核酶在细胞外切割HCV核心区RNA的研究

目的 研究核酶在细胞外切割HCV的作用。方法 设计核酶cDNA序列，构建核酶重组质粒及HCV核心区基因cDNA重组质粒。分别进行体外转录，并加入γ-^32P ATP以标记HCV RNA。将核酶RNA、HCV核心区RNA、RNA酶抑制剂及反应缓冲液混事浊国育，以核酶RNA切割HCV RNA。通过变性聚 烯酰胺凝胶电泳及放射自显影来分析结果。结果 β－半乳糖苷酶表型筛选均可见蓝色及白色菌落生长；核酶重组质粒直接测序结果见预期要苷酸序列；HCV重组质粒限制笥酶切分析见410bp条带。核酶切割反应显示：反应时间为15和30min时可见453、307、146nt3条带。反应时间为60min时仅见307及146nt2条带。结论 核酶重组质粒构建成功，所设计核酶对HCV有切割作用。     

江苏徐州地区核苷类似物疗效不佳的慢性乙型肝炎621例血清乙型肝炎病毒耐药突变分析

目的 探讨江苏徐州地区经核苷类似物治疗疗效不佳的慢性乙型肝炎患者HBV耐药基因突变分布特征.方法 收集2010年8月～2013年5月在我院就诊的门诊及住院慢性乙型肝炎患者血清标本621份,均为经核苷类似物治疗3个月以上且血清HBV DNA阳性者,采用核酸扩增技术结合荧光标记探针杂交方法对乙型肝炎病毒DNA进行定量检测,其产物通过测序分析进行耐药突变的检测,率的比较采用x2检验.结果 621例患者HBV耐药总变异检出率为75.8％（471/621）,其中拉米夫定、阿德福韦酯、替比夫定和恩替卡韦分别为88.9％ （144/162）、53.7％（108/201）、89.0％（47/53）和88.0％ （22/25）,服用过2种或者2种以上抗病毒药物者为83.3％（150/180）,以上5组间变异率总检出率比较差异有统计学意义（P＜0.05）,其中阿德福韦酯组与其他各组分别比较差异均有统计学意义（P＜0.05）,其他各组两两比较差异均无统计学意义（P＜0.05）.耐药变异病例数构成比服用过2种或者2种以上抗病毒药物者（31.8％）最高,拉米夫定、阿德福韦酯、替比夫定和恩替卡韦分别为30.6％、22.9％、10.0％和4.7％,以上5组构成比比较总差异有统计学意义（P＜0.05）.除拉米夫定组与服用过2种或者2种以上抗病毒药物组之间差异无统计学意义（P＞0.05）,其他各组两两比较差异均有统计学意义（P＜0.05）.比较各位点变异率,所检测的25个位点的总差异有统计学意义（P＜0.05）,204位点耐药突变率最高（243例次,39.1％）,其次是180位点（184例次,29.6％）、181位点（123例次,19.8％）,这3个位点两两比较或者分别与其他各位点比较差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 204位点、180位点、181位点耐药突变检出率高,恩替卡韦及替比夫定经治患者较少进行HBV耐药突变检测.     

核酶抗人类病毒作用的研究现状及展望

核酶(riboxyme)是一类具有生物催化活性的小分子RNA。设计适合的核酶可以达到特异性裂解靶RNA之目的,从而阻止特定基因的表达。作为基因治疗的一种方法,核酶已显示出其独有的潜力。本文就核酶作用原理,影响因素,特别是近年来在抗病毒作用方面的研究进行综述,并展望在这一领域中的前景。     

