抗人巨细胞病毒(HCMV)感染的作用.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定LMWH联合GCV对人胚肺成纤维细胞(HELF)的最大无毒质量浓度(TC0).应用体外细胞培养技术建立HCMV-AD169感染HELF模型.固定联合药物中LMWH的TC0(625.00 mg·L-1),设LWMH 625.00 mg·L-1、GCV 35.00 mg·L-1、GCV 17.50 mg·L-1、GCV 8.75 mg·L-1、LMWH 625.00 mg·L-1+ GCV 35.00 mg·L-1、LMWH 625.00 mg·L-1+ GCV 17.50 mg·L-1、LMWH 625.00 mg·L-1+ GCV 8.75 mg·L-1 7个不同用药组,分别干预HCMV感染细胞模型,使用MTT法检测各组细胞存活率,观察感染细胞特征性细胞病变(CPE),同时应用荧光定量PCR法检测用药后各组HCMV的载量.结果 联合药物的TC0中GCV的质量浓度为375.00 mg·L-1,LMWH的质量浓度为625.00 mg·L-1.当HCMV AD169浓度为100倍半数组织培养感染量(TCID50)感染HELF时,LMWH和GCV均可提高受染细胞存活率,降低受染细胞的HCMV DNA的拷贝数;当固定LMWH的TC0,与3种不同质量浓度GCV配伍时,均在HELF上有明显的抗HCMV的生物活性,并显示配伍后的抑制作用明显大于对应质量浓度单用GCV的抑制作用(P<0.01);当联合用药中GCV剂量减半时与全量应用GCV时的抗HCMV效果相同[即GCV 35.00 mg·L-1组与联合用药LMWH 625.00 mg·L-1+GCV 17.50 mg·L-1组的病毒抑制率和DNA拷贝数比较差异无统计学意义(P>0 05)];且联合用药对细胞的毒性试验结果及显微镜下观察细胞形态变化显示,随着联合用药中二者药物质量浓度的下降,细胞存活率升高,对细胞的毒性作用减弱.结论 LMWH联合GCV具有良好的体外抗HCMV作用,二者具有协同抗病毒作用.     

TLR8在小鼠DC2.4细胞中的表达及其作用

目的探讨应用CL075和Poly(dT)后,TLR8及其相关细胞因子IL-12、IL-10在小鼠DC2.4细胞中的表达情况。方法常规培养DC2.4细胞,光学显微镜观察未刺激组、Poly(dT)刺激组、CL075和Poly(dT)共同刺激组细胞的形态变化;Real-timePCR测定TLR8、IL-12、IL-10的mRNA表达;ELISA测定IL-12、IL-10的蛋白表达;Western blot测定TLR8的蛋白表达。结果未刺激及Poly(dT)刺激组细胞较幼稚,树突较短且少。CL075和Poly(dT)刺激组细胞活化,树突增多且伸长;Poly(dT)刺激组DC2.4细胞中TLR8、IL-12、IL-10的mRNA及蛋白表达量与阴性对照组相比均无统计学意义。CL075和Poly(dT)刺激组DC2.4细胞中TLR8、IL-12的mRNA及蛋白表达量较阴性对照组明显升高(P<0.05或P<0.01),而IL-10的mRNA及蛋白表达量则明显低于阴性对照组(P<0.01或P<0.05)。结论应用CL075和Poly(dT)后,TLR8、IL-12在小鼠DC2.4细胞中的表达水平明显升高,而IL-10的表达水平则明显降低。     

低分子肝素对新生鼠肝细胞先天性感染人巨细胞病毒的影响

目的 研究低分子肝素( LMWH)对新生鼠肝细胞先天性感染人巨细胞病毒(HCMV)病毒学和病理学的影响.方法 取健康纯系清洁级BALB/c鼠60只,10周龄,雌雄各半,均分为5组,每组6对.LMWH干预组和阳性对照组腹腔接种6.0 lg半数组织培养感染剂量(TCID50)的HCMV AD169,空白对照组腹腔注射高糖改良Eagles培养液0.5 mL/只,然后交配.LMWH干预Ⅰ组的雌鼠在孕期给予皮下注射LMWH 1000 U/kg×10 d;LMWH干预Ⅱ组的雌鼠在孕期给予皮下注射LMWH 1000 U/kg×5d,待生产后再给新生鼠皮下注射LMWH 1000 U/kg×5 d;LMWH干预Ⅲ组在生产后予新生鼠皮下注射LMWH 1000 U/kg×10d.产后10 d处死新生鼠,取肝脏,进行病毒分离、干湿质量测定、病理学检查和荧光定量PCR检测.多组间比较采用方差分析.结果 阳性对照组新生鼠肝组织悬液中10d可分离到HCMV,而LMWH干预的3组新生鼠需24 d分离到HCMV.阳性对照组新生鼠肝组织有浊肿、空泡变性,核内有嗜碱性包涵体,部分肝细胞坏死,而LMWH干预组肝组织仅有轻度肝细胞浊肿变性,炎性反应轻微,类似空白对照组.LMWH干预组肝组织含水量较阳性对照组明显降低.LMWH干预的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组50 mg肝组织HCMV DNA载量对数值分别为(3.26±0.43)、(3.26±0.41)和(3.32±0.51) lg拷贝,较阳性对照组的(7.38±0.53) 1g拷贝显著降低(F=314.620,P＜0.01),但LMWH干预组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 LMWH在宫内和出生后干预能显著减少肝细胞HCMV复制,减轻肝组织炎性反应.     

