APA微胶囊免疫隔离生物膜制备中的质量控制

为了优化制备条件, 简化工艺, 控制质量, 本文观测了APA(海藻酸盐-聚赖氨酸-海藻酸盐)微胶囊免疫隔离生物膜制备过程中部分物理因素和化学因素与质量的关系.结果表明: 微囊的粒径与静电微囊发生仪脉冲频率呈负相关; 与推进泵速度呈正相关; 与针头内径呈正相关.随着聚赖氨酸浓度的增加, 膜厚度显著增加.微囊的粒径不随聚赖氨酸成膜反应时间延长而改变, 但影响膜的厚度.柠檬酸钠的液化时间对微囊的粒径与厚度均无明显影响.通过优化制备条件, APA微胶囊免疫隔离生物膜将具有更好的通透性、柔韧性、生物相容性和强度.     

APA-3T3细胞微囊的深低温保存

目的:通过优选冻存液的成份和浓度,建立低温保存APA微囊化小鼠成纤维细胞(3T3细胞)的方法。方法:用海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微囊(APA)包裹3T3细胞制成APA-3T3细胞微囊。以高糖DMEM培养液为基础冻存液,分别加入不同浓度的二甲基亚砜(DMSO)或牛血清白蛋白(BSA)。分别将不同的冻存液加入APA-3T3中。按程序控制降温梯度,置于液氮中保存。快速复温后,光镜下观察APA-3T3的形态、细胞活率及膜通透性。结果:①10%DMSO组的微囊内细胞活率降低最少,细胞活率达(75.68±1.54)%,P<0.01。微囊完好率达到(94.48±0.90)%,P<0.01。②与其它组相比,4%BSA组的微囊内细胞活率降低程度最小,活率达(73±1.26)%,P<0.01。微囊完好率最高,为(85.1±0.82)%,P<0.01。③加入不同成份和浓度的冻存液对微囊的通透性没有明显影响。结论:在冻存液中加入10%DMSO和4%BSA,可在低温保存的过程中较好地保护细胞的存活及微囊的完整性。     

睡眠生理参数的中医解读初探

目的 探索以中医基础理论指导、通过睡眠认识人体身心状态的方法.方法 以一种自然睡眠检测技术为平台,通过对2 000余例受试者睡眠检测数据和临床资料的分析,提出睡眠周期反映经脉循行的假说,并初步探索夜间睡眠参数趋势中的气血阴阳信息.结果 睡眠周期是睡眠过程中气血依时辰在不同经脉间循行的表现;经脉或相关脏腑的疾病状态下,睡眠的周期性以及睡眠结构会发生相应变化;夜间睡眠过程中的心率、呼吸率等动态变化同样反映了阴阳的交替、推移.结论 可将睡眠过程参数判读作为中医辨证手段的补充.     

海藻酸钙-聚赖氨酸-海藻酸钙微囊化牛肾上腺嗜铬细胞植入镇痛治疗中人体的免疫反应

目的:了解海藻酸钙-聚赖氨酸-海藻酸钙(APA)微囊化牛肾上腺嗜铬细胞(APA-BCC)植入蛛网膜下腔后患者的免疫反应。方法:实验于2002-07/2003-02在解放军总医院老年医学研究所细胞生物学研究室完成。采用腰椎穿刺术,将APA-BCC注入20例中、重度癌痛患者L3～4或L4～5蛛网膜下腔内。检测患者移植前后的血象、免疫球蛋白、T细胞亚群及脑脊液。结果:移植后外周血中淋巴细胞比例较移植前无明显变化(P>0.05)。移植后7d复查16例患者的脑脊液,其中8例(50%)脑脊液中白细胞升高,范围在(15～700)×106L-1犤(198±248)×106L-1犦。但外周血免疫球蛋白、T细胞亚群较移植前无明显变化。结论:APA-BCCs微胶囊植入癌痛患者蛛网膜下腔,未引起宿主明显的免疫反应,表明APA微囊具有良好的免疫隔离作用。     

APA微囊机械强度与化学强度的测定

1材料和方法 1.1材料倒置显微镜,恒温振荡器,微囊制备仪,APA微 囊,PBS缓冲液。 1.2方法　①APA微囊机械强度的测定于显微镜下分别 取APA微囊各100个,分装入3只100ml三角烧瓶中,加入 生理盐水50ml。置于37.5℃恒温振荡器中,以120r/min速 度水平振摇。分别于6h、24h、48和72h在光镜下计数破损 微囊的数量,计算微囊破损率(破损率=破损微囊个数/微囊 总数×100%)。②APA微囊化学强度的测定取制备好的 …     