骨形态发生蛋白7对肺纤维化大鼠胶原和转化生长因子β1表达的影响

目的 探讨骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)对肺纤维化大鼠肺组织炎症、纤维化程度及转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达的影响.方法 将雄性Wister大鼠48只随机分为正常对照组、纤维化组、小剂量组和大剂量组,每组12只.气管内灌注博莱霉素A5制作肺纤维化模型.对小剂量组和大剂量组动物,每天分别以100 μg/kg、500 μg/kg剂量腹腔注射BMP-7.各组在制作模型后第14、28天随机处死6只大鼠.HE、Masson染色观察肺组织病理变化,测定组织胶原含量,免疫组织化学测定肺组织中Ⅰ型胶原蛋白及TGF-β1的表达,半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定肺组织TGF-β1 mRNA的表达.结果 BMP-7处理后第14、28天肺组织炎症及纤维化程度均低于纤维化组,差异有统计学意义(P＜0.05).BMP-7使14 d、28 d时肺组织胶原含量较同期纤维化组胶原含量减少(P＜0.05).经过BMP-7处理,14 d、28 d时肺组织Ⅰ型胶原和TGF-β1蛋白的表达均较纤维化组减弱(P＜0.05).BMP-7使肺组织TGF-β1 mRNA的表达水平较同期纤维化组降低(P＜0.05).而且BMP-7的上述作用在大剂量时更明显(P＜0.05).结论 在博莱霉素A5诱导的大鼠肺纤维化模型中,BMP-7可以剂量依赖的方式抑制肺组织炎症及纤维化程度,其可能机制可能与BMP-7抑制TGF-β1在肺组织的表达有关.     

骨形态发生蛋白7在慢性HBV感染者肝组织中的表达

[目的]通过对不同慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者肝组织中骨形态发生蛋白7（BMP-7）表达的分析,初步探讨BMP-7在肝脏炎症和肝细胞再生过程中可能发挥的作用。[方法]对56例慢性HBV感染者及5例正常对照肝组织进行常规组织学观察,按病理诊断分组。其中病毒性肝炎乙型慢性轻度12例,中度12例,重度6例,重型8例,乙肝肝硬化10例,肝癌8例。进行BMP-7的免疫组织化学染色,观察光镜下分布特点,取部分标本进行图像分析。取8例肝癌患者癌结节及3例癌旁组织进行实时荧光定量RT-PCR,检测BMP-7mRNA的表达。[结果]BMP-7阳性单位在正常人肝脏（7.27±2.88）、病毒性肝炎（乙型）慢性轻度（8.50±3.22）、中度（10.96±2.88）、重度（13.11±1.26）有逐渐增加趋势,重型肝炎（7.50±1.21）、肝硬化（8.24±1.79）较中度、重度低;进一步比较BMP-7阳性区灰度有相似结果（P值均小于0.01）。BMP-7在肝脏既有胞浆型表达,也有胞膜型表达。在慢性中度、重度患者及肝硬化结节内为弥漫性表达;但在重型肝炎患者,仅呈灶状表达;在癌周组织有弥漫或灶状表达,在癌结节表达极少。[结论]在慢性乙型肝炎患者肝组织中BMP-7表达增多,但是在重型肝炎肝组织及肝癌结节中表达减少,值得进一步研究。     

血清PIVKA-Ⅱ测定在41例HCC诊断中的应用及其特异性分析

目的 分析人异常凝血酶原即维生素K缺乏或拮抗剂Ⅱ诱导蛋白（protein induced by vitamin K absence or antagonist-Ⅱ,PIVKA-Ⅱ）在慢性乙型肝炎、肝细胞癌及梗阻性黄疸患者血清中的表达特点,评价其在肝细胞癌的诊断价值。方法 检测徐州医科大学附属医院131例患者血清PIVKA-Ⅱ、甲胎蛋白（AFP）浓度,包括慢性乙型肝炎74例,梗阻性黄疸16例,肝细胞癌41例。结果 肝细胞癌组患者血清PIVKA-Ⅱ水平高于慢性乙型肝炎组、梗阻性黄疸组（P均<0.05）。PIVKA-Ⅱ诊断肝细胞癌的敏感度和特异性分别为73.17%、85.14%,AFP分别为68.29%、51.35%;平行诊断实验的敏感度为85.37%。在肝细胞癌患者中,肿瘤直径>5cm患者的PIVKA-Ⅱ水平明显高于直径≤5.0cm患者,差异有统计学意义（P<0.05）;T₃、T₄期患者PIVKA-Ⅱ的水平明显高于T₁、T₂期患者,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 梗阻性黄疸患者血清PIVKA-Ⅱ无明显升高。肝炎活动会引起PIVKA-Ⅱ水平变化,但是低于正常上限。血清PIVKA-Ⅱ在诊断肝细胞癌的敏感度和特异性均高于AFP,联合诊断可提高敏感度。外周血PIVKA-Ⅱ水平与肿瘤直径、TNM分期有关。     