肿瘤坏死因子-α基因多态性与乙型肝炎病毒宫内感染易感性的关系

目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因-238位点G／A单核苷酸多态性与乙型肝炎病毒(HBV)宫内感染易感性的关系。方法 应用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测HBV标志物阳性母亲所生45例HBV宫内感染儿童(Ⅰ组)、85例宫内未感染儿童(Ⅱ组)和126例对照组儿童TNF-α基因-238位点G／A单核苷酸多态性。结果 HBV宫内感染组TNF-α基因-238位点A等位基因频率显著高于HBV宫内未感染组(X^2=6．797，P=0．009)和对照组(X^2=9．513，P=0．002)，HBV宫内未感染组和对照组之间差异无显著性(X^2=0．047，P=0．828)。结论 TNF-α基因启动子区-238位点A等位基因与HBV宫内感染易感性相关，可作为检测其遗传易感性的标志之一。     

妊娠期低分子质量肝素干预对新生鼠肝细胞先天性感染人巨细胞病毒的影响

目的 探讨妊娠期应用低分子质量肝素(LMWH)对新生鼠肝细胞先天性感染人巨细胞病毒(HCMV)的病理改变和病毒DNA载量的影响.方法 取健康纯系清洁级Balb/c小鼠48只.随机选择配对,每对雌雄小鼠各1只.实验组20对,正常对照组4对.实验组每4对为1组,共5组,每只分别腹腔内注射6.0 log半数组织培养感染剂量(TCID50)HCMV-AD169.正常对照组4对,每只腹腔内注射相应细胞维持液高糖改良Eagles培养液(DMEM)1.0 mL.所有小鼠于接种后配对,隔离喂养,并观察受精情况,记录受精时间.发现妊娠后,分别予实验Ⅰ组皮下注射LMWH 1 000 U·kg-1,实验Ⅱ组皮下注射 LMWH 500 U·kg-1,实验Ⅲ组皮下注射LMWH 250 U·kg-1,实验Ⅳ组肌肉注射更昔洛韦(GCV)60 mg·kg-1,各10 d;实验Ⅴ组为阳性对照组,孕鼠不注射LMWH和GCV.每组随机取10只新生鼠,出生1 d处死,取出肝脏,进行病理学检查和荧光定量PCR检测.结果 实验Ⅰ组肝组织病理损害较阳性对照组明显减轻,HCMV DNA载量[(1.60±1.12)×103拷贝数/50 mg]较阳性对照组[(5.91±2.91)×107拷贝数/50 mg]显著降低(P＜0.01),与实验Ⅳ组[(1.75±1.05)×103拷贝数/50 mg]比较差异无统计学意义(P＞0.05).实验Ⅱ组肝组织炎性反应较阳性对照组稍减轻.实验Ⅲ组肝组织炎性反应与阳性对照组比较无明显变化,实验Ⅲ组HCMV DNA载量为(5.49±2.76)×107拷贝数/50 mg,与阳性对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论在妊娠期给予LMWH 1 000 U·kg-1干预能显著降低HCMV AD169株先天性感染Balb/c新生鼠肝细胞病毒感染和复制,减轻细胞炎性反应.     

缺氧缺血性脑病分度与血浆钙的关系

缺氧缺血性脑病分度与血浆钙的关系镇江市第一人民医院儿科顾绍庆郭红梅马光琳镇江市非居住房管处医务所汤爱珍缺氧缺血性脑病（ＨＩＥ）是新生儿期较常见较严重的疾病之一［１］。随着对ＨＩＥ认识的加深，ＨＩＥ在临床上的诊断率逐渐提高。我们发现该病有较高的发生率，...     

曲普瑞林激发试验对青春早发育女童的诊断价值

目的评价曲普瑞林激发试验对青春早发育女童的诊断价值。方法分析2013年6月至2016年8月在镇江市第一人民医院儿科就诊的青春早发育女童47例及性早熟女童62例的曲普瑞林激发试验资料。结果以黄体生成素激发峰值5.05IU/L为诊断切点,青春早发育组与性早熟组诊断阳性率分别为89.4%(42/47)与90.3%(56/62),两组间诊断阳性率比较差异无统计学意义(P0.05)。结论曲普瑞林激发试验对判断女童青春早发育的性质具有诊断价值,且大多数黄体生成素激发峰值在30~60min出现。     

更昔洛韦体外抗人巨细胞病毒的实验研究

目的:探讨更昔洛韦体外抑制人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)的作用方式.方法:根据病毒复制周期设计3种作用模式来观察更昔洛韦对HCMV的抑制作用:模式Ⅰ将病毒与细胞混合后,再加入药物;模式Ⅱ将药物与细胞混合后,再加入病毒;模式Ⅲ将药物与病毒混合后再加入细胞.通过观察细胞病变效应,用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,以确定该药物治疗指数.结果:更昔洛韦对人胚成纤维细胞半数中毒浓度(TC50)为1 685.23 mg/L.在模式Ⅰ中,更昔洛韦对HCMV半数抑制浓度(IC50)为35.255 mg/L,治疗指数为47.8;在模式Ⅱ和Ⅲ中,更昔洛韦对HCMV无明显抑制作用.结论:更昔洛韦对HCMV感染细胞后显示出显著的抑制作用,且随药物浓度的增加其作用逐渐增强,存在明显的量效关系.同时,体外实验显示,更昔洛韦对人胚成纤维细胞感染HCMV无预防作用.