The Active Metabolite of Leflunomide A771726 Inhibits Corneal Neovascularization

The effects of A771726, the active metabolite of leflunomide, on experimental rat corneal neovascularization （NV） in vivo and on cultured human umbilical vein endothelial cells in vitro were studied. The corneal NV was induced by alkali burn in 40 SD rats. The rats were randomly divided into 4 groups with 10 rats in each group. Group A was treated with 0.9% sodium chloride （control group）, and group B, group C and group D were given different concentrations of A771726 eye drops （0.5%, 1.0%, 2.0% respectively） 4 times daily during days 0--28. The occurrence and development of corneal NV were observed at 4, 7, 14, 21 and 28 day after alkali burn by a slit lamp microscope. The cultured human umbilical vein endothelial cells （ECV-304） were incubated with A771726 solution at different concentrations （20, 40, 80, 160, 320 μmol/L） for 36 h. The proliferation of cells was assessed by methyl thiazolyl tetrazolium （MTT）, and the expression of proliferating cell nuclear antigen （PCNA） in cells was detected by using immunofluorescence under the laser confocal microscope. The rat model showed that the onset of corneal NV was delayed and progression of corneal NV was inhibited in the groups C and D. The corneal NV areas in groups C and D were significantly smaller than in groups A and B （P〈0.01）. No significant difference was found in corneal NV areas between groups C and group D （P〉0.05）. A771726 solution （940 μmol/L） could inhibit proliferation of human umbilical vein endothelial cells and decrease the expression of PCNA in cells significantly, A771726, as the active metabolite of leflunomide, strongly prevented corneal NV induced by alkali burn in the in vivo model, and inhibited proliferation of human umbilical vein endothelial cells in the in vitro model. Therefore, A771726 may serve as an angiogenic inhibitor in the treatment of corneal NV.     

来氟米特活性代谢物A771726抑制角膜新生血管的实验研究

目的 探讨来氟米特活性代谢物丙二酸次氮酰胺(A771726)对角膜新生血管的抑制作用及机制. 方法 (1)碱烧伤法制作大鼠角膜新生血管模型,40只SD大鼠随机分成A、B、C及D组,每组10只大鼠(10只眼).空白对照组(A组)生理盐水滴眼,B、C、D组伤后分别滴用0.5%、1.0%及2.0%的A771726滴眼液,均每日4次,共28 d.每日裂隙灯显微镜下观察角膜新生血管的生长情况,测量新生血管面积.(2)不同浓度A771726与体外培养的人脐静脉内皮细胞(ECV-304)共同孵育,以四唑盐比色法(MTT法)检测细胞的增生活性,激光共聚焦显微镜检测免疫荧光染色增生细胞核抗原(PCNA)的表达.结果 (1)C、D组大鼠角膜新生血管面积均显著小于空白对照A组(P＜0.01),而B组大鼠角膜新生血管面积与A组差异无统计学意义(P＞0.05).(2)40、80、160、320 μmol/L A771726与人脐静脉内皮细胞共同孵育36 h可抑制细胞增生,随浓度增加抑制作用增强,免疫荧光染色显示细胞核PCNA的表达有降低.结论 A771726能通过抑制血管内皮细胞增生阻止角膜新生血管生成.     

角膜移植免疫排斥反应防治研究进展

同种异体角膜移植是角膜病致盲患者复明的终末治疗手段,但移植术后免疫排斥反应是角膜移植失败的首要原因,尤其在高危角膜移植(新生血管、多次角膜移植及活动性炎症)免疫排斥反应高达50%以上。因此,预防角膜移植排斥反应发生是角膜移植成功的关键。本文针对角膜移植排斥反应发生机制,对目前防治角膜移植免疫排斥反应等研究热点进行综述。     

组织工程支架材料——交联透明质酸置入角膜生物相容性研究

目的探讨交联透明质酸材料对兔角膜组织的生物学反应的影响,评价其作为角膜组织工程支架材料的可行性。方法将交联透明质酸材料置入兔角膜基质层间内3个月,观察置入材料在角膜内生物学反应。结果观察期内交联透明质酸材料与兔角膜基质愈合良好,角膜组织学观察未见有淋巴等炎症细胞浸润。结论交联透明质酸材料置入兔角膜后无明显炎症反应,其生物相容性良好,是一种理想的角膜组织工程支架材料。     

来氟米特活性代谢物A77 1726对翼状胬肉成纤维细胞增生的影响

目的 观察来氟米特活性代谢物丙二酸次氯酰胺(A77 1726)对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞(HPFs)增生的影响,寻找翼状胬肉药物辅助治疗和预防复发的新方法 .方法 采用组织块法原代培养HPFs,筛选A77 1726药物浓度,采用0～200 μmol/L的A77 1726作用与体外培养的第3～7代HPFs,分别于24～96 h后观察各梯度浓度A77 1726对HPFs的影响.MTT法检测HPFs的增生活性;免疫细胞化学法测定HPFs中增生细胞核抗原(PCNA)的表达程度.结果 在20～200 μmol/L浓度作用24～72 h,A77 1726可呈浓度依赖和时间依赖性地抑制HPFs增生(P＜0.05).A77 1726浓度在20～200 μmol/L时能浓度依赖性地抑制HPFs中PCNA的表达(P＜0.05).结论 A77 1726可显著抑制体外培养的HPFs增生活性,且这种抑制作用在一定范围内呈浓度依赖性和时间依赖性.     