江苏徐州地区慢性乙型肝炎病人HBV耐药突变分析

目的分析徐州地区慢性乙型肝炎(CHB)病人乙型肝炎病毒(HBV)基因型及耐药变异位点的分布特点。方法收集2013年5月—2013年11月在我院就诊的门诊及住院CHB病人216例,采用核酸扩增技术结合荧光标记探针杂交方法检测病人血清HBV DNA,通过测序分析检测病人血清中的HBV基因分型及耐药变异位点。结果本组216例病人中,HBV基因C型207例(95.83%),B型9例(4.17%);病毒变异的85例,无变异的131例,变异率为39.35%;变异位点有rtV173、rtL180、rtA181、rtT184、rtS202、rtM204、rtV207、rtS213、rtV214、rtQ215、rtN236、rtN238。各突变位点中,rtM204和rtL180位点的突变检出率较高,分别为21.30%和13.89%。与拉米夫定、阿德福韦酯、替比夫定耐药相关的病毒基因位点的突变检出率分别为29.63%、20.37%、12.96%。结论徐州地区HBV基因型分布以C型多见,突变株占检测病毒株的39.35%;与拉米夫定和阿德福韦酯耐药相关的基因位点突变检出率相对较高,与恩替卡韦耐药相关的基因位点突变检出率相对较低。     

肺癌手术患者营养风险调查及对临床结局的影响

目的 了解肺癌手术患者营养状况，对营养风险相关因素进行分析并评估营养风险对临床结局的影响。方法 收集同济大学附属上海市肺科医院2014年1月至2017年12月收治的肺癌手术患者，采用营养风险筛查2002（NRS 2002）评估肺癌手术患者营养风险和营养不良发生率，并记录患者一般资料和营养相关指标实验室检查结果。结果 本研究共收集到符合纳入、排除标准肺癌手术患者640例。营养风险发生率为41.6%，其中女性发生率高于男性（χ2=6.80，P<0.05）；年龄65岁以上的患者发生率高于65岁以下患者（χ2=35.96，P<0.001）；不同手术方式肺癌患者营养风险发生率不同，且存在统计学差异（χ2=17.96，P<0.001）；营养风险发生率在不同等级手术患者之间存在着显著的差异（χ2=6.61，P<0.05），且发生率随手术等级的增大而升高；肺癌手术患者营养风险发生率在体质指数（BMI）低于正常值范围组（<18.5kg/m2）、正常值范围组（18.5~23.9kg/m2）和高于正常值范围组（≥24kg/m2）之间存在显著的差异（χ2=168.80，P<0.001），且随BMI值升高其营养风险发生率下降。而营养风险发生率在不同病理类型肺癌患者间差异无统计学意义（χ2=0.19，P>0.05）。有营养风险的患者术后引流量（t=2.42，P<0.05）、住院时间（t=2.48，P<0.05）及住院费用（t=2.45，P<0.05）明显高于营养状况正常的患者，差异均有统计学意义。结论 肺癌手术患者营养风险发生率较高，且与性别、年龄、手术方式和等级、BMI有关。且营养风险发生可导致患者术后引流量增加，住院时间延长，住院费用增加。因此，对肺癌手术患者进行营养风险筛查并及时进行干预，改善患者临床结局。     

SD大鼠肝脏星状细胞分离培养及方法的改进

目的：建立高效、简便的肝星状细胞分离方法.方法：采用改良原位灌流、12%Optiprep密度梯度离心法分离大鼠肝星状细胞,desmin和α-SMA 免疫细胞化学检测鉴定星状细胞性质.结果：肝星状细胞的得率稳定在3×10^7/肝以上,纯度为95%左右,存活率为98%,传代培养10代以上,细胞增殖及转分化状态仍良好.结论：肝星状细胞分离培养成功,对分离方法的改进措施可行.