骨肉瘤差异表达基因的生物信息学分析及关键基因筛选

目的筛选成骨型骨肉瘤与正常成骨细胞的差异表达基因, 寻找成骨型骨肉瘤发生、发展的关键基因。方法从Gene Expression Omnibus(GEO)数据库获得正常成骨细胞和骨肉瘤组织的基因表达数据集GSE33382, 采用R语言的limma包筛选正常成骨细胞和成骨型骨肉瘤的差异表达基因, 对差异表达基因进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。采用String数据库构建蛋白交互网络, 应用Cytoscape软件的分子复合物检测(MCODE)插件筛选互作网络中的网络模块, 应用Cytoscape软件中的BiNGO模块对MCODE筛选得到的前3个主要模块所包含的差异表达基因进行基因本体(GO)富集分析。采用MCC算法筛选蛋白互作网络中前10个关键基因。从GEO数据库获得骨肉瘤的基因表达和生存数据集GSE39055, 采用Kaplan-Meier法进行生存分析。选取2005年1月至2015年12月福建医科大学附属第一医院收治的48例成骨型骨肉瘤患者的资料进行验证, 采用免疫组化法测定骨肉瘤组织中STC2蛋白的表达, 结合患者的临床资料进行生存分析。结果从GSE33382数据集...     

LPS对骨肉瘤细胞迁移、侵袭及TLR4/HOTAIR通路的影响

目的探讨脂多糖(LPS)对骨肉瘤细胞迁移和侵袭的影响及其潜在的作用机制。方法将人MG-63骨肉瘤细胞随机分为2组:对照组和LPS组。LPS组细胞用10 g/ml的LPS干预24 h,对照组用生理盐水干预。ELISA检测干预后培养基中促炎因子的水平,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,Western Blot检测相关蛋白的表达。结果与对照组相比,LPS组培养基中促炎因子TNF-α、IL-1和IL-6的释放水平均显著增高(P<0.05),LPS组迁移细胞数和侵袭细胞数均显著增高(P<0.05),LPS组中E-cadherin的表达显著降低(P<0.05),而N-cadherin、α-SMA、波形蛋白、TLR4和HOTAIR的表达均显著增高(P<0.05)。结论LPS诱导的肿瘤微环境可促进骨肉瘤细胞的迁移和侵袭,其机制与TLR4/HOTAIR途径介导的EMT过程的发生有密切关系。     

1999-2018年贵州省黔南州居民骨肉瘤发病特征及变化趋势分析

目的 分析1999-2018年黔南州居民骨肉瘤发病特征及变化趋势，为制定防治措施提供参考依据。方法 提取黔南州肿瘤登记处系统中1999-2018年新发骨肉瘤病例发病信息进行性别、年龄分析，计算发病率、中国标化发病率（中标率）、世界标化发病率（世标率）、年龄别发病率和年均变化百分比（APC）等。并对黔南州不同民族骨肉瘤患者病理类型分布特征进行统计分析。结果 1999-2018年黔南州居民新发骨肉瘤237例（男性147例，女性90例），发病率为3.66/100万（男性4.39/100万，女性2.87/100万），中标率2.49/100万（男性2.76/100万，女性2.17/100万），世标率为2.90/100万（男性3.45/100万，女性2.35/100万）。发病率在9岁以前处于较低水平，9岁以后迅速升高，10～19岁年龄段达到峰值14.97/100万（男性16.03/100万，女性12.85/100万），20岁以后迅速下降，60岁以上年龄段发病率逐渐减低，男、女年龄别发病率变化趋势基本一致。237例骨肉瘤患者病理诊断主要以常规性骨肉瘤最为常见，占83.54%。布依族骨肉瘤患者病理类型分布与苗族、水族、毛南族、汉族及其他民族骨肉瘤患者比较，差异均有统计学意义（x2值分别为16.125、14.709、12.486、9.613、10.078、28.727，P=0.001）。结论 贵州省黔南州居民20年来骨肉瘤发病率有呈上升趋势，男性、10～29岁年龄段和布依族居民是防治的重点人群。     

骨水泥型与非骨水泥型假体置换治疗膝关节周围骨肉瘤的疗效评价

目的回顾性分析骨水泥型与非骨水泥型假体置换治疗膝关节周围骨肉瘤的近期临床疗效。方法 2014年6月至2019年6月,71例累及膝关节周围骨肉瘤患者于我院行保肢治疗,男43例,女28例,平均10.4 (6~49)岁。接受骨水泥型和非骨水泥型假体置换分别54例和17例。采用MSTS功能评分对两种假体置换手术进行评分。结果所有患者随访10~76个月,平均31个月。骨水泥型和非骨水泥型假体置换组MSTS功能评分分别为(23.8±3.3)分、(25.9±1.7)分,两组差异有统计学意义(P <0.05)。骨水泥型假体置换组1例发生假体周围骨折,2例发生假体无菌性松动。非骨水泥组随访期间均未出现感染、假体脱位、假体松动等并发症。本组11例死于肿瘤相关疾病,48例无瘤生存,12例带瘤生存。24例(24/71,33.8%)术后4~29个月内发生肺部转移或其它部位多发转移,8例(8/71,11.3%)出现局部复发。结论随着骨肉瘤患者总生存期的延长和生存率的提高,对于预生存期较长、活动量较大且骨质较好的患者而言,非骨水泥型假体不失为一种有效的治疗选择。     