利用激光扫描共聚焦显微镜测定APA微囊通透性

目的：海藻酸钠多聚赖氨酸海藻酸钠（ＡＰＡ）微囊能够成功地延长同种或异种移植组织或细胞的存活时间,而微囊膜的通透性是决定囊内细胞存活和微囊免疫隔离效果的关键因素。本实验用激光扫描共聚焦显微镜（ＬＳＣＭ）以测定ＡＰＡ微囊膜的通透性。方法：采用ＦＩＴＣ标记的不同分子量的葡聚糖（ＦＤ）和ＩｇＧ与微囊共孵育,观察形成的激光共聚焦图像。结果：平均分子量为７１和１６７ｋＤａ的ＦＤ及分子量为１５０ｋＤａ的ＩｇＧ均不能扩散进入微囊内,而平均分子量为１２和２０ｋＤａ的ＦＤ则可自由扩散进微囊内,平均分子量为４０ｋＤａ的ＦＤ可部分扩散进微囊内。提示微囊膜的截割分子量在４０～７１ｋＤａ之间。利用ＬＳＣＭ的时间扫描功能可动态观察ＦＤ１２向单个微囊内的扩散情况,表明较小直径微囊内ＦＤ１２增加的速度明显快于直径较大的微囊。包囊细胞和含血清的培养液对微囊膜的分子截割范围和ＦＤ１２向微囊内的扩散速度无明显影响。结论：我们制备的ＡＰＡ微囊既可允许小分子的营养物通过,以满足微囊内细胞的生存需要,又能截割７１ｋＤａ以上的大分子物质,起到免疫隔离作用。利用ＬＳＣＭ技术可简便易行地测定微囊通透性     

原发性脑瘤患者头发微量元素硒含量变化

本实验分别测定了55例神经外科患者及正常人头发中微量元素硒(Se)的含量。方法:留取被检者枕部近发根处发样,长2cm,经常规清洗,硝酸、高氯酸湿法消化处理.用2,3-二氨基萘荧光法测定硒含量。结果:①正常组(9例):发硒值为0.53±0.15μg/g:②神经经外科非肿瘤组(19例):Se=0.51±0.13μg/g.与正常组无显著差异(P>0.05);③良性脑瘤组(21例):Se=0.48±0.15μg/g,与正常组及神经外科非脑瘤组均无显著差异(P>0.05);④恶性脑瘤组(6例):Se=0.36±     

骨形态发生蛋白4对成年大鼠海马齿状回区神经细胞胆碱能表达的调节作用

目的:观察骨形态发生蛋白4海马齿状回区注射对成年大鼠神经细胞胆碱能表达的调节作用。方法:实验于2004-07/2005-03在解放军总医院老年医学研究所(全军重点实验室)完成。实验分组:选择成年雄性SD大鼠11只,按随机数字表法分为两组:骨形态发生蛋白4组(n=6),生理盐水对照组(n=5)。采用立体定向方法将骨形态发生蛋白4或生理盐水注射大鼠左侧海马齿状回区。骨形态发生蛋白4组用微量注射器将10mg/L骨形态发生蛋白41μL以1μL/min的速度注入,留针10min。生理盐水对照组将生理盐水1μL以相同的速度和方式注入相同部位。实验评估:注射后28d,对该区大鼠脑组织进行胆碱能神经细胞免疫组织化学染色,采用Image-prog-plus图像分析系统对胆碱乙酰转移酶阳性细胞面积的进行分析。结果:纳入大鼠11只,均进入结果分析。①胆碱乙酰转移酶阳性细胞形态:成年大鼠海马齿状回区骨形态发生蛋白4注射后28d时,光镜下见海马CA1,CA2,CA3区及齿状回均存有胆碱乙酰转移酶阳性神经元,其形状呈卵圆形、梭形或多边形,细胞体较大;细胞核大而圆,具有多个突起。细胞质和突起均被染成棕黄色,经苏木精复染的细胞核着色浅色,核仁明显。②胆碱乙酰转移酶阳性细胞面积:注射后28d,骨形态发生蛋白4组注药侧胆碱乙酰转移酶阳性细胞面积明显高于生理盐水对照组[分别为(194.78±22.33),(142.78±26.58)μm2],差异有非常显著性意义(F=-51.997,P=0.002<0.01);骨形态发生蛋白4组注药侧胆碱乙酰转移酶阳性细胞面积明显高于同组对侧[分别为(194.78±22.33),(158.03±36.22)μm2],差异有显著性意义(F=-31.746,P=0.03<0.05)。结论:骨形态发生蛋白4注入成年大鼠海马齿状回区可上调该区神经细胞的胆碱能表达。     

嗜铬细胞移植治疗疼痛的进展

将肾上腺髓质嗜铬细胞进行同种或异种移植正在逐渐成为一种治疗疼痛的新方法。基础研究表明 ,在中枢神经系统中移植嗜铬细胞 ,可显著缓解多种动物疼痛模型的急慢性疼痛并促进受损神经元的修复 ;临床研究也发现接受移植病人的疼痛得到明显的缓解 ,吗啡摄入量显著减少或停止。嗜铬细胞移植镇痛的具体作用机制复杂 ,现在普遍认为移植细胞分泌的各种镇痛物质通过一种“鸡尾酒”式的综合协同效应参与中枢神经系统的镇痛与修复