丙型肝炎病毒NS5A对p53活性调控机制研究

目的 研究HCV NS5A对抑癌蛋白p53活性的抑制作用及其作用机制。 方法 采用荧光素酶报告基因系统观察pwwp-luc,pwwp-mut-luc,pc53-NS3及pCNS5A分别转染或共同转染HepG2、Huh7细胞的荧光素酶活性。应用凝胶滞留试验观察HCV NS5A是否影响p53与其特异DNA序列的结合。 结果 内源性p53能激活p21启动子转录功能,使荧光素酶活性明显增加(3.49×10~5与0.60×10~5,t=5.92,P<0.01)。外源性p53也能激活p21启动子转录功能,荧光素酶活性为5.63×10~5,与对照组(0.47×10~5)比较差异具有显著性(t=10.12,P<0.01)。HCV NS5A能抑制内源性和外源性p53对p21启动子的激活作用,并呈剂量依赖性(F≥20.71,P<0.01)。凝胶滞留试验显示HCV NS5A能阻碍p53与其特异DNA序列的结合。 结论 HCV NS5A能抑制p53的反式激活功能使其目的基因p21启动子的转录功能下降,其机制是HCV NS5A能阻碍p53与其特异DNA序列的结合。     

原发性胆汁性肝硬化的临床特点

目的：探讨原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者的临床特征,为临床诊断提供思路。方法：搜集2013年1月至2015年1月中南大学湘雅二医院收治的102例原发性胆汁性肝硬化患者的临床表现、生化检查、自身抗体、肝组织病理检查结果进行回顾性分析。结果：102例PBC患者中91例(89.21%)为女性,临床表现主要为乏力、纳差、口干、厌油、恶心、呕吐、皮肤瘙痒、腹痛、腹胀、消化道出血;体征主要表现为黄疸、脾大、肝大、双下肢浮肿、腹水;生化检查主要表现为碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)及γ谷氨酰转肽酶(gamma glutamyl transpeptidase,GGT)升高,GGT升高较突出。抗线粒体抗体M2亚型(anti-mitochondrial antibodies-M2,AMA-M2)阳性组(81例)与AMA-M2抗体阴性组(21例)比较生化指标差异无统计学意义(P>0.05)。肝硬化组(46例)与无肝硬化组(56例)中两组血清抗核抗体(anti-nuclear antibodies,ANA)、抗线粒体抗体M2亚型(anti-mitochondrial antibodies-M2,AMA-M2)、抗核膜糖蛋白抗体(anti-gp210 antibodies,抗gp210)、抗可溶性酸性磷酸化核蛋白抗体(anti-Sp 100 antibodies,抗Sp100)、抗-Ro52抗体(anti-Ro52 antibodies,抗Ro52)、抗前髓白血病细胞抗体(anti- promyelocytic leukemia antibodies,抗PML)阳性率分别为54.35%,89.13%,41.30%,13.04%,43.38%,10.87%和57.14%,71.43%,42.86%,12.5%,51.79%,3.71%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05);而抗三联体抗体(anti-BCOADC-E2 PDC-E2 OGDC-E2 antibodies,抗3E-BPO)在肝硬化组与无肝硬化组阳性率分别为84.78%和58.93%,差异有统计学意义(P<0.05)。30例肝组织病理检查确诊PBC患者的AMA-M2抗3E-BPO阳性率比其他抗体的阳性率高。结论：PBC好发于中年女性,临床表现多样;AMA-A2与抗3E-BPO串联检测有助于提高诊断的阳性率;抗3E-BPO抗体可能作为评价PBC严重性的指标;对于自身抗体阴性的疑似患者,需进一步做肝组织病理检查以确诊。     

盘点寄生虫病“新五大”

正随着人们生态环境的改变,以及国家对寄生虫病防治工作重心的变化,老的寄生虫病被消灭或遏制,一些过去不太引人注意的寄生虫病突兀出来。这就是我国寄生虫病的"新五大",包括包虫病、绦囊虫病、华支睾吸虫病、并殖吸虫病和旋毛虫病。中华人民共和国成立以来,经过多年综合防治及各级部门的共同努力,目前,"新五大"寄生虫病已得到了有效控制。     

