大鼠神经元型一氧化氮合酶基因慢病毒载体的构建及功能测定

目的：构建编码大鼠神经元型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase,nNOS）全长基因的慢病毒载体,并检测其表达效率和催化活性功能。方法：采用RT?PCR提取nNOS的cDNA,同时改造真核表达载体pCDH?GFP。鉴定nNOS的cDNA碱基序列正确后,将目的基因克隆入慢病毒载体pCDH?GFP,得重组载体pCDH?GFP/nNOS,采用Lipofectamine 2000将其及慢病毒包装辅助质粒转染293T细胞,超速离心纯化后,感染神经干细胞和海马齿状回神经元进行感染能力鉴定,并检测nNOS蛋白表达和催化功能。结果：成功构建编码nNOS全长cDNA,测序证明重组慢病毒载体pCDH?GFP/nNOS构建成功。包装慢病毒颗粒LV?nNOS?GFP可以感染离体神经干细胞和在体神经元。Western blot检测证明nNOS蛋白成功表达。一氧化氮浓度检测表明表达的nNOS具有催化活性。结论：慢病毒载体LV?nNOS?GFP构建成功,可以表达功能性全长nNOS蛋白。     

江苏省城乡居民不同糖代谢状态人群视网膜病变患病率及相关因素分析

目的比较江苏省城乡居民不同糖代谢状态人群视网膜病变患病率并分析其相关影响因素。方法本研究为横断面研究。于2017年4至7月采用分层多阶段随机抽样对江苏省盐城盐都区、镇江句容市抽取4 074名18~70岁居民进行问卷调查、体格检查、血糖检测和眼底筛查。以糖尿病视网膜病变(DR)早期治疗研究分级≥20定义为糖尿病特征性视网膜病变。根据血糖检测结果将研究对象分为血糖正常组(NGR组)、糖尿病前期组(IGR组)及初诊2型糖尿病组(T2DM组)。收集上述研究对象的人口学特征、疾病史等一般资料,测量收缩压(SBP)和舒张压(DBP),计算体质指数(BMI)、腰臀比和腰围身高比,检测空腹血糖(FPG)、口服葡萄糖耐量试验餐后2 h血糖(2hPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)等指标。采用χ²检验比较相同糖代谢状态不同特征人群视网膜病变患病率,采用1∶4匹配的条件logistic回归分析法对DR的影响因素进行单因素和多因素分析。结果最终纳入3 666例受试者,其中NGR组1 915例,IGR组1 186例,新诊断T2DM组565例。新诊断T2DM组中DR患病率最高,为10.27%(58/565),其次是IGR患者,为4.38%(52/1 186),NGR人群中糖尿病特征性视网膜病变患病率为2.77%(53/1 915)。三组视网膜病变患病率在不同性别、年龄、职业、教育程度、有无糖尿病家族史、吸烟史、饮酒史之间的差异无统计学意义(均P>0.05)。NGR组中,肥胖者糖尿病特征性视网膜病变患病率显著高于体重正常及过低者[分别为5.05%(14/277)和2.57%(22/856)、2.17%(17/782),P=0.044]。新诊断T2DM组中,高血压者DR患病率显著高于非高血压者[分别为12.57%(42/334)和6.93%(16/231),P=0.032]。1∶4匹配的病例对照单因素分析结果显示,有糖尿病家族史、高SBP、高DBP、高BMI、高FPG、高2hPG、高HbA1c、高ALT可能与DR的发生有关(均P<0.05)。多因素logistic分析结果显示,收缩压≥180 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),腰围身高比≥0.5,高BMI和高FPG是DR的危险因素(优势比分别为6.130、2.738、1.128、1.449,均P<0.05)。结论江苏省城乡居民不同糖代谢状态人群视网膜病变患病率较高,NGR和IGR人群中已有糖尿病特征性视网膜病变发生。高血压、高血糖及肥胖均会增加各类糖代谢状态人群发生DR的风险。