斑马鱼皮肤损伤模型的建立及分子机制

目的以皮肤荧光转基因斑马鱼(ktr4:NTR-h Kik GR)为实验动物,研究长春新碱对皮肤细胞的损伤作用及其分子机制,建立皮肤损伤模型。方法取受精后24 h皮肤荧光斑马鱼胚胎,将脱膜后的胚胎分别置于0.01~0.04 mmol·L^-1不同浓度的长春新碱中,24 h后采用荧光显像的方法对斑马鱼皮肤荧光斑点进行计数和统计处理;同时对鱼体细胞死亡情况进行TUNEL试剂盒检测,确定其皮肤细胞死亡的水平;利用蛋白免疫印迹的方法对各组斑马鱼胚胎的caspase-3、KRT4及p53表达水平进行检测。结果在长春新碱与斑马鱼胚胎共同孵育24 h后,0.02、0.04 mmol·L^-1长春新碱明显引起斑马鱼荧光皮肤细胞减少(P<0.01);TUNEL检测表明,长春新碱与对照组比较能明显引起斑马鱼皮肤细胞凋亡;Western bolt分析显示,0.02、0.04 mmol·L^-1长春新碱能诱导斑马鱼胚胎caspase-3和p53表达增加(P<0.01),同时高浓度的长春新碱可使皮肤角蛋白KRT4表达明显减少(P<0.01)。结论利用长春新碱引起斑马鱼皮肤损伤,该局部毒性作用可作为皮肤损伤的造模新方法。     

基于网络药理学研究脑血疏口服液治疗脑出血的作用机制

目的基于网络药理学研究脑血疏口服液治疗脑出血的作用机制。方法利用TCMSP数据库,筛选出脑血疏口服液的活性成分。通过DisGeNET、Genecards数据库,筛选出脑出血疾病相关的靶点,两者取交集得到相同的靶点。将交集基因用David软件进行GO注释分析和KEGG通路分析。采用Cytoscape3.7.1软件,建立单味药-成分-靶点网络模型、交集基因蛋白质相互作用网络模型、活性成分-靶点-通路网络模型;利用Ledock分子对接软件,验证预测结果。结果脑血疏口服液治疗脑出血的活性成分共56种,其中黄芪紫檀烷苷、槲皮素、汉黄芩素、川芎嗪、桉脂素等可能是重要物质基础。脑血疏口服液治疗脑出血的机制涉及靶标40个、相关信号通路20条,可能与PI3K-Akt、肿瘤坏死因子、细胞凋亡等信号通路有关,而且ESR1、AKT1、PIK3CA、AKT3、EGFR、PTGS2、MMP2、MMP3等靶点可能在治疗脑出血过程中起着关键性的作用。结论本研究基于整体观角度,通过网络药理学构建了脑血疏口服液治疗脑血出血的成分-靶点-信号通路的相互关联网络,系统揭示了该制剂治疗脑出血的主要药效物质以及作用机制,可为临床科学使用提供依据。     

HPLC法测定蜂胶中阿替匹林的含量

建立蜂胶中抗肿瘤成分阿替匹林的含量测定方法.采用XDB-C18色谱柱;以甲醇-5 %乙酸为流动相梯度洗脱;流速1.0mL·in-1;检测波长280nm.阿替匹林在0.66～6.60μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9997),平均回收率为99.71%,RSD为2.15%(n=6).本方法结果准确高,重复性好,可作为蜂胶的质量评价依据.     

醋酸直肠刺激对大鼠肠道P物质、5-HT免疫阳性神经纤维的影响

目的:观察醋酸肠道刺激对大鼠肠道高敏感性的影响及其可能影响因子。方法:采用醋酸慢性刺激建立肠道高敏感性大鼠模型,观察大鼠肠道敏感性以及结肠黏膜下P物质、5-羟色胺免疫反应阳性纤维的变化.结果:醋酸注射直肠能够引起实验动物的腹壁撤离反射的阈值降低;肠道内的P物质含量低于对照组(P<0.01),肠道粘膜下的5-羟色胺免疫阳性神经元/神经纤维阳性指数(IOD)显著增加(P<0.01);结论:醋酸直肠慢性刺激可导致肠道高敏感性,其机制可能与引起5-HT免疫阳性神经纤维增加、P物质分泌紊乱有关。     

有机助溶剂对血管生成斑马鱼模型的适用性研究

目的 研究二甲基亚砜、丙酮、甲醇、异丙醇四种有机溶剂在斑马鱼模型抗血管生成药物筛选中作为助溶剂的适用性.方法 以每种有机溶剂系列浓度处理发育12h或24h斑马鱼胚胎,到发育72 h观察胚胎血管生成、畸形、死亡状况,计数体节问血管,并计算畸形率和死亡率.结果 有机溶剂中存活的斑马鱼胚胎体节间血管形态和数量正常,与对照一致.0.1%浓度二甲基亚砜、丙酮和1%浓度甲醇中斑马鱼胚胎无畸形和死亡状况,但随着浓度上升畸形率和死亡率均显著高于对照.0.1%浓度异丙醇中斑马鱼胚胎的畸形率和死亡率已显著高于对照.结论 作为助溶剂,二甲基亚砜、丙酮适宜浓度为≤0.1%,甲醇适宜浓度为≤1%,异丙醇不适合用于斑马鱼模型抗血管生成药物筛选.     

