小鼠精原细胞分选方法改良的研究

目的:通过特异抗体结合的磁珠分选,改进小鼠未分化和分化中两类精原细胞分选方法。方法:利用Thy1和c-Kit两个特异抗体结合的磁珠分选技术,分别将出生后7 d雄性小鼠睾丸中的Thy1~+细胞和c-Kit~+细胞分别做为未分化和分化中的精原细胞分选出来,利用免疫荧光技术和流式细胞术,检测两种精原细胞的纯度,利用实时荧光定量PCR检测两种精原细胞中Gfrα1、Plzf、c-kit和sohlh2 mRNA的表达差异来鉴定两种精原细胞,并将Thy1~+细胞进行原代细胞培养。结果:Thy1~+细胞和c-Kit~+细胞的分选纯度分别达到(85.6±8.35)%和(89.40±2.77)%(P0.01)。Thy1~+细胞中Gfrα1和Plzf基因的相对表达量分别可达到c-Kit~+细胞的(9.47±1.29)、(4.40±0.59)倍,而在c-Kit~+细胞中kit和sohlh2基因的相对表达量分别可达到Thy1~+细胞的(7.38±1.07)、(3.88±0.28)倍(P0.01)。原代培养后,可见细胞状态良好,能够顺利的自我增殖,并具有精原干细胞增殖特征。结论:利用Thy1和c-Kit两个特异抗体结合的磁珠分选技术可以有效地将未分化和分化中的精原细胞分选出来,并将未分化的精原细胞进行体外培养。     

流式细胞仪和定量板镜检定量检测尿沉渣结果差异原因分析

随着尿沉渣检查方法的规范化、标准化的进步，尿沉渣定量已被推广。目前尿沉渣定量检测最常用的方法有两种，一种是以Sysmex UF-100型全自动尿沉渣分析仪为代表的流式细胞仪测定法，另一种是以Fast Rtadle尿沉渣定量分析板和Diasys R／S2003型尿沉渣分析工作站为代表的定量板镜检法。关于两种检测方法的参考值已有许多报道。关于用UF-100的流式细胞仪测定法测定的男性和女性RBC和wBC的参考值（个／μL），丛玉隆报道：0～12．0，0～24．0和0～10．0，0～26．0；鲁由金报道：0～13．0，0～22．0和0～12．0，0～24．0；陈国强报道：0～11．0，0～23．0和0～10．0，0～22．0；胡波报道：0～11．7，0～25．7和0～11．9，0～28．9。     

CD+4Th细胞在(口恶)唑酮诱导的小鼠实验性肠炎中的变化

目的研究CD4+细胞在(口恶)唑酮诱导的小鼠实验性肠炎中的变化及肠炎的发病机制.方法健康昆明小鼠24只随机平均分为正常组和模型组(以(口恶)唑酮灌肠造模).造模3 d后全部处死,提取外周血单个核细胞(PBMC)、脾脏单个核细胞(SMC)和肠黏膜固有层单个核细胞(LPMC)进行细胞培养,并利用细胞内细胞因子流式检测法测定Th1/Th2比例.结果培养48 h后,模型组的LPMC中Th1细胞百分比和Th2细胞百分比均比正常组明显上升(P＜0.01),Th1/Th2比正常组显著下降(P＜0.01).培养96h后,模型组的LPMC中Th1细胞百分比与正常组相比差异无统计学意义(P＞0.05),Th2细胞百分比较正常组明显上升(P＜0.01),Th1/Th2比正常组显著下降(P＜0.01).而2组的PBMC和SMC相比Th1、Th2细胞百分比和Th1/Th2差异均无统计学意义(P＞0.05).结论(口恶)唑酮诱导的小鼠实验性肠炎是一种Th2亚群占优势的肠黏膜局部免疫紊乱.     

大肠癌细胞DNA含量与形态学定量分析

目的探讨大肠癌的生物学行为及其临床诊治价值.方法应用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)和扫描显微分光光度计(microspectrophotometry,MSP)对88例大肠癌和腺瘤以及83例正常结肠粘膜的细胞核进行DNA含量测定、倍体分析和细胞周期研究,所获数据与临床病理指标和血清癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)作比较.结果正常结肠粘膜的细胞核DNA含量均为二倍体,DNA指数(DI)为1.00±0.10,MSP直方图为I型.大肠腺瘤的细胞核DNA含量明显低于大肠癌组(P＜0.01),而与正常结肠粘膜相比无显著差异(P＞0.05),其细胞核面积与大肠癌组无显著差异(P＞0.05).83例大肠癌细胞中异倍体检出率为68.68%,DI＞1.10或＜0.90,癌细胞核DNA含量与细胞核面积显著相关(r＝0.71,P＜0.01).随着Dukes分期的升高,异倍体检出率上升,二者呈正相关.细胞周期分析表明二倍体癌DNA合成期分数(SPF)介于正常结肠粘膜和异倍体癌之间.异倍体癌病人的术前CEA水平显著高于二倍体癌(P＜0.05).FCM的DI值与MSP的模态均值(MV)有很好的相关性(r＝0.73,P＜0.01),异倍体癌符合率达95%,然而二倍体癌符合率仅50%.结论DNA含量的检测有利于大肠癌的早期发现;倍体分析与CEA在评估大肠癌预后是一致的;FCM与MSP的联合应用为大肠癌的早期诊断、预后评估及制定正确的治疗方案提供了一条新的途径.     

