微量酶联夹心杂交法定量检测hIL-8 mRNA PCR扩增产物

目的:建立一种灵敏度高、特异性强、定量、精确、操作简便的微孔板酶联夹心杂交技术,定量检测人IL-8 mR-NA。方法:针对人IL-8 mRNA逆转录聚合酶链反应产物一条链的不同区域序列设计一对特异探针,其中一条为捕获探针,5′端用活性氨基修饰,与微量DNA结合板表面的NOS基团共价结合,“竖直”地包被在微孔板内;另一条检测探针的3′端标记生物素,和辣根过氧化物酶结合。提取人外周血单个核细胞总RNA,进行RT-PCR扩增IL-8 mRNA,双链DNA产物经热变性后加入已包被捕获探针的微孔板内进行杂交,加入检测探针与已杂交的产物结合,经亲和素-辣根过氧化物酶系统检测杂交信号。结果:该法灵敏度为检出16个循环的PCR产物、5×103个PBMCs中的IL-8 mRNA、检测PCR终产物的最高稀释倍数为1∶256阳性;特异性试验非目的扩增片段酶联杂交检测未检出阳性杂交信号;精密度试验CV为5.2%。结论:该方法具有操作简便、灵敏度高、特异性强等优点,适合IL-8 mRNA PCR扩增产物的定量检测。     

肾衰患者血浆同型半胱氨酸与心衰指数关系的探讨

该文探讨肾衰患者血浆同型半胱氨酸(Hcy)与心衰指数(HFI)间关系。笔者用荧光偏振免疫法测定Hcy。结果表明肾衰者无心衰组、可疑心衰组、心衰组Hcy 3组间差异有统计学意义,Hcy与HFI呈显著正相关,认为是导致早期心力衰竭的一个重要因素。     

抗肝抗原自身抗体检测在自身免疫性肝病中的应用

目的了解自身免疫性肝病患者抗肝抗原自身抗体的检测意义。方法分别应用间接免疫荧光法和酶免疫条带技术检测46例自身免疫性肝病患者、63例慢性乙型肝炎(HBV)患者、28例丙型肝炎(HCV)患者和36例健康体检者的抗肝抗原自身抗体。结果血清抗肝抗原自身抗体在各组肝病标本中的总检出阳性率分别为自身免疫性肝炎(AIH)89.5%、原发性胆汁性肝硬化(PBC)95.5%、原发性硬化性胆管炎(PSC)60.0%、HBV 7.9%、HCV 17.8%,正常对照组阳性率为2.8%,自身免疫性肝病组与各组间差异有显著性意义(P<0.01)。结论抗肝抗原自身抗体检测对自身免疫性肝病的诊断和分型都具有重要意义。     

探讨亚甲基四氢叶酸还原酶C677T和A1298C基因多态性与乳腺癌的易感性研究

目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T和A1298C位点多态性与乳腺癌易感性的关系。方法选取96例乳腺癌患者为疾病组,107例健康体检女性为对照组,用聚合酶链反应技术检测MTHFR基因C677T和A1298C位点的多态性,基因型分别为野生型(677CC)、杂合型(677CT)、纯合型(677TT)和野生型(1298AA)、杂合型(1298AC)、纯合型(1298CC)。结果乳腺癌组677位点3种基因型频率分别为39.58%、50.00%和10.42%,与对照组相比,差异无统计学意义(P0.05);乳腺癌组1 298位点3种基因型频率分别为66.66%、22.92%和10.42%,其中野生型(1298AA)和杂合型(1298AC)与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05),而纯合型(C1298C)与对照组相比较差异有统计学意义(P0.05)(OR=4.03,95%CI:1.08~15.11)。结论 MTHFR基因1 298位点A-C变异可能是台州地区乳腺癌的易感因素之一,但仅在CC纯合型时有统计学意义,677位点多态性与乳腺癌的发生无明显相关性。     

