沉默Sema6A基因对骨肉瘤细胞U-2OS增殖和转移的影响

目的检测信号素6A(Sema6A)基因在骨肉瘤细胞系中的表达情况,探讨RNA干扰Sema6A基因对骨肉瘤U-2OS细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测骨肉瘤细胞株U-2OS、Saos-2及MG-63中Sema6A的mRNA表达水平。设计并合成针对Sema6A的小干扰RNA(siRNA)3条及阴性对照siRNA,在Lipofectamine RNAi MAX介导下转染U-2OS细胞,通过qRT-PCR检测Sema6A mRNA水平表达及蛋白质印迹法检测Sema6A蛋白水平,进而筛选出转染效率高的siRNA,CCK-8检测各组细胞活力,Transwell细胞侵袭和迁移实验检测各组细胞的侵袭及迁移能力。结果骨肉瘤细胞株中,Sema6A mRNA在U-2OS中表达最高。瞬时转染Sema6A siRNA的U-2OS细胞中Sema6A的mRNA及蛋白水平较阴性对照组均下降,与阴性对照组相比,实验组细胞的增殖、侵袭及迁移能力均增强,差异有统计学意义(P0.05)。结论 RNA干扰沉默Sema6A基因可以增强U-2OS细胞的增殖、侵袭及迁移能力。     

固骼生在骨折与骨折不愈合治疗中的应用

四肢骨折内固定手术后的骨不愈合及延迟愈合发生率往往较高,特别是在处理某些粉碎性骨折时,若处理不当更容易发生延迟愈合或骨不愈合[1].而骨折不愈合所致的再次手术植骨,均给临床治疗带来困难.本院在对四肢新鲜骨折和陈旧性骨折不愈合应用骨折内固定技术与骨缺损修复技术,结合应用固骼生(美国诺邦生物制品公司制造)植骨于临床治疗收到良好的效果,现报告如下.     

人canstatin基因重组腺病毒载体的构建及其病毒制备

目的:利用HEK293细胞内同源重组法构建带有绿色荧光蛋白报告基因的人血管能抑素(canstatin)重组腺病毒载体,扩增并纯化重组腺病毒颗粒.方法:PCR法扩增cansta-tin全长基因,克隆至pGEM-T载体,经酶切和测序证实后,亚克隆到穿梭质粒pAdS-CMV中,获得穿梭质粒pAdS-CMV/canstatin.用PasI酶单独酶切穿梭质粒pad5-CMV/canstatin和腺病毒E3区带有绿色荧光蛋白表达元件的腺病毒骨架载体,采用标准的磷酸钙方法共转染HEK293细胞.7～10 d后收获细胞裂解物,在HEK293细胞中扩增,病毒颗粒经氯化铯密度梯度离心纯化后,分光光度计检测重组病毒滴度.结果:测序证实pEGM-T/canstatin基因片段与GenBank公布的can-statin基因序列一致.重组腺病毒质粒转染293细胞后24 h观察到绿色荧光,病毒纯化后制备出高滴度重组腺病毒(病毒滴度为2.0×1015pt/L).结论:成功构建了表达canstatin基因的重组腺病毒载体并制备了重组腺病毒颗粒,为研究该基因在肿瘤治疗中的作用奠定了基础.     

嗅鞘细胞移植在修复损伤脊髓中的作用

一般认为,中枢神经系统损伤后其再生、修复和功能恢复是绝对不可能的,脊髓损伤一直是全世界医疗界最棘手的问题。1981年神经学家在基础研究中证实中枢神经损伤后的神经结构修复是可能的,掀起了各国学者对脊髓修复研究的又一次热潮,其中关于细胞移植的研究开展得尤有成效。早在1973年,科学家就发现人类的鼻黏膜每周就要新陈代谢一次,这引起了很多致力于脊髓损伤修复研究的机构和学者的兴趣。成人嗅黏膜上皮是终生不断神经化的单位,产生新神经的干细胞来源目前尚未清楚,但被认为是一种嗅上皮的基本细胞,而嗅黏膜上皮的这种再生能力则要归功于…     

