一种不依赖呼吸机的小鼠心肌内注射技术的建立

目的建立一种简洁高效、不依赖辅助通气的小鼠心肌内注射的实验方法,并浅析操作细节及技巧。方法 44只6周龄的雄性C57BL/6J小鼠,随机分为实验组(22只)和对照组(22只)。麻醉后于左侧第4肋间隙挤出心脏,向左心室壁内注射靶向CPT-1b(实验组)或靶向无关基因(对照组)的重组慢病毒。10周后,取心脏及后肢骨骼肌,行RT-PCR及Western blot法,检测不同组织中CPT-1b的mRNA及蛋白表达水平。结果至16周龄,小鼠存活率90.9%。实验组小鼠心肌中CPT-1b的表达显著低于对照组,而骨骼肌中CPT-1b的表达在两组间没有统计学差异。结论心肌内注射技术所介导的RNA干扰高效、特异地下调了心肌组织中目标基因的表达,该技术是一种较好的将外源物质定向导入心肌组织的方法。     

下调心肌CD36的表达对肥胖小鼠心肌活性氧簇生成的影响

目的 研究定向下调心肌CD36的表达对高脂饮食诱导的肥胖小鼠心肌组织中活性氧簇（ROS）含量的影响。方法 4周龄的雄性C57小鼠,随机分为正常对照组（N-mock）、肥胖对照组（O-mock）及肥胖干预组（O-CD36）,采用高脂饮食诱导肥胖。6周龄时,向心肌内分别注射靶向CD36（O-CD36）或靶向无关基因（N-mock、O-mock）的重组慢病毒。10周后,取小鼠心室组织检测CD36的mRNA及蛋白表达水平;行油红O染色检测心肌组织内中性脂质含量;并使用冷冻切片染色法及流式细胞术检测心肌细胞内ROS含量。结果 慢病毒介导的RNA干扰显著下调了O-CD36小鼠心肌组织中CD36的表达。肥胖引起心肌组织内中性脂质蓄积,下调心肌CD36的表达显著减少了中性脂质的含量。高脂饮食还导致心肌ROS的含量显著增加,而下调CD36的表达可以改善甚至逆转这一进程。结论 CD36在高脂肪酸代谢所引起的ROS生成增加中起重要作用,定向下调心肌CD36的表达可以减少心肌组织ROS的含量,改善心肌氧化应激。     

下调心肌CPT1b的表达对肥胖小鼠心肌细胞钙调控的影响

目的 研究干扰心肌组织中肉毒碱脂酰转移酶-1b（CPT1b）的表达对高脂饮食诱导的肥胖小鼠心肌细胞钙调控的影响。方法 4周龄的雄性C57小鼠,随机分为正常对照组（N-mock）、肥胖对照组（O-mock）及肥胖干预组（O-CPT1b）,采用高脂饮食诱导肥胖。6周龄时,经心肌分别注射靶向CPT1b（O-CPT1b）或靶向无关基因（N-mock、O-mock）的重组慢病毒,以下调目标基因的表达。10周后,取小鼠左心室组织检测RNA干扰的效率;采用Western blot法检测左心室组织中肌浆网钙泵（SERCA2a）的蛋白表达;并分离单个心室肌细胞,使用活细胞工作站检测心肌细胞钙瞬变。结果 肥胖小鼠心肌组织中CPT1b的表达增加,慢病毒介导的RNA干扰显著下调其表达。肥胖引起心肌细胞SERCA2a的蛋白表达降低及肌质网钙处理能力的下降,下调CPT1b的表达增加了SERCA2a的含量,并改善了钙调控异常。结论 下调心肌组织中CPT1b的表达可改善肥胖所导致的心肌细胞钙调控异常。     

翻转课堂联合案例教学法在心律失常教学中应用的探讨

近年来,心脏电生理技术的发展极大的丰富了心电生理知识,心电图作为基本检查可用于对各种心律失常疾病的检查.心律失常的学习对于一名临床医生十分重要,其教学在医学生教学中也是重中之重.心律失常分类繁多,其教学有其自身特点,难度较大,理论课教学过程中,教师上课难以讲透,学生学习难以理解,在将理论联系实践的过程中,更是难上加难.在心律失常教学过程中,应不断结合教学经验,提高心律失常教学质量.本文旨在探讨在心律失常教学期间,以教学大纲为中心、以心律失常临床案例为工具,推行翻转课堂和案例教学法相结合教学模式,提高学生在学习心律失常过程中的主观能动性,并将心律失常理论联系实际病例,增加学习的趣味性,以期有效提高教师的授课水平,提高课堂教学质量和效果,培养更为优秀的临床医学人才.     

干扰CD36的表达对高脂饮食诱导的肥胖小鼠心肌细胞钙调控的影响

目的 研究干扰心肌组织中脂肪酸转位酶CD36的表达对高脂饮食诱导的肥胖小鼠心肌细胞钙调控的影响。方法 4周龄的雄性C57小鼠,随机分为正常对照组（N-mock）、肥胖对照组（O-mock）及肥胖干预组（O-CD36）,采用高脂饮食诱导肥胖。6周龄时,经心肌注射靶向CD36（O-CD36）或靶向无关基因（N-mock、O-mock）的重组慢病毒,以下调心肌组织中目标基因的表达。16周龄时,取小鼠左心室组织,检测CD36和肌质网钙泵（SERCA2a）的mRNA和蛋白表达;并分离单个心室肌细胞,使用活细胞工作站检测心肌细胞钙瞬变。结果 肥胖小鼠心肌组织中CD36的表达较正常小鼠无显著改变,慢病毒介导的RNA干扰显著下调了CD36的表达。肥胖引起心肌细胞SERCA2a的蛋白表达降低及肌质网钙处理能力的下降;下调CD36的表达增加了SERCA2a的含量,并改善了钙调控异常。结论 下调心肌组织中CD36的表达可改善肥胖所引起的心肌细胞钙调控异常。     

颈动脉窦压力感受器电刺激对犬慢性心力衰竭的影响

目的 研究颈动脉窦压力感受器电刺激（carotid baroreceptor stimulation,CBS）对右心室快速起搏诱导的犬慢性心力衰竭（以下简称心衰）的影响。方法 1岁龄的雄性比格犬30只,随机分为对照组（Con）、慢性心衰组（CHF）及慢性心衰伴CBS组（CHF-CBS）。每只犬均同时置入心脏起搏器和CBS刺激仪,采用右心室快速起搏法制作慢性心衰模型,通过刺激仪进行CBS干预。按不同分组方案分别给予起搏和（或）电刺激,持续6周后,行心脏超声检测心功能,经颈静脉采血检测BNP含量,取左心室前壁组织横切行HE染色观察心肌细胞组织学。结果 CHF犬有4只出现明显腹腔积液,有2只取材前已死亡,Con犬、CHF-CBS犬均未出现腹腔积液和取材前死亡。相比于Con犬,CHF犬取材前的呼吸频率、心率均明显升高（P<0.05）;左心室射血分数、左心室短轴缩短率及舒张早期二尖瓣血流速度峰值E与舒张晚期二尖瓣血流速度峰值A比值明显降低（P<0.05）;血BNP水平明显升高（P<0.05）;左心室前壁心肌细胞排列紊乱,细胞平均横截面积显著增大（P<0.05）。CHF-CBS犬上述指标较CHF犬均明显改善（P<0.05）。结论 CBS可通过抑制交感神经活性而改善犬慢性心衰时的心功能。