血清脂联素水平与冠状动脉慢血流现象的相关性研究

目的：观察冠状动脉慢血流现象（CSFP）患者血清脂联素（APN）水平的变化,探讨两者的相关性。方法采用TIMI计帧法（TFC）作为测定CSFP的指标,将入选病例分为CSFP组（观察组）及无CSFP现象（对照组）两组。观察组106例,对照组100例,均排除既往冠心病及其他类型心脏病。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定血清APN的含量。分析血清APN与冠状动脉血流TFC之间的相关性。结果观察组的血清APN水平[（8.2±2.74）mg/L]明显低于对照组[（11.3±3.0）mg/L],差异有显著统计学意义（P＜0.01）。血清APN与CSFP呈负相关（r=-0.56,P＜0.01）,高血压、吸烟占比观察组明显高于对照组（均P＜0.05）。结论血清APN水平与CSFP之间存在相关性,同时发现高血压及吸烟也与CSFP有关。     

利用聚合酶链反应检测前列腺液中结核杆菌

利用聚合酶链反应检测前列腺液中结核杆菌李招云，周明山，赵硕关键词聚合酶链反应（ＰＣＲ），前列腺炎，结核杆菌中图法分类号Ｒ６９７．３３慢性前列腺炎是男科常见疾病，而结核杆菌（ＴＢＢ）是常见病原之一。标本中直接检出结核杆菌是确诊结核性前列腺炎的最有力的证...     

实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测结肠癌患者血CK19 mRNA水平及其意义

目的:了解结肠癌患者外周血CK19mRNA的水平,探讨其临床意义。方法:采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应,检测结肠癌患者75例、炎症性肠病(IBD)患者30例、健康志愿者41例外周血CK19mRNA的水平。结果:75例结肠癌患者外周血CK19mRNA的水平为(12600±73100)copies/mL,其中39例阳性,阳性率为52%。健康志愿者未检测到CK19mRNA。CK19mRNA水平与肿瘤病理分期和分化程度相关;CK19mRNA阳性组中CK19蛋白阳性者显著多于CK19mRNA阴性组(P<0.05)。结论:外周血CK19mRNA可作为结肠癌辅助诊断指标,定量检测外周血CK19mRNA有助于结肠癌微转移的监测。     

多肿瘤蛋白芯片技术在健康体检人群中的应用评价

肿瘤蛋白芯片是基于多指标检测的思路,发挥蛋白芯片的优势建立的一种肿瘤实验室检测技术,通过同时定量分析被检者血清中12种肿瘤标志物的含量,对常见的肿瘤进行联合分析[1].该方法具有高灵敏度、高特异性、快速和微量的优点.通过对我院2005年1～10月所测1497名健康体检患者进行多肿瘤蛋白芯片检测,现将检验结果报道如下.     

两种方法用于HPV基因检测的比较

目的探讨PCR结合反向杂交分析技术与第二代杂交捕获技术（HC2）用于检测人乳头状瘤病毒（HPV）的一致性。方法同时使用两种方法对364例标本进行平行检测;使用PCR结合反向杂交分析技术对2561例标本进行检测、HC2技术对1327例标本进行检测。结果平行试验,PCR结合反向杂交分析技术高危型阳性率为31.6%,HC2技术阳性率29.4%,两者结果无显著性差异（P〉0.05）,总符合率为89.6%。分开试验,PCR结合反向杂交分析技术高危型阳性率为32.6%（835/2561）,HC2技术阳性率为30.7%（407/1327）,两者结果无显著性差异（P〉0.05）。结论 PCR结合反向杂交分析技术与HC2技术检测HPV结果之间具备良好的符合性,两者都适合用于临床检测与筛查。     

联合应用PCR-SSCP和PCR产物测序检测神经鞘瘤患者NF2基因Exon7突变及其意义

目的 研究散发神经鞘瘤患者中Ⅱ型多发神经纤维瘤病基因（neurofibromatosis2,NF2）外显子7（Exon7）的突变及意义.方法 采用聚合酶链反应单链构象多态性技术和DNA测序技术检测25例神经鞘瘤中NF2基因Exon7突变.结果 25例神经鞘瘤患者中共发现3例NF2基因Exon7突变,均发生于脊神经鞘瘤,其中剪切受体位点突变1例、移码突变2例.结论 NF2基因Exon7突变可能是脊神经鞘瘤发生的关键因素.