Gene Expression Omnibus资源库在肿瘤学研究中的应用

Gene Expression Ominibus （GEO）是供学者们分享基因表达谱芯片数据、高通量测序数据等的国际化的公共资源平台,其中涵盖了应用炎癌模型获得的大量相关实验数据,比如关于某些炎性因子的表达情况.这些数据为炎癌转化中的调控网络和分子机制的研究提供了帮助,也为肿瘤的防治提供了新思路.研究者针对新的预测基因进行研究时,起源于各种疾病模型或实验处理的GEO数据库为寻找其有关功能提供了有利条件和有力证据.     

年龄相关性黄斑变性与补体因子H相关

年龄相关性黄斑变性（age related macular degeneration，AMD）是美国等西方国家65岁以上人群中首位致盲性眼病，是美国国立卫生院（National Institute of Health，NIH）等科研基金管理机构重点资助研究的眼底疾病。2005年4月15日出版的Science杂志同时发表了3篇关于AMD遗传学基础研究的文章。3个独立的研究小组应用各自不同的研究方法获得的结果均提示补体因子H（complementfactorH，CFH）的多态性与人体对AMD的敏感性有关。     

暗视野显微镜在眼科实验研究中的应用

目的 探讨暗视野显微镜在眼科实验研究中的应用.方法 使用Nikon E800研究显微镜,透射光模式和暗视野模式下直接观察眼科常见的实验标本,包括培养1周的角膜上皮细胞爬片、小鼠角膜缘血管网、视网膜铺片和玻璃体手术中切取的视网膜前膜组织.结果 显微镜透射光模式观察培养角膜上皮细胞胞浆内结构不清;暗视野模式下可观察到细胞内微丝的走行和排列方式,细胞立体感明显增强.显微镜透射光模式观察可见细胞层次不清,血管形态不清晰;暗视野模式下观察可见小鼠角膜缘组织血管网立体感强,色彩对比良好,细胞层次清晰,细胞形态和界限明显,血管走行和形态非常清楚.暗视野显微镜模式与透射光模式相比较,可清晰观察到视网膜前膜内增生的新生血管,血管走行和分布规律均可得到较好的显示.结论 暗视野显微镜简便易行,提高对病变的观察和认识,可广泛用于眼科科研工作中.     

小鼠TGFBI基因真核表达载体的构建和表达

目的构建小鼠TGFBI基因的真核表达载体,为研究角膜营养不良的发病机制奠定基础。方法提取BALB/cBy小鼠正常角膜组织总RNA,经反转录-PCR合成TGFBI cDNA,克隆入真核表达载体pcDNA3.1并测序验证。用不同剂量重组质粒pcDNA3.1-TGFBI转染NIH3T3细胞,通过SYBR荧光实时定量PCR和Western blot检测TGFBI在细胞中的表达。结果测序结果显示扩增到的TGFBI cDNA以正确序列和方式插入载体,实时定量PCR和Western blot结果显示TGFBI在NIH3T3细胞中表达增强。结论成功构建了小鼠TGFBI基因真核表达载体,并在细胞中进行表达,为进一步研究TGFBI在角膜内的生理、病理功能奠定基础。     

5-氟尿嘧啶诱导的造血损伤中骨髓基质重建相关基因的表达及其意义

目的:探究胞外基质重建相关基因在氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)诱导的造血损伤重建中的表达及其意义。方法:采用C57BL/6小鼠腹腔注射5-FU(200 mg/kg)建立造血损伤模型。注射后3、6、9、15、21、27 d常规检测外周血象;在相同时间点用TRIzol法提取骨髓总RNA,反转录后以实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测胞外基质重建相关基因的mRNA水平,包括细胞外基质(ECM-1)、明胶酶(MMP-2)、基质降解素(MMP-3)、胶原酶(MMP-13)、组织金属酶抑制剂(TIMP-1)基因。结果:小鼠经5-FU注射后外周血出现典型的造血损伤与修复过程,且红细胞、白细胞、血小板损伤修复的动态不同;RT-q PCR显示在5-FU损伤期骨髓胞外基质重建相关基因的表达均显著上调,MMP-2在注射5-FU后第3天时表达最高,MMP-3、MMP-13、TIMP-1、ECM-1在第6天表达最高;MMP-3在骨髓中表达较低,但损伤后上升幅度最大。结论:在5-FU建立的骨髓造血损伤模型中,胞外基质重建相关基因可能参与造血损伤和随后骨髓基质的重构过程,且不同基因发挥的时段和作用对象不同,但彼此协同为造血损坏后重建奠定基础。     

IL10～13的基础和临床前研究进展

IL10～13是近几年发现、命名的白细胞介素家族成员。本文简介它们的基本生物学性质,综述各因子的基础和临床前研究的最新进展,并对其临床应用前景作一展望。     

血小板对树突状细胞和肿瘤细胞抗原呈递活性的抑制作用

本研究探讨完整的血小板对骨髓来源的树突状细胞（BMDC）和肿瘤细胞的抗原呈递功能的影响。抗原呈递检测体系采用BMDC诱导的混合淋巴细胞反应或肿瘤细胞系EG7（表达卵白蛋白OVA）诱导的OVA特异性T细胞的活化,共培养体系中加入从小鼠外周血分离的血小板至不同浓度,培养一定时间后采用同位素掺入法检测淋巴细胞增殖,采用ELISA检测各种细胞因子的水平,采用流式细胞术检测细胞表面分子情况。结果发现,在反应体系中加入血小板时,淋巴细胞增殖和IFN,,／产生均明显受抑制。血小板还可以阻断细菌脂多糖或含CpG基序的寡核苷酸引起的BMDC表面B7之上调、细胞因子分泌及对同种异基因淋巴细胞的刺激反应。血小板也可抑制BMDC特异性T细胞呈递可溶性或细胞性抗原的能力,表现为淋巴细胞的增殖和细胞因子分泌受到抑制。血小板的这些抑制作用均依赖于加至培养体系中血小扳的浓度。流式细胞术分析表明,血小板结合于BMDC仅轻微增加后者的死亡比例。结论：在某些条件下,血小板可以通过抑制抗原呈递功能而对免疫反应起到负向调控作用,血小板对免疫系统的调节可能比原来预期的更加复杂。     

CpG-ODN对树突状细胞的分化成熟的影响

目的：探讨ＣｐＧ－ＯＤＮ对小鼠骨髓来源的树突状细胞（ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ,ＢＭＤＣ）分化成熟的影响。方法：利用合成的含非甲基化ＣｐＧ基序的寡核苷酸（ＧｐＧ ｍｏｔｉｆ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ,ＣｐＧ－ＯＤＮ）,通过酶切鉴定ＤＮＡ制品ＣｐＧ基序甲基化程序,ＦＡＣＳ分析ＤＣ表型和内吞作用的变化,ＥＬＩＳＡ检测ＤＣ培养上清     

一种快速制作以羊膜为载体培养角膜上皮细胞切片的方法

以羊膜为载体培养细胞已经被证明有利干细胞的分化和生长，临床上可能较好的应用前景。但是，在研究载体上培养细胞形态时，获得良好的侧切面，观察细胞侧面形态、细胞基底面与羊膜基质的关系，一直是较为困难的工作。