实时荧光聚合酶链反应检测乙肝病毒YMDD变异标本影响因素的研究

目的探讨标本贮存温度、血红蛋白、高胆红素因素对熔解曲线法检测HBV-YMDD变异结果的影响。方法服用拉米夫定出现YMDD变异株的慢性乙型肝炎患者的血清,在不同的贮存温度、血红蛋白、胆红素浓度下,用杂交探针溶解曲线法检测,观察其荧光扩增曲线的Ct值及熔解曲线的Tm值。结果在4℃和25℃贮存的血清标本,其Ct值与对照组比较有显著性差异(P<0.001);在-20℃贮存温度下,其Ct值与对照组比较无显著性差异(P>0.05);Hb浓度为60μg/L及600μg/L的血清标本,其Ct值与空白对照组比较均有显著性差异(P<0.001);胆红素浓度为25.6μg/L及45.2μg/L的血清标本,其Ct值与对照组比较均有显著性差异(P<0.001)。熔解曲线的Tm值与对照组比较均无显著性差异(P>0.05)。结论标本贮存温度、血红蛋白、高胆红素因素对实时荧光聚合酶链反应检测乙肝病毒YMDD变异结果有影响,尤其是低拷贝HBV-DNA的血清标本,上述因素可能会导致结果的假阴性;对基因分型特异性无明显影响。     

原发性甲状腺功能减退症患者血清25-羟基维生素D的测定及意义

目的探讨原发性甲状腺功能减退症患者血清中25-羟基维生素D[25-（OH）D]变化及临床意义。方法用电化学发光法检测86例原发性甲状腺功能减退症患者与56例健康人群（正常对照组）血清25-（OH）D水平,用化学发光法检测上述人群血清三碘甲状腺原氨酸（T3）、游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、甲状腺素（T4）、游离甲状腺素（FT4）、促甲状腺激素（TSH）及甲状旁腺激素（PTH）水平,用邻甲酚酞络合酮分光光度法检测两组人群血清总钙。结果原发性甲状腺功能减退症患者血清25-（OH）D和总钙水平明显低于正常对照组（P＜0.05）,两组间PTH差异无统计学意义（P＞0.05）。原发性甲状腺功能减退症患者组中,25-（OH）D正常和缺乏者的FT4和TSH比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论原发性甲状腺功能减退症患者的维生素D和总钙水平较低,需及时检测并补充维生素D。     

乳腺癌患者外周血CK19基因表达的检测及临床价值分析

目的探索外周血CK19基因表达的检测及在乳腺癌诊断中的应用价值。方法应用逆转录结合荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测乳腺癌MDA-MB453细胞株血液标本模型和280例临床标本的CK19表达,同时检测三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)表达作为PCR方法的监控指标。结果逆转录结合FQ-PCR检测MDA-MB453细胞株血液标本模型的灵敏度为107个血细胞中含1个乳腺癌细胞的水平。280例外周血临床标本的CK19表达,乳腺癌组(38/120)与非乳腺癌组(20/80)比较,差异无统计学意义(P>0.05);乳腺癌组(38/120)与正常对照组(2/80)比较,差异有统计学意义(P<0.01);乳腺癌淋巴结转移组(21/53)与未见淋巴结转移组(17/67)比较,差异无统计学意义(P>0.05);乳腺癌术后2年以上者,复发组(3/9)与未复发组(6/31)比较,差异也无统计学意义(P>0.05)。GAPDH表达均阳性。结论CK19是上皮细胞性癌细胞的较特异指标,诊断乳腺癌的特异性不强,但可用作病理学检查的补充,或结合其他特异性指标共同诊断乳腺癌微转移和复发,具有一定的价值。     

体外siRNA抑制乳腺癌细胞株端粒逆转录酶基因的表达

目的:筛选能高效抑制乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-453端粒逆转录酶(hTERT)基因表达的RNA干扰靶点,为乳腺癌的基因治疗提供依据.方法:构建针对hTERT基因的三种siRNA(siRNA-hTERT1,siRNA-hTERT2和siRNA-hTERT3),分别转导入乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-453.同时以无同源性的siRNA-hTERT4作阴性对照,含GFP基因的载体作阳性对照.应用实时聚合酶链反应(real-time PCR)和Western Blot技术检测siRNA处理前后hTERT基因表达变化;MTT法检测细胞生长率;流式细胞术分析基因沉默对细胞凋亡的影响.结果:与阴性对照组相比,siRNA-hTERT1,siRNA-hTERT2和siRNA-hTERT3三个实验组siRNA转染细胞后,hTERT的mRNA表达量下调至21%～40%,蛋白表达下降至50%,而三个实验组间差异无统计学意义(P>0.05).转染48 h后,MCF-7细胞抑制率分别为(57±4.3)%,(61±4.3)%,(65±6.0)%;MDA-MB-453细胞抑制率分别为(45±5.1)%,(45±4.1)%,(50±4.0)%.流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率有所增加,MCF-7细胞为(18.90±0.11)%,(27.30-I-0.18)%,(27.00 4-0.16)%;MDA-MB-453细胞为(12.25 4-0.17)%,(17.80±0.19)%,(20.60 4-0.21)%.结论:经siRNA-hTERTl,siRNA-hTERT2,siRNA-hTERT3处理均可明显抑制MCF-7和MDA.MB-453乳腺癌细胞的增殖及hTERT基因的表达,能够明显促进细胞的凋亡.     