层粘连蛋白和表皮生长因子对兔角膜内皮细胞周期的影响

目的　观察层粘连蛋白和表皮生长因子单独及联合应用对兔角膜内皮细胞周期的影响。方法　体外培养角膜内皮细胞分为对照组、层粘连蛋白组、表皮生长因子 (EGF)组和联合应用组 ,倒置显微镜观察各组细胞形态及数目变化 ;计数 0、12、2 4、36h的各组细胞数目并绘制细胞生长曲线 ;流式细胞技术检测各组细胞周期。结果　倒置显微镜观察及细胞生长曲线显示 ,与对照组相比 ,层粘连蛋白组、EGF组和联合应用组细胞数目明显增多 ,其中联合应用组最为显著 ;细胞周期检测结果显示 ,层粘连蛋白组、EGF组和联合应用组G0～G1期细胞比例显著下降 (P <0 .0 5 ) ,G2～M期细胞比例显著提高 (P <0 .0 5 ) ;EGF组和联合应用组S期细胞比例显著提高 (P <0 .0 5 ) ;联合应用组与层粘连蛋白组相比 ,G0～G1期细胞比例显著下降 (P <0 .0 5 )。结论　层粘连蛋白和表皮生长因子单独及联合应用都可明显促进角膜内皮细胞分裂增生 ,且联合应用有协同作用。     

Inhibitory Effect of Curcumin on Proliferation of Human Pterygium Fibroblasts

In order to investigate the effect of curcumin on proliferation and apoptosis of human pterygium fibroblasts (HPF) in culture and search for a new method to prevent the recurrence after pterygium surgery, HPF was incubated with 0-160 μmol/L curcumin for 24-96 h. The MTT method was used to assay the biologic activities of curcumin at different time points and different doses. The expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in each group was detected by immunohistochemistry. The cell cycle distribution was detected by flow cytometry (FCM). Admini- stration of 20-80 μmol/L curcumin for 24-72 h could significantly inhibit HPF proliferation in a dose- and time-dependent manner (P<0.05). After treatment with curcumin at different concentrations of 20, 40, 80 and 160 μmol/L for 24 h, FCM revealed there was a significant sub-G1 peak at each concentration. The number of HPF in G0/G1 phase was increased, while in S phase, it was decreased (P<0.05). At the concentration of 20-80 μmol/L, curcumin, in a dose-dependent manner (P<0.05), could inhibit the expression of PCNA in HPF. It was suggesterd that curcumin could significantly in- hibit the proliferation of HPF, make HPF arrest in G0/G1 phase and induce the apoptosis of HPF in a dose- and time-dependent manner.     

来氟米特活性代谢物A771726对大鼠角膜移植排斥反应的影响

目的探讨来氟米特活性代谢物A771726对大鼠角膜移植排斥反应的抑制作用。方法建立SD-Wistar大鼠同种异体穿透角膜移植模型,随机分组。A组为空白对照组;B、C、D组分别为0．5％、1．0％及2．0％A771726滴眼液组;E组为Wistar大鼠自体移植对照组。术后比较各组角膜植片排斥指数（RI）及植片存活时间,并对植片进行组织学及免疫组织化学染色观察。结果A组角膜植片存活时间为（9．38±2．26）d,B组（10．13±2．41）d,C组（17．57±1．72）d,D组（17．50±2．14）d,E组（〉28．00）d。A组、B组分别与C组、D组植片存活时间差异有统计学意义（P〈0．01）。移植术后10d,A组、B组角膜植片发生排斥反应,植片高表达IFN-γ及ICAM-1;术后20d,C组、D组植片发生排斥反应,植片IFN-γ及ICAM-1表达增高。结论局部应用A771726滴眼液能有效抑制角膜移植排斥反应。     

脱水猪角膜基质为载体体外构建猫角膜内皮组织

目的:以脱水猪角膜基质为载体体外构建猫角膜内皮组织,并观察其形态结构,以寻找体外构建角膜组织最佳载体材料及方法,最终目的是体外构建可用于移植的角膜内皮组织。方法:以脱水处理的猪角膜基质片为载体,将猫角膜内皮细胞接种于去除猪角膜内皮细胞的后弹力膜上,在添加了表皮生长因子和层粘连蛋白的培养液中培养7 d,分别观察倒置显微镜下、组织学切片及扫描电镜下内皮组织的形态结构。结果:倒置显微镜下,组织培养的猫角膜内皮细胞形成单层内皮组织,排列较规律,细胞间连接紧密;组织学观察发现,培养的猫角膜内皮细胞形成完整的内皮组织,贴附于脱水基质的后弹力膜上,与正常的角膜内皮组织结构相似;扫描电镜下,组织培养的猫角膜内皮细胞间连接紧密,细胞大小不甚一致,胞核清晰。 结论:以脱水猪角膜基质为载体,体外成功构建出猫角膜内皮组织,其形态结构近似于正常角膜内皮组织。     

角膜体外重建异种生物载体材料生物相容性研究

目的　研究异种 (猪 )角膜基质的生物相容性 ,评价其作为角膜体外重建载体的可行性。方法　将新鲜、脱水两种猪角膜基质分别植入新西兰白兔角膜层间 ,定期临床观察植片愈合情况 ,并于术后 2周、1、2、4、8个月取兔角膜进行组织学观察。结果　临床观察 :全部植片存活 ,12只术眼未见角膜水肿混浊、角膜新生血管、排斥反应发生 ,新鲜植片在 2个月左右已透明 ,脱水植片在 6个月后透明。组织学观察 :新鲜植片 4个月时与兔角膜基质相融愈合 ,脱水植片经角膜细胞再分布、胶原纤维改建重塑 ,于 8个月后与兔角膜基质相融愈合 ,2组植片愈合过程中未见有淋巴细胞浸润及新生血管生成。结论　异种 (猪 )角膜基质具有良好的生物相容性 ,是一种理想的角膜体外重建载体材料。