分光光度法测定鱿鱼生殖腺提取物中总磷脂

目的建立鱿鱼生殖腺提取物中总磷脂的测定方法。方法采用乙醇提取、正己烷萃取法得到鱿鱼生殖腺提取物,浓硫酸-高氯酸法消化样品,抗坏血酸-钼蓝法测定无机磷的量,再乘以系数26.31折算成鱿鱼生殖腺提取物中总磷脂的量。结果磷在0.2～1.0μg/mL线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为95.06%,RSD为1.09%。结论该方法方便、快速、准确度较高,可用于鱿鱼生殖腺提取物中总磷脂的测定。     

水溶性氮酮对斑马鱼胚胎药物渗透及致畸性作用的影响

目的 研究水溶性氮酮对白藜芦醇透过斑马鱼胚胎性能与斑马鱼致畸性的影响.方法 利用对斑马鱼胚胎发育致畸作用,考察氮酮在斑马鱼筛选模型上的适用性,确定氮酮的使用剂量;利用氮酮的透皮促进作用,观察对白藜芦醇抑制斑马鱼节间血流的影响.结果 在0.01～0.5μg/ml范围内氮酮对斑马鱼较安全,0.5μg/ml溶性氮酮可显著促进斑马鱼对白藜芦醇的透过,斑马鱼节间血管的抑制率达到了22.9%.结论 浓度高于0.5 μg/ml的水溶性氮酮对斑马鱼胚胎的发育有明显致畸作用;0.5μg/ml的氮酮对白藜芦醇的斑马鱼胚胎透过效果最佳.     

斑马鱼模型在中药活性筛选中的适用性研究

目的考察斑马鱼血管生成抑制模型在中药各类样品活性筛选中的适用性。方法选用TG(VEGFR2:GFP)系血管荧光转基因斑马鱼和AB系斑马鱼作为筛选模型,分别用中药单体靛玉红、单味药材(虎杖、长春花)提取物、复方(西黄丸)处理斑马鱼胚胎,以节间血管数作为指标,考察不同类型中药样品对斑马鱼胚胎血管生成的影响。结果靛玉红高剂量(50μg/mL)明显抑制斑马鱼节间血管的生成(P<0.05);虎杖醋酸乙酯提取部位随着质量浓度的升高抑制作用增强,10μg/mL时与对照组比较差异显著(P<0.05);长春花醋酸乙酯提取部位100μg/mL时明显抑制斑马鱼血管生成(P<0.01),同时未见胚胎死亡;西黄丸质量浓度大于50μg/mL时,抑制斑马鱼血管生成作用与对照组比较差异显著(P<0.05),100μg/mL时呈非常显著的统计学差异(P<0.01)。结论斑马鱼模型对于成分复杂的中药样品具有很好的适应性,这对于从我国丰富的中药资源中发现结构新颖、活性独特的先导化合物具有重要价值。     

20种根类中药的电泳鉴别

<正> 根类中药数目繁多,不少品种有多种植物来源。因亲缘关系相近,性状类似,混淆现象极易发生。为了正本清源,提高中药鉴定工作的准确性,使中药鉴定进一步向科学化、标准     

利用斑马鱼模型研究靛玉红及其衍生物抑制血管生成作用的构效关系

目的 利用斑马鱼模型考察中药单体靛玉红(Ind)及其衍生物的抑制血管生成活性及其量效关系,并为斑马鱼模型在新药构效关系研究中的应用提供实验依据。方法 选用TG(VEGFR2：GFP)系血管荧光转基因斑马鱼作为筛选模型,分别用Ind及其衍生物靛玉红-3’-单肟(IMO)、6-溴-靛玉红-3’-单肟(BIO)处理斑马鱼胚胎,以节间血管数作为指标,考察药物对斑马鱼胚胎抑制血管生成的影响。结果 在相同的剂量下,Ind、IMO与BIO抑制斑马鱼节间血管(ISV)生成的作用依次增强,三者都显示明显的量效关系。Ind、IMO 与BIO的半数有效剂量(EC₅₀),分别为89.10,5.188和2.686 μmol·L^-1。结论 在靛玉红母体结构改造中,随着C-3’位肟化以及C-6位溴原子的引入,溶解性明显改善,其抑制血管生成活性也逐渐增强。