HO-1基因转染对骨髓间充质干细胞增殖、 表型及多向分化能力的影响

目的 探讨在体外培养条件下,慢病毒载体介导的血红素加氧酶-1(HO-1)基因转染对骨髓间充质干细胞(MSC)增殖、表型及多向分化能力的影响。方法 分离培养大鼠源性骨髓MSC,利用过表达HO-1重组慢病毒载体(lenti-HO-1)将HO-1基因转染到MSC中,用荧光倒置显微镜及Western blot法分析评估转染效率。利用1.5μg/ml的嘌呤霉素筛选稳定过表达HO-1的MSC(MSC-HO-1)。用Western blot法检测MSC与MSC-HO-1内HO-1蛋白表达情况,用细胞计数法绘制MSC与MSC-HO-1的生长曲线,流式细胞仪检测MSC与MSC-HO-1表型,成骨、成脂及成软骨细胞诱导分化检测多向分化潜能变化。结果 MOI=50的 Lenti-HO-1可高效转染MSC。与MSC比较,MSC-HO-1在经过多次传代后仍能高效过表达HO-1,差异有统计学意义(P<0.05)。MSC-HO-1的增殖生长趋势、表面标志表达及多向分化潜能均与未转染的MSC相似。结论 重组慢病毒载体Lenti-HO-1可成功转染MSC并高效表达转入的基因;HO-1基因修饰对MSC增殖活性、免疫表型及多向分化潜能无显著影响。     

量化考评体系在医学专业学位硕士研究生培养过程中的建立

医学专业学位硕士研究生的培养是现阶段国内医学类专业毕业生继续医学教育的重要形式,其培养目标是拥有合格的临床专业知识和技能的同时兼具与硕士研究生相匹配的科研能力。但在教学培养过程中,普遍存在缺乏同质化管理和考核,重毕业论文轻过程管理,重专业知识培训轻政治思想教育和心理辅导的现象。本文从政治思想教育、临床技能、科研培训三方面对建立规范的医学专业学位硕士研究生对培养量化考核评价体系提出了思考与建议     

大鼠HO-1基因重组慢病毒载体的构建及在骨髓间充质干细胞中的表达

目的 构建大鼠血红素加氧酶1 (HO-1)基因重组慢病毒载体lenti EGFP-HO-1,并检测其在骨髓间充质干细胞(BMSC)中的表达效率.方法 利用聚合酶链反应技术(PCR)扩增rat-HO-1基因,并克隆到pGV287 EGFP载体中,行PCR及测序鉴定所构建的重组质粒pGV287-EGFP-HO-1;将重组质粒pGV287-EGFP-HO-1及辅助包装质粒pHelper 1.0、pHelper 1.0共转染293细胞进行重组慢病毒lenti-EGFP HO-1的包装,并采用荧光标记法检测病毒滴度,再进一步感染BMSC,荧光显微镜下观察感染效果、Western blot检测BMSC内HO-1表达情况.结果 大鼠HO-1基因扩增产物大小为911 bp,与目的基因相关片段中HO1 cDNA大小一致.阳性克隆行PCR后形成498 bp,其大小与目的片段大鼠HO-1 cDNA相当,进一步测序鉴定提示与GenBank信息库中rat-HO-1基因mRNA一致.重组慢病毒lenti-GV287-EGFP-HO1滴度为2×108 TU/ml,感染BMSC后可观察到报告基因EGFP表达,慢病毒lenti-GV287-EGFP-HO-1感染组中可检测到HO-1蛋白表达.结论 本研究成功构建了重组慢病毒载体lenti-GV287-EGFP-HO-1,并能够在BMSC中高效表达,为进一步探索HO-1基因修饰间充质干细胞在肺损伤中的作用奠定了基础.     

全氟化碳对脂多糖诱导肺泡上皮细胞炎性反应及单免疫球蛋白白介素1相关蛋白表达的影响

【摘要】 目的 探讨全氟化碳（PFC）对脂多糖（LPS）诱导人肺泡上皮A549细胞炎性反应及单免疫球蛋白白介素 1受体相关蛋白（SIGIRR）表达的影响。方法 实验分为正常细胞组、全氟化碳+脂多糖（PFC+LPS）组、全氟化碳（PFC）组及脂多糖（LPS）组。各组细胞经相应处理24 h后,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养上清中的TNF α、IL 6和IL 10含量,用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测核转录因子 κB （NF κB）和SIGIRR的表达。结果 ELISA结果显示,LPS组TNF α、IL 6水平较正常细胞组升高（P＜005）;PFC+LPS组TNF α、IL 6水平较LPS组下降（P＜005）;与正常细胞组相比,PFC组IL 10水平升高（P＜005）,PFC+LPS组IL 10水平较LPS组升高（P＜005）。Western blot 结果显示,与正常细胞组相比,LPS组核内磷酸化NF κB p65表达上调（P＜005）,PFC+LPS组核内磷酸化NF κB p65表达水平较LPS组降低（P＜005）;与正常细胞组相比,LPS组SIGIRR表达水平下调（P＜005）,PFC+LPS组SIGIRR表达水平较LPS组上调（P＜005）。PFC本身对TNF α、IL 6含量及NF κB p65表达无影响,但PFC可促进A549细胞释放IL 10及上调SIGIRR表达（P＜005）。结论 PFC可减轻A549细胞对LPS诱导的炎性反应,促进抗炎因子IL 10分泌及上调负调控分子SIGIRR表达是可能的分子机制。     

