重组激素类药物质量分析专栏

<正>[编者按]重组激素类药物是最早用于临床治疗的生物技术药物，是目前全球销售额仅次于单抗的第二大类治疗性蛋白药物。在临床上对诸如糖尿病、生殖类疾病、骨质疏松症等重大慢性病、退行性疾病的治疗具有不可替代的作用，对于国家医保、公众大健康等民生工程具有重大意义。由于重组激素类药物设计基础主要来自于人和动物体内天然存在的蛋白和多肽活性分子，经过100多年的研究，人类对其分子类别、药理和药效的认知十分完善，基于新靶点、新分子实体的源头创新药物开发现阶段难度很大。国际上的研发热点主要集中在有重大临床价值的长效化，蛋白质工程改构，复方制剂产品，诸如甘精胰岛素、赖脯胰岛素、德谷胰岛素、利拉鲁肽、度拉鲁肽等“重磅炸弹”级的生物药。我国人口基数大、老龄化问题日渐凸显，临床上对于重组激素类药物的需求仍处于快速增长阶段。上市产品个数、生产企业数量，近几年有显著增加，某些当前仍依赖进口的临床亟需品种也陆续进入上市申报阶段。     

人胰岛素及其类似物国家标准增修订概况

本文介绍了《中国药典》2020年版（三部）人胰岛素及其类似物国家标准增修订概况。包括标准起草过程的基本原则和技术考量，并就关键项目在中国药典、欧洲药典和美国药典的协调性方面进行了分析，旨在为本领域内相关研发和质控人员更好地理解和使用人胰岛素及其类似物药典标准提供参考。     

脑蛋白水解物注射液相对密度的测定

目的对国内企业生产的脑蛋白水解物注射液进行相对密度测定,为研究该品种的质量标准提供依据。方法利用DE40密度计于室温20℃测定脑蛋白水解物注射液的相对密度。结果脑蛋白水解物注射液相对密度在1.0137~1.0211g/cm3之间。结论本方法简单,快速,重复性好,为完善脑蛋白水解物注射液的质量标准提供依据。     

甘精胰岛素注射液有关物质分析方法研究

目的:优化甘精胰岛素注射液有关物质分析方法,论证现行标准规定限度科学性,并对主要有关物质进行鉴别。方法:采用Thermo scientific Bio-Basic-C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),以氯化钠-磷酸盐缓冲液-乙腈(18.4 g∶250 mL∶250 mL,加水至1 000 mL)为流动相A,氯化钠-磷酸盐缓冲液-乙腈(3.2 g∶250 mL∶650 mL,加水至1 000 mL)为流动相B,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长214 nm,柱温35℃。利用该方法收集含量最大有关物质组分并利用LC-MS方法进行鉴别。分析色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C₁₈ Column(100 mm×2.1 mm, 1.7μm, 300?),以0.1%甲酸水溶液为流动相A,0.1%甲酸乙腈溶液为流动相B,进行梯度洗脱,柱温为50℃。质谱数据采集条件为MS~E模式,一级质谱能量40 V。结果:该RP-HPLC有关物质分析方法,方法学验证结果良好,能够有效分离并准确测定样品中的有关物...     

时间分辨荧光免疫分析法测定人胰岛素生物学活性

目的:利用时间分辨荧光免疫分析系统建立人胰岛素基于转基因细胞的生物学活性检测方法。方法:以CHO-INSRB1284转基因细胞2.5×10~5个·mL^-1作为靶细胞,以400 pmol·mL^-1作为初始浓度对人胰岛素进行3倍系列稀释,随后药物与靶细胞作用20 min,通过时间分辨荧光免疫分析系统,进行生物学活性检测,对该方法进行关键参数的优化,并依据2020年版《中华人民共和国药典》四部通则9401和ICH指导原则Q2(R1)、Q6B进行验证。结果:人胰岛素在本方法中存在良好的量效关系,符合四参数方程：y=(A-D)/[1+(x/C)B]+D。本方法专属性强,5个效价水平(64%、80%、100%、125%及156%)的相对生物学活性(n=8)的几何平均值分别为(55.8±2.06)%、(82.1±5.52)%、(94.4±5.46)%、(121.4±5.94)%、(154.4±8.37)%,相对偏倚及其90%置信区间分别为-12.8%(-16.3%,-9.9%)、2.6%(-4.4%,9.5%)、-5.6%(-11.2%,-0.3%)、-2...     