体外RNA干扰人乳腺癌细胞端粒酶逆转录酶基因表达及促凋亡的研究

我们以乳腺癌MDA-MB-453细胞株为模型,用小片段RNA(siRNA)特异性抑制人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的表达,了解其促肿瘤细胞凋亡的效果.     

小分子干扰核糖核酸抑制乳腺癌细胞端粒酶逆转录酶表达提高阿霉素化疗的敏感性

人端粒酶逆转录酶(bTERT)是端粒酶活性的限速酶[1].抑制hTERT表达可有效抑制端粒酶活性[2],增加化、放疗的敏感性[3].本研究旨在研究hTERT基因表达被干扰后,阿霉素化疗敏感性的变化.     

外周血TSGF及hMAM表达指标监测乳腺癌微转移价值初探

目的探索TSGF和hMAM表达指标对乳腺癌细胞外周血微转移诊断的应用价值。方法分离受检者外周血单个核细胞,TRIZOL液提取总RNA,作RT-PCR并用-βactin监控;确认的cDNA先作普通PCR扩增,再作荧光定量PCR扩增。血清作TSGF检测。结果64例标本有63例确认转录为cDNA,其中乳腺癌43例、良性乳腺肿瘤和正常对照各10例。经普通PCR后再作荧光定量PCR,乳腺癌hMAM表达阳性率为53.3%、良性乳腺肿瘤和正常对照均无阳性,乳腺癌组与良性乳腺肿瘤或正常对照组间hMAM表达有显著差异;淋巴结转移组与未转移组,hMAM表达有显著差异。TSGF阳性率为1.6%,乳腺癌组与良性乳腺肿瘤组及正常对照组间无显著差异。结论二次PCR的灵敏度可成功检出外周血hMAM的表达,而单次PCR法的灵敏度不够;外周血hMAM表达指标可用于监测乳腺癌细胞微转移,但未见TSGF指标对乳腺癌微转移的监测价值。     

循环增强荧光免疫技术与化学发光免疫法检测血浆BNP的比较研究

目的分析和评价循环增强荧光免疫技术(cyclic enhanced immunofluorescent assay,CEIFA)与化学发光免疫法(chemiluminescent immunoassay,CLIA)在血浆B型脑钠肽(B-type natriuretic peptide,BNP)检测中的应用价值。 方法采用CEIFA和CLIA法分别检测50例心内科患者血浆BNP的水平,对检测结果的相关性、回收率、精密度、样本稳定性进行评估。 结果与CLIA法比较,CEIFA法回归方程为Y=0.975X＋2.910 (r=0.987,P<0.01),回收率为94.49%~100.53%,批内和批间变异系数(CV)分别为2.85%~6.66%和6.21%~12.52%,高值和中值样本结果的稳定性更高。 结论CEIFA法检测BNP具有较好的性能,较CLIA法有一定的优势,可满足临床试验室需求。     

小分子干扰核糖核酸抑制乳腺癌细胞端粒酶逆转录酶表达提高阿霉素化疗的敏感性

人端粒酶逆转录酶(bTERT)是端粒酶活性的限速酶[1].抑制hTERT表达可有效抑制端粒酶活性[2],增加化、放疗的敏感性[3].本研究旨在研究hTERT基因表达被干扰后,阿霉素化疗敏感性的变化.     

前列腺癌雄激素依赖转化后雄激素受体基因表达变化的研究

背景与目的:前列腺癌雄激素依赖性转化的机制目前尚不完全清楚,多数认为雄激素受体(androgen receptor,AR)基因的变化可能起重要作用,本研究主要探讨AR基因表达变化在前列腺癌雄激素依赖转化过程中的作用.方法:通过对33例晚期前列腺癌患者进行雄激素阻断治疗并长时间的随访,期间有18例患者发生了雄激素依赖转化,15例患者未发生雄激素依赖转化.采用RT-PCR法测定18例患者雄激素依赖转化前后及15例患者雄激素阻断治疗前后癌细胞内AR基因的表达情况.结果:18例患者雄激素依赖转化前后AR基因的表达分别为[(28.4±3.4) Ct vs (36.7±1.8)Ct],两者之间差异有统计学意义(t=14.43,P<0.001),15例患者雄激素阻断治疗前后AR基因的表达分别为[(29.5±3.1)Ct vs (29.1±3.2)Ct],两者之间差异无统计学意义(t=0.409,P>0.05).结论:AR基因表达增强是前列腺癌雄激素依赖转化的原因之一.