急性肺损伤／急性呼吸窘迫综合征发病机制的研究进展

急性肺损伤（acutelunginjury，ALI）和急性呼吸窘迫综合征（acuterespiratorydistresssyndrome，ARDS）是指由心源性以外的各种肺内外致病因素所导致的急性、进行性缺氧性呼吸衰竭。虽然目前ALI／ARDS发病机制以及相应的治疗手段已经取得了一些进展．但是发病率和病死率仍较高．其病死率高达30％～40％。ALI／ARDS的发病机制十分复杂．涉及的环节多．受损的靶细胞多。     

姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖活性的影响

目的探讨姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖活性的影响.方法采用细胞计数法绘制亲代A549和A549/DDP细胞生长曲线,MTY法测定A549/DDP对顺铂的耐药指数以及姜黄素对A549/DDP细胞抑制率.将不同浓度姜黄素作用于A549/DDP细胞24h 后,Hoechst33258染色荧光显微镜下观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率.以20μmol/L的姜黄素作用细胞24h 后,流式细胞仪分析细胞周期.结果亲代A549细胞和A549/DDP细胞的生长曲线相似,倍增时间分别为(33.24±0.24)h和(32.88±0.11)h(P＞0.05);顺铂处理A549和A549/DDP细胞72h 后,半数抑制浓度(IC50)分别为13.57 μmol/L 和146.79 μmol/L,A549/DDP细胞对顺铂的耐药指数为10.82.姜黄素对A549/DDP细胞增殖有抑制作用,并且呈时间浓度依赖性(P＜0.05).姜黄素作用后,Hoechst染色显示A549/DDP细胞核缩小变形,致密浓染荧光成团块分布.流式细胞仪分析结果示细胞凋亡率呈明显剂量依赖关系(P＜0.05).20 μmol/L的姜黄素作用细胞24h,引发G2期阻滞.结论姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖具有抑制作用,并呈时间、浓度依赖.其作用可能是通过阻滞细胞周期进程和诱导细胞凋亡来实现的.     

肺纤维瘤1例

<正>肺纤维瘤是一种非常罕见的肺间叶组织良性肿瘤,现将本院2013年3月收治的1例病人报道如下。病例资料患者,男,61岁,主因发现右下肺占位2月余入院。患者于2013年1月中旬因上腹部隐痛,入当地医院就诊,胸片示:右中下肺野可见片状高密度阴影,进一步查肺CT示:右肺下叶可见大片实变影,右肺下叶可见高密度结节影,左肺上叶陈旧性病灶;支气管镜检查示:双肺下叶背段支气管开口呈外压     

北京市海淀区1806名小学生肺活量体重指数分析

目的 肺活量体重指数是反映身体机能状况的指标之一,于2014年9~10月对北京市海淀区1 806名小学生肺活量体重指数进行计算及分析,为提高儿童青少年的健康水平提供参考。 方法 整群随机抽样法抽取北京海淀区1 806名小学生进行身高、体重及肺活量测量,按公式[肺活量/体重(ml/kg)]计算肺活量体重指数,采用t检验比较不同年龄组别,男、女生肺活量、肺活量体重指数,采用χ2检验比较不同年龄组别,男、女生肺活量体重指数不及格率及优秀率;按公式[体重/身高2(kg/m2)]计算体重指数(body mass index,BMI),依据相应标准,判别轻体重、正常体重、超重与肥胖,比较不同体重组别间肺活量体重指数差异。 结果 共随机抽样1 806名小学生,其中男生923名,女生883名,总体上随着年龄增长,男、女生的肺活量绝对值均呈增长趋势,在同年龄组别中,除10岁年龄组外,男生肺活量均大于女生肺活量,差异有统计学意义(P＜0.05);在6、7、9岁年龄组别中,男生的肺活量体重指数大于女生肺活量体重指数,差异有统计学意义(P＜0.05),而在8、10、11岁年龄组别中,男、女生间的肺活量体重指数差异无统计学意义(P＞0.05);女生的不及格比率要高于男生(8.4% vs.5.1%,P＜0.05),而男、女生的优秀检出率比较(11.5% vs.13.4%),差异无统计学意义(P＞0.05);肺活量体重指数与BMI指数呈负相关,随BMI指数的增大肺活量指数显著降低。 结论 轻体重组和正体重组身体机能优于超重和肥胖组,提示超重及肥胖一定程度影响了体质健康发展,肺活量体重指数呈现随体重增长而下降的趋势。