人Slit2全长cDNA的真核表达及鉴定

目的:对人神经轴突导向因子Slit2(hSlit2)全长cDNA进行真核表达并进行鉴定。方法:采用分段克隆的方法获得hSlit2全长cDNA的克隆,并构建hSlit2全长cDNA真核表达重组质粒pCMV-GFP-C/hSlit2,用磷酸钙共沉淀法将其转染到人胚肾细胞HEK-293细胞中,通过免疫印迹法鉴定其蛋白表达。结果:经酶切鉴定证实hSlit2全长cDNA的真核表达载体构建成功,免疫荧光蛋白和Western blot结果证实hSlit2全长cDNA在HEK-293细胞中的表达。结论:人神经轴突导向因子hSlit2真核表达载体构建成功,为进一步完善hSlit2蛋白及各水解片段功能研究提供了实验基础。     

HoffmannⅡ Compact外固定架结合有限内固定治疗桡骨远端粉碎性骨折

目的探讨HoffmannⅡCompact外固定架结合经皮克氏针有限内固定治疗桡骨远端粉碎性骨折的临床疗效。方法采用HoffmannⅡCompact外固定架加经皮克氏针有限内固定治疗桡骨远端粉碎性骨折32例。结果32例均获随访,时间5-18（8±1.3）个月,骨折均骨性愈合,愈合时间35个月。术前尺偏角为-13°-14°（11.0°±2.1°）,掌倾角为-28°-0°（-9.5°±1.1°）;去除支架后测量：尺偏角为18°-34°（22.5°±2.5°）,掌倾角为0°-21°（12.5°±2.1°）,桡骨轴向缩短基本恢复正常,其中1例C3型缩短2 mm。关节功能按Dienst标准进行评定：优11例,良19例,可2例。结论Hoffmann Ⅱ Compact外固定架结合有限内固定治疗桡骨远端粉碎性骨折操作简单、固定可靠、疗效满意、并发症少。     

多孔钽棒置入联合髓芯减压治疗早期股骨头坏死中远期疗效的临床评价

目的探讨应用髓芯减压和多孔钽棒植入术治疗早期股骨头坏死的中远期临床疗效。方法对19例19髋早期股骨头坏死患者应用髓芯减压和钽棒植入术治疗,19例患者平均随访24个月。根据Harris髋关节评分系统进行手术前后的关节功能评价,根据ARCO分期系统进行影像学评价。结果影像学坏死区骨硬化和囊性变亦无1例进展,18例出现股骨头出现骨重建迹象而外形及关节间隙仍未发生改变。Harris评分由术前62~84分(平均75分)增加到85~99分(平均92分),优良率100%。结论采用髓芯减压加钽棒植入术治疗早期股骨头坏死,增加了股骨头负重区软骨下骨的机械支撑,可阻止影像学进展,缓解症状,促进骨长入,中远期疗效满意。     

In-Space经皮棘突间撑开系统治疗腰椎不稳症的初步效果分析

 目的 探讨In-Space经皮棘突间撑开系统治疗腰椎不稳症的初期临床效果。方法 回顾性分析2009年5月至2011年6月采用In-Space经皮棘突间撑开系统治疗腰椎不稳18例患者资料,男10例,女8例;年龄39～58岁,平均48.6岁;L_3,4 5例,L_4,5 13例。患者均伴有不同程度的腰椎过伸性腰背疼痛症状,并伴有一侧下肢的节段性放射性疼痛,屈曲位时缓解。采用视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)对手术前后疼痛进行评估;采用Oswestry功能障碍指数(Oswestry disability index,ODI)对手术前后腰椎功能进行评价。测量术前及术后手术节段棘突间距离、椎间隙前后缘高度、椎间孔高度和宽度、前凸角以及活动度,并进行比较。结果 18例患者均获得随访,随访时间18～36个月,平均(25±2.9)个月。术后6周及末次随访VAS评分为(3.1±1.3)分和(1.5±0.8)分,与术前(7.9±2.1)分比较,差异有统计学意义;术后6周及末次随访ODI为54.7%±14.8%和10.1%±2.5%,与术前82.1%±13.1%比较差异有统计学意义。术后棘突间距离为(9.29±1.43) mm,椎间隙后缘高度为(11.28±0.85) mm,椎间孔高度和宽度分别为(21.27±1.01) mm和(10.83±0.73) mm;节段前凸角及节段活动度分别为7.62°±0.74°和6.34°±0.81°。患者切口均一期愈合,无一例发生棘突骨折、脊髓损伤、脑脊液漏及装置移位、脱出等并发症。结论 In-Space棘突间撑开系统治疗腰椎不稳退行性疾病简便安全,初期随访疗效良好。