支气管哮喘特异性免疫治疗与变应原疫苗的研究进展

特异性免疫治疗(SIT)被认为是目前唯一哮喘病因治疗方法，通过基因工程技术获得纯化和标准化重组变应原能取代传统的天然变应原浸液，具有较好的免疫原性，能增强治疗的疗效。本文就近几年哮喘特异性免疫治疗与变应原疫苗研究中新进展进行回顾总结。     

日本血吸虫Calpain疫苗候选分子抗感染的免疫机制

目的探讨日本血吸虫疫苗候选分子—钙离子激活的中性蛋白激酶(Calpain)的保护性免疫力和免疫保护性机制。方法用重组纯化的Calpain抗原免疫BALB/c小鼠,制备抗Calpain血清,抗Calpain血清与机械转化的日本血吸虫童虫和来自于同种鼠激活的嗜酸性粒细胞共同培养,观察细胞对血吸虫童虫的粘附及对童虫的杀伤效果;RT-PCR分析Calpain抗原免疫BALB/c小鼠一氧化氮激酶(iNos.eNos.nNos)mRNA的表达;ELISA分析免疫小鼠体外培养脾细胞产生的细胞因子IFN-γ和IL-4。结果重组Calpain抗原免疫小鼠后,产生了一个极高的抗Calpain特异性抗体,此抗体介导了同种鼠的嗜酸性粒细胞对日本血吸虫童虫的粘附,37℃、5%CO2培养48h后,33.8%的日本血吸虫童虫被杀死,与控制组14.5%的自然死亡率相比有一个显著性的增高(P<0.01);RT-PCR测定重组Calpain抗原免疫1周小鼠iNosmRNA的表达显著性的增强,培养24h脾细胞上清中IFN-γ浓度高于对照组。结论Calpain特异性抗体介导了对日本血吸虫童虫的细胞毒作用,Calpain抗原能够诱导IFN-γ的产生,提示Calpain诱导Th1的免疫应答反应来抗日本血吸虫的感染。     

灯盏花素配合硝苯地平对肾性高血压大鼠肾细胞p53mRNA的影响

目的观察灯盏花素配合钙通道阻滞剂硝苯地平对双肾动脉狭窄性高血压大鼠肾损伤的保护作用,以及对大鼠肾脏细胞p53mRNA表达的影响。方法52只SD雄性大鼠随机分成五组:正常对照组、假手术组、高血压模型组、硝苯地平组、硝苯地平配合灯盏花素组。用双肾双夹法使大鼠两肾动脉狭窄,复制肾血管性高血压肾损坏模型,采用EIA法测定尿白蛋白,血清生化检测肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),荧光定量PCR测定p53mNRA含量。结果用药30天后,与模型组比较,硝苯地平组和灯盏花素 硝苯地平治疗组血压、血肌酐和24 h内蛋白排泄量明显下降(P<0.05),硝苯地平组和灯盏花素 硝苯地平治疗组肾脏细胞p53mRNA含量明显低于模型组(P<0.05),比正常对照组和假手术组高(P<0.05)。结论灯盏花素配合硝苯地平对肾血管性高血压模型有改善肾功能和降低肾脏细胞p53mRNA表达的作用。配合灯盏花素比单用硝苯地平效果好。     

德国小蠊细胞色素P450 CYP4G19基因的原核表达及多克隆抗体制备

目的 构建细胞色素P450 CYP4G19基因部分片段的原核表达载体并诱导其表达,纯化表达的融合蛋白并制备CYP4G19多克隆抗体.方法 应用RT-PCR扩增CYP4G19基因部分片段,产物经T-A克隆、测序鉴定,亚克隆入原核表达载体pET-28a,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,镍离子亲和层析法纯化重组蛋白后,免疫小鼠,获得多克隆抗体,ELISA及Western.blot检测多抗的效价及特异性.结果 从德国小蠊cDNA中克隆出一段771bp的亲水性基因片段,在大肠杆菌中诱导表达出约32000 Mr、以包涵体形式存在的P450重组蛋白.将纯化、复性的重组蛋白免疫 9,得到了滴度高于1:10<'6>的高效价多克隆抗体.Western-blot显示此多抗能与32000 Mr的重组蛋白特异结合.并能识别天然的德国小蠊微粒体P450蛋白.结论 利用原核表达的CYP4G19融合蛋白具有良好的免疫原性.制备出效价高、特异性强的抗德国小蠊CYP4G19多克隆抗体,为下一步关于德国小蠊CYP4G19蛋白表达特性及其抗药性功能的深入研究提供了重要的实验工具.     

