HBV基因型的研究现状与发展趋势探讨

[摘要]?目前研究已知HBV有多种基因型，不同基因型在不同的种族、地域方面分布特点不同且HBV基因型是造成慢性感染自然史差异的原因之一，它们在感染的临床表现和抗病毒治疗的反应中起着重要作用。检测HBV基因型和了解HBV不同基因型对疾病预后的影响，对评估患者疾病结局和指导临床规划最佳治疗方案具有重要意义。 　　[关键词]　乙型肝炎病毒；基因型；基因突变；治疗     

四氢嘧啶对人皮肤成纤维细胞衰老的影响

目的 探究四氢嘧啶(ectoine)对人皮肤成纤维细胞(HSFs)是否具有减缓衰老的功效及其具体机制。方法 采用不同浓度四氢嘧啶作用于HSFs 24 h, MTT法检测细胞活性，β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色观察细胞衰老情况，流式细胞术检测细胞调亡和活性氧(ROS)的水平，qPCR检测p16、p21、p53 mRNA的表达水平。结果 MTT结果显示，与对照组相比，各四氢嘧啶处理组对细胞无毒性作用，随着四氢嘧啶浓度增加，HSFs细胞凋亡率、ROS水平以及p16、p21、p53 mRNA表达水平均显著降低(P<0.05)。结论 四氢嘧啶可通过降低细胞凋亡率、抑制ROS活性和减少p16、p21、p53 mRNA的表达来减缓HSFs衰老，这将为今后开发以四氢嘧啶作为主要成分针对HSFs的抗衰老产品提供一定的理论依据。     

慢性高原病脑部多体素1H-MRS研究

目的利用多体素氢质子磁共振波谱成像(hydrogen proton magnetic resonance spectroscopy,¹H-MRS)探讨慢性高原病(chronic mountain sickness,CMS)长期缺氧状态下脑部代谢物的特点,并比较各代谢物与血液指标之间的相关性。材料与方法前瞻性纳入青海大学附属医院经临床确诊为CMS的17例男性患者作为实验组,年龄(53.29±9.03)岁,居住海拔(3989.12±937.45)m,血红蛋白(hemoglobin,HGB)(224.35±11.81)g/mL,并招募与实验组年龄及居住海拔相匹配的18名健康男性志愿者作为对照组,年龄(48.61±8.76)岁,居住海拔(3674.94±634.27)m,HGB(156.67±9.46)g/mL。采用Siemens Prisma 3.0 T MR扫描仪20通道头颅线圈对所有受试者行常规头颅MRI及多体素;H-MRS检查,通过Syngo.via后处理软件获得;H-MRS图,ROI选取双侧额叶及海马区,并获得相应脑区N-乙酰天门冬氨酸/肌酸(NAA/Cr)、胆碱/肌酸CHo/Cr、乙酰天门冬氨酸/胆碱(NAA/CHo)、乳酸/肌酸(Lac/Cr)的比值。结合独立样本t检验及非参数曼-惠特尼U检验以比较两组间代谢物相对浓度差异,然后将CMS组双侧额叶及海马区各代谢物比值与血液生化指标作相关性分析。结果(1)两组受试者年龄、长期居住海拔差异均无统计学意义(P>0.05),而与对照组相比,CMS组HGB、红细胞计数(red blood cell count,RBC)、血细胞比容(hematocrit,HCT)增高,血小板(blood platelet,简称PLT)减低,差异均有统计学意义(P<0.01);(2)与对照组相比,CMS组双侧额叶及海马区NAA/Cr及NAA/CHo均减低(P<0.05),Lac/Cr增高(P<0.05),差异均具有统计学意义;(3)与对照组相比,CMS组双侧额叶及双侧海马区CHo/Cr均增高(P>0.05),差异无统计学意义;(4)CMS组右侧额叶及左侧海马CHo/Cr与RBC明显正相关,左侧额叶CHo/Cr与HCT低度正相关,右侧额叶及左侧海马Lac/Cr与HCT低度正相关。结论CMS长期缺氧状态下脑组织局部代谢物改变,神经元受损,无氧代谢增加,且这些代谢物的改变与血液指标呈一定的相关性,可为临床后续进一步预防或干预CMS患者脑损害提供影像学证据及监测指标。     

3种镇静药物对ICU重症肺炎患者免疫因子的影响及其镇静效果比较

目的比较3种镇静药物对重症监护病房(ICU)重症患者免疫平衡因子的影响及其镇静效果。方法选取该院2016年10月至2018年1月收治的重症肺炎患者150例作为研究对象,根据药物类别分为咪达唑仑组、丙泊酚组、右美托咪定组,各组50例,观察比较各组患者给药后不同时间段的免疫指标水平、血流动力学、镇静效果、机械通气时间、ICU停留时间和不良反应情况。结果 (1)和入院时相比,72h后免疫指标水平及Ramsay评分均显著下降;丙泊酚组及右美托咪定组白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌低于米达唑仑组,差异均具有统计学意义(P0.05)。(2)与入院时相比,3组用药后72h的血气动脉指标比较差异具有统计学意义(P0.05);与咪达唑仑组相比,丙泊酚组和右美托咪定组用药后各个时间点的血气动脉指标明显更好,差异具有统计学意义(P0.05)。(3)3组镇静效果比较差异无统计学意义(P0.05)。(4)3组患者的机械通气时间和ICU停留时间比较差异无统计学意义(P0.05)。(5)和咪达唑仑组相比,丙泊酚组和右美托咪定组不良反应明显更少,差异有统计学意义(P0.05)。和丙泊酚组相比,右美托咪定组不良反应明显更少,差异有统计学意义(P0.05)。结论在相同的镇静深度和长期的镇静条件下,咪达唑仑、丙泊酚、右美托咪定对重症患者的免疫影响不同,但镇静效果无明显差异。     