高效液相色谱法分析卡贝缩宫素及其有关杂质

目的:应用反相高效液相色谱法分析卡贝缩宫素及其有关杂质,并对有关杂质进行定位。方法:用 Lichrospher(?) 100 RP-C_(18)(125 mm×4 mm,5μm)色谱柱,流动相为磷酸盐缓冲液(pH 7.0)-乙腈(76:24);流速为1.2 mL·min~(-1);柱温为60℃,检测波长为220 nm。结果:卡贝缩宫素在0.25～8.0μg范围内呈良好的线性关系,r=1.000,最低检测限为2 ng,平均回收率为99.3%,各有关杂质的相对保留时间范围为相对保留时间±0.02。结论:本法简便、准确,适用于卡贝缩宫素的定量及其有关杂质的鉴别。     

首批甘精胰岛素国家对照品的研制

目的：建立甘精胰岛素国家对照品。方法：用质谱测定分子量、HPLC法肽图鉴别及测定纯度。结果：以氮含量、纯度扣除法以及外标法结果综合考虑，最终确定首批甘精胰岛素国家对照品的含量为93．7％。即每1mg含甘精胰岛素0．937mg。结论：建立的甘精胰岛素国家对照品可用于国内同类药物的研究和检定以及该进口药品的质控。     

重组人甲状旁腺激素效价测定方法的研究

采用酶标法、放免法、化学发光法对 rh PTH效价进行测定,并进行了比较性研究。结果表明,三种方法间无显著性差异。酶标法简单快捷、安全,更适合作为常规重组人甲状旁腺激素生物学活性的测定。     

利用高分辨质谱技术综合解析胰岛素类制品复杂二硫键结构

二硫键的正确配对维持了多肽和蛋白类药物的正确折叠方式和高级结构的形成,对产品的质量控制至关重要。为了确保二硫键正确配对,二硫键分析是多肽和蛋白质药物表征中必不可少的重要部分。质谱分析技术可用于二硫键分析,然而,胰岛素及其类似物中存在两对没有酶切位点的二硫键,常规的碰撞诱导解离(CID)和高能诱导裂解(HCD)无法实现该复杂二硫键的准确定位。本研究通过3种方法综合定位该复杂二硫键,包括酶切加关键肽段源内碎裂(ISD)法、酶切加部分还原烷基化法、完整蛋白源内碎裂和电子转移解离(ETD)裂解法,并且考察了门冬胰岛素、赖脯胰岛素和甘精胰岛素的适用性,为胰岛素及其类似物二硫键连接方式的质量控制提供了新途径,也为含该类复杂二硫键多肽或蛋白类生物制品的二硫键定位提供借鉴。     

RP-HPLC法测定注射用尖吻蝮蛇血凝酶的含量

目的:建立测定注射用尖吻蝮蛇血凝酶的高效液相色谱分析方法。方法:采用Vydac 208TP54-C8(5μm,4.6 mm×250 mm)色谱柱,流动相A为0.1%三氟乙酸,B为乙腈-水(90∶10,含0.1%三氟乙酸),梯度洗脱,流速为0.8 mL·min-1,柱温45℃,检测波长为280 nm。结果:尖吻蝮蛇血凝酶浓度在2.5～30μg·mL-1(r=0.9991)范围内线性关系良好,平均回收率(n=9)为99.5%。结论:该方法可以为注射用尖吻蝮蛇血凝酶的质量控制提供依据。