德国小蠊抗药性及抗性机理的研究进展

德国小蠊的抗药性问题日渐突出，成为城市害虫防治的一大难点。德国小蠊抗性机理的研究可为抗性监测、治理以及新型杀虫剂的开发提供理论基础。本文主要就德国小蠊的抗药性产生情况及抗性机理的研究进展进行综述。     

定点突变法确定人体CYP2A6 和 CYP2A13香豆素 代谢的关键氨基酸

  【目的】 通过比较人体主要尼古丁代谢酶CYP2A6和CYP2A13野生型及突变体酶蛋白对香豆素7-羥化反应的催化动力学特征,确定影响两者催化活性差异的关键氨基酸残基, 提供建立评估人群尼古丁代谢酶基因多态性与吸烟行为及癌症易感性生物标记的依据&#65377; 【方法】 运用定点突变和Sf9昆虫杆状病毒蛋白表达体系产生CYP2A6 和CYP2A13在300,301以及369位点氨基酸互换的突变体蛋白质,测定系列香豆素浓度下的各个酶蛋白对香豆素7-羥化的催化反应活性,获得动力学参数并与野生型酶蛋白进行比较分析&#65377; 【结果】 与野生型CYP2A6相比较,其Ile300 → Phe突变体催化效率(Kcat = Vmax / Km)显著下降而Gly301 → Ala 突变体催化效率显著上升(1.64 和8.02 相对于野生型3.56, P < 0.01)&#65377;与之相对应,CYP2A13 的Phe300 → Ile 突变体催化效率则明显上升而Ala301 → Gly 突变体催化效率显著下降(1.03 和0.06 相对于野生型的0.27, P < 0.05)&#65377;这些酶催化特性的改变,主要是由于Vmax 的改变所致&#65377;369位的氨基酸残基,无论是Ser还是Gly对CYP2A6或CYP2A13的香豆素7-羥化反应催化活性均无明显的影响&#65377; 【结论】 300 和301位的氨基酸是影响CYP2A6及CYP2A13对香豆素7-羥化反应催化活性的关键残基,而369位氨基酸不影响此活性&#65377;     

不同温度下鱼类食品过敏原免疫学特性分析

目的研究鱼类食品在生熟状态下的过敏原组分，分析其热稳定性过敏原。方法4种新鲜鱼类经不同温度处理后去鳞、内脏和鱼骨。在预冷丙酮中破碎，脱脂，Coca＇s液提取其生熟总蛋白。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离，考马斯亮蓝显色分析其总蛋白组成，用鱼过敏患者血清对不同温度条件下的鲩鱼总蛋白进行免疫学特征分析。结果SDS-PAGE显示，生熟鱼总蛋白提取物中均含有多种蛋白，经高温处理后熟鱼总蛋白组分相对减步。免疫印迹试验结果表明，加工温度、时间对鱼类食品过敏原有显著影响。结论鱼类食品中禽有热稳定的过敏原。即使加工后仍具有致敏性。     

中国龙虾变应原性组分分析

[目的]对中国龙虾(Panulirusstimpsoni)变应原性组分进行分离和鉴定。[方法]用Coca's液提取法制备龙虾变应原粗浸液,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离蛋白质组分,并用凝胶成像系统测定各组分的相对分子质量;采用蛋白质-印迹(Western-blotting)鉴定龙虾的主要及次要变应原。[结果]中国龙虾变应原粗浸液分离得到14种以上的蛋白质组分,有6种蛋白质能与患者血清特异性IgE结合,其中分子量为23000、34000、64000的蛋白质结合率较高。[结论]中国龙虾分子量为23000、34000和64000的蛋白质为主要变应原,分子量26000和64000两种蛋白质在粗浸液中含量并不高,但变应原性较强。     

德国小蠊抗药性及抗性机理的研究进展

德国小蠊的抗药性问题日渐突出,成为城市害虫防治的一大难点。德国小蠊抗性机理的研究可为抗性监测、治理以及新型杀虫剂的开发提供理论基础。本文主要就德国小蠊的抗药性产生情况及抗性机理的研究进展进行综述。