青海地区藏族妊娠期高血压疾病患者eNOS基因G894T、EPO基因T3541G、TNF-α基因G308A多态性的临床研究

目的研究内皮型一氧化氮合酶(e NOS)、促红细胞生成素(EPO)和肿瘤坏死因子-α(t TNF-α)基因多态性与青海地区藏族妊娠期高血压疾病发生的关系。方法选取2016年4月-2018年4月接受产前检查并分娩的60例藏族妊娠期高血压疾病患者为研究组,另选取同期分娩的60例正常孕妇为对照组。提取孕妇外周血液DNA,测量两组孕妇DNA浓度,使用琼脂糖凝胶电泳法观察DNA电泳图,合成TNF-α基因G308A、EPO基因T3541G和e NOS基因G894T上下游引物,使用琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒对PCR产物进行切胶纯化,并进行酶切PCR产物、PCR纯化产物,对不同基因进行测序,并将结果输入美国国立生物技术信息中心数据库,判断PCR产物是否为目的基因片段,验证基因型分型结果。结果 e NOS基因G894T多态性分布结果:研究组TT、GT型基因频率低于对照组,GG型基因频率高于对照组(P<0. 05);研究组T等位基因频率低于对照组,G等位基因频率高于对照组(P<0. 05); G等位基因为妊娠期高血压疾病患者易感基因。EPO基因T3541G多态性分布结果:研究组TG型基因频率高于对照组,TT型基因频率低于对照组(P<0. 05);研究组T等位基因频率低于对照组,G等位基因频率高于对照组(P<0. 05); G等位基因为妊娠期高血压疾病患者易感基因。TNF-α基因G308A多态性分布结果:研究组GG型基因频率低于对照组,GA型基因频率高于对照组(P<0. 05);研究组G等位基因频率低于对照组,A等位基因频率高于对照组(P<0. 05); A等位基因为妊娠期高血压疾病患者易感基因。结论 TNF-α基因G308A、EPO基因T3541G、e NOS基因G894T多态性与青海地区藏族妊娠期高血压疾病的发生存在密切关系,EPO基因T3541G和e NOS基因G894T的G等位基因、TNF-α基因G308A的A等位基因为妊娠期高血压疾病患者易感基因。     

HSP90β干扰和过表达慢病毒载体的构建及其在骨肉瘤细胞Saos-2中的表达

目的:获得热休克蛋白90β(HSP90β)基因干扰和过表达慢病毒表达系统，并检测其在人骨肉瘤细胞株Saos-2中的表达水平。方法:设计合成shRNA，以慢病毒表达质粒构建HSP90β干扰和过表达载体，酶切电泳、测序技术鉴定载体构建是否成功。重组病毒转染H1299细胞，以嘌呤霉素筛选稳定转染的Saos-2细胞，通过荧光显微镜观察计数获得转染效率。将感染好的细胞分为干扰NC组（NEG-shRNA）、干扰组（shRNA-HSP90β）、过表达NC对照组（NEG-pEZ）及过表达组（pEZ-HSP90β）。通过qRT-PCR 与Western blotting 分别从mRNA 和蛋白表达水平验证目的基因的干扰和过表达水平。结果:插入慢病毒表达载体的基因片段与目的基因的碱基序列完全一致。病毒包装成功后，嘌呤霉素最小致死浓度1 μg/ml，感染复数200，感染人Saos-2的感染效率达80%，其中shRNA-HSP90β组干扰效率为86.35%，pEZ-HSP90β组的mRNA相对表达量增加2.8倍。进一步研究发现，shRNA-HSP90β组较NEG-shRNA组中HSP90β蛋白表达明显降低，pEZ-HSP90β组较NEG-pEZ组HSP90β蛋白表达增加。结论:HSP90β基因干扰和过表达慢病毒载体构建成功，并能够在Saos-2中稳定表达。     

基因多态性与子痫前期的相关性

妊娠期高血压疾病包括妊娠期高血压、轻度子痫前期、重度子痫前期和子痫，其中子痫前期和子痫是导致全 世界孕产妇和围产儿死亡的主要原因之一。众多研究显示子痫前期是一种多基因遗传性疾病，与部分基因多态性存 在相关性。近年来研究显示，凝血系统、血管舒缩、血管内皮损伤等相关基因突变可导致基因表达异常，使表达产 物出现数量或功能异常，最终导致子痫前期的发生。