丙型肝炎病毒NS5A在肝癌细胞对TLR4表达的影响

目的探讨丙型肝炎病毒非结构蛋白质5A（HCV NS5A）对Toll样受体4（TLR4）表达的影响。方法用含HCV NS5A基因的表达质粒pcNS5A瞬时转染QSG7701细胞,采用免疫细胞化学技术检测HCV NS5A及TLR4蛋白质的表达;采用逆转录聚合酶链反应观察HCV NS5A和TLR4的mRNA表达。结果转染pcNS5A质粒细胞内有HCV NS5A蛋白的表达。转染pcNS5A组TLR4 mRNA及蛋白质表达均较转染pRc/CMV和未转染质粒组明显增强,而后两组细胞TLR4 mRNA和蛋白质表达相似。结论 HCV NS5A可上调TLR4 mRNA和蛋白的表达。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白5A对干扰素α-2b诱导的信号传导和转录激活因子1磷酸化及核转移的影响

目的探讨丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白5A（NS5A）对干扰素α-2b诱导的Janus激酶-信号传导和转录激活子（JAK—STAT）信号传导途径中STAT1磷酸化及核转移的影响。方法用表达HCVNS5A的质粒（pCNS5A）转染Huh7细胞，应用免疫细胞化学技术检测HCVNS5A的表达，用免疫荧光和Western blot方法检测HCVNS5A对干扰素α-2b诱导的STAT1磷酸化和核转移的影响。结果转染了pCNS5A的Huh7细胞质可见HCVNS5A蛋白的表达；以干扰素α-2b诱导30min后，STAT1磷酸化及核转移在转染了表达HCVNS5A的质粒组比转染空白载体pRC／CMV组及未转染组减少，而未转染组及转染空白载体pRC／CMV组间无明显差别。结论表达HCVNS5A的质粒pCNS5A成功转染至Huh7细胞；HCV NS5A减弱干扰素α-2b诱导的STAT1的磷酸化及核转移，提示NS5A影响干扰素α-2b的JAKSTAT信号传导途径可能是HCV干扰素抵抗的机制之一。     

不同程度颅脑损伤患者血电解质水平变化及病死率评估研究

目的探讨颅脑损伤患者电解质水平变化与病情预后的关系。方法选取2012-2015年360例颅脑损伤患者作为研究对象,根据格拉斯哥昏迷评分将其分为轻度颅脑损伤组(171例)、中度颅脑损伤组(104例)、重度颅脑损伤组(85例),根据血钠水平将重度颅脑损伤组进一步分为高水平血钠亚组(73例)和稳定水平血钠亚组(12例),同时选取健康体检者70例作为对照组,检测各组入院后5d内血浆电解质(血钠、血钾、血氯)水平,并对结果进行统计分析。结果与对照组比较,轻度、中度颅脑损伤组血钠、钾、氯水平差异无统计学意义(P0.05)。重度颅脑损伤组血钠、氯水平高于轻度、中度颅脑损伤组,差异有统计学意义(P0.01)。轻度、中度、重度颅脑损伤组血钾水平与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。在重度颅脑损伤组中,高水平血钠亚组死亡58例(79.45%),稳定水平血钠亚组死亡4例(33.33%),差异有统计学意义(P0.01)。结论临床监测颅脑损伤患者尤其是重度损伤患者血钠水平变化,有利于病情恢复。     

核酶在细胞外切割HCV核心区RNA的研究

目的 研究核酶在细胞外切割HCV的作用。方法 设计核酶cDNA序列，构建核酶重组质粒及HCV核心区基因cDNA重组质粒。分别进行体外转录，并加入γ-^32P ATP以标记HCV RNA。将核酶RNA、HCV核心区RNA、RNA酶抑制剂及反应缓冲液混事浊国育，以核酶RNA切割HCV RNA。通过变性聚 烯酰胺凝胶电泳及放射自显影来分析结果。结果 β－半乳糖苷酶表型筛选均可见蓝色及白色菌落生长；核酶重组质粒直接测序结果见预期要苷酸序列；HCV重组质粒限制笥酶切分析见410bp条带。核酶切割反应显示：反应时间为15和30min时可见453、307、146nt3条带。反应时间为60min时仅见307及146nt2条带。结论 核酶重组质粒构建成功，所设计核酶对HCV有切割作用。