老年脑梗死患者急性期血小板活化功能定量检测

目的 :探讨老年脑梗死患者外周血中血小板膜糖蛋白变化的临床意义。　方法 :应用流式细胞术检测了 6 8例急性期老年脑梗死患者外周血血小板活化分子标记物CD4 1、CD6 2p和CD6 3的含量水平 ,与 4 2例正常老年人对照 ;并对脑梗死组病灶大小、梗死部位、病情分级等与血小板活化分子表达的变化进行分析 ,应用统计学进行处理。　结果 :急性期脑梗死患者血小板粘附分子CD4 1、CD6 2 p和CD6 3的表达水平显著高于正常对照组 (P <0 .0 1) ,且与梗死灶大小及病情分级密切相关 ,与梗死部位无关。　结论 :老年脑梗死患者急性期外周血血小板活化功能明显增强 ,为早期应用抗血小板聚集药物的治疗提供了实验依据     

两种染色体检查法对良恶性胸腔积液诊断价值对比

[目的]探讨直接涂片和流式细胞术(FCM)两种染色体检测方法对良、恶性胸腔积液的鉴别诊断价值。[方法]采用直接涂片和FCM两种方法检查110例胸腔积液(良性组50例，恶性组60例)中的染色体，并将结果进行比较。[结果]直接涂片染色体检查对恶性胸腔积液诊断的敏感性为66．7％，特异性为94％，正确率79．1％；FCM法敏感性为85％，特异性为98％，正确率90．9％。[结论]FCM法检测染色体对鉴别良、恶性胸腔积液明显优于直接涂片法，可作为一种诊断恶性胸腔积液的有力手段。     

原发性血小板减少性紫癜患者血小板相关抗体的检测

目的了解原发性血小板减少性紫癜(ITP)患者体内血小板相关抗体(PAIg)水平及相关性。方法用FACSCalibur流式细胞仪检测56例ITP患者体内PAI水平。结果ITP患者体内PAIg明显升高,其中IgG升高最明显,为(20.67±7.10)%,有82%ITP患者升高,IgA均值正常范围为(18.58±8.85)%,有52%ITP患者升高,IgM均值正常范围为(7.74±5.53)%,有20%ITP患者升高,两者有相关性。结论PAIg是ITP诊断的一项实验室指标,患者以IgG升高为主,且大多数患者PAIg升高水平与血小板计数呈负相关。     

新型纳米根管充填材料对成骨细胞生长的影响

通过体外培养的成骨细胞,采用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐比色法和流式细胞术对新型纳米根管充填材料(nHA-PA66)作用下的成骨细胞生长情况的变化进行研究,评价其对成骨细胞生长的影响。以该材料的细胞培养基浸提液作用于实验组细胞,对照组采用培养基本身。实验组和对照组成骨细胞的生长情况和细胞周期无显著性差异,表明该新型纳米材料对成骨细胞的生长和细胞周期无不良影响。提示新型纳米根管充填材料的成骨细胞相容性较好,具有用作根充材料的基础。     

不同组织来源临床肿瘤主要细胞周期素表达类型的研究

目的观察人类主要细胞周期素（Cyclin D1、E、A、B1）在临床肿瘤细胞中表达特征并进行分类，探讨其对临床肿瘤分类的可行性及潜在意义。方法用流式细胞术（FCM）双参数法半定量检测161例恶性肿瘤手术切除标本细胞中Cyclin D1、E、A、B1表达，根据不同Cyclin在细胞周期中的作用及其异常表达特征，将肿瘤细胞主要Cyclin表达分为不同类型。结果细胞周期外Cyclin（D1）及周期内Cyclins（E、A、B1）在临床肿瘤细胞中表达无组织差异性（P〉0．05）。其异常表达大致可归为5种类型：Ⅰ型Cyclin（D1、E、A、B1）均高表达；Ⅱ型Cyclin D1低表达，Cyclin（E、A、B1）不同形式高表达；Ⅲ型Cyclin D1不表达，Cyclin（E、A、B1）不同形式高表达；Ⅳ型Cyclin D1不表达，Cyclin（E、A、B1）不同形式低表达；V型Cyclin（D1、E、A、B1）均不表达；再根据各型中不同周期内Cyclin的优势表达分为相应不同的亚型。a亚型：Cyclin（E、B1）表达为主；b亚型：CyclinE表达为主；c亚型：Cyclin B1表达为主；d亚型：Cyclin（E、A、B1）表达为主。肿瘤细胞主要Cyclin表达类型及相应亚型分布无组织来源的差异性（P〉0．05）。结论主要Cyclins表达类型可以作为不同组织来源肿瘤分类的依据，可能是体现不同肿瘤细胞周期破坏共同特征较为客观分类方法。