The role of conventional radiography to assess the outcome of oncologic skeletal reconstructions of lower limbs aided by vascularized fibular autograft

IntroductionVascularized fibular autografts (VFA) are used in the oncologic skeletal reconstructions of long bones, alone or combined with massive bone allografts (MBA). Data regarding the role of imaging in assessing these complex skeletal reconstructions are lacking, and have mainly focused on Computed Tomography (CT). Our aim was to evaluate if early conventional radiography (CR) findings are correlated with the outcome of these skeletal reconstructions.Materials and methodsAll consecutive patients who underwent oncologic resection of lower limbs long bones followed by VFA reconstruction were included in this single-center retrospective study. We compared the CR obtained immediately after surgery with the CR at the 6-month control, as well as the CR at 6 months with the CT at 6 months when available. The following scores were assigned to the VFA: 0 (unchanged), 1 (osteopenia-cortical bone thinning), 2 (increase in bone density-cortical thickening). We then investigated whether this score correlated with the implant outcome within 12 months (optimal integration, suboptimal integration, integration requiring further surgery or lack of integration) using Kaplan-Meier and Cox regression analyses, considering the occurrence of integration and the duration time before the surgical removal of the whole bone reconstruction.ResultsForty-five patients were included (32 men [71.1%], mean age 14.6 years), 26 affected by osteosarcoma, 14 by Ewing sarcoma, 3 by adamantinoma and 2 operated for the failure of previous reconstructions for bone sarcoma. VFA changes on 6-month CR were significantly associated with optimal integration of the implants (log-rank P = 0.0137, multivariate Hazard ratio = 7.62, 95% confidence interval = 1.13–51.25). None of the other clinical and surgical features were associated with the implant outcome. The findings on 6-month CR and CT follow-up were not significantly different. CT at 6 months was available in 36 patients (80.0%).ConclusionThe assessment of VFA morphological changes on CR performed at 6 months can predict the outcome of the skeletal implant. This data should be considered for clinical decision-making, selecting patients requiring additional images (CT), and possible subsequent revision surgical procedures.     

相变高分子微球增效高强度聚焦超声消融裸鼠骨肉瘤

目的制备相变高分子微球,观察其增效高强度聚焦超声(HIFU)消融裸鼠骨肉瘤模型的效果。方法制备包裹液态氟碳的高分子微球,检测其形态、结构、粒径电位及相变条件;建立裸鼠骨肉瘤模型,随机分为空白组(不予处理)、对照组(注射生理盐水)和实验组1、2、3(注射稀释倍数分别为5、10、20倍的Pct-MP溶液),处理后立即用海级星对肿瘤进行辐照。于辐照后即刻和72h提取标本并观察坏死面积、行HE染色,并对72h提取的标本的坏死周边组织进行细胞增殖和凋亡测定。结果成功制备相变高分子微球;HIFU辐照后即刻提取的标本,实验组1、2的坏死面积与对照组差异均有统计学意义(P均0.05),但与实验组3的差异无统计学意义(P0.05);72h后提取的标本,实验组1、2的坏死面积进一步扩大、与辐照后即刻提取的标本的差异有统计学意义(P均0.05)。HIFU辐照72h后,实验组1、2、3与对照组间坏死周边组织的凋亡和增殖指数差异均有统计学意义(P均0.05)。结论在骨肉瘤裸鼠模型中,自制相变高分子微球能够增强HIFU对于骨肉瘤的消融效果,增强作用与微球浓度有关。     

Ezrin shRNA联合HSP70对骨肉瘤细胞凋亡和增殖的影响

 目的 探讨Ezrin基因沉默联合热休克蛋白（heat shock protein, HSP）70诱导的免疫杀伤对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用人成骨肉瘤MG63细胞系作为研究对象,将人HSP70和Ezrin-shRNA的DNA片段分别克隆至含CMV和pU6双启动子的表达载体pGFP-V-RS中构建含HSP70和Ezrin-shRNA的真核表达载体pGFP-V-RS-shRNA和pGFP-V-RS-shRNA-HSP70。重组质粒分别转染入细胞,筛选出稳定表达的细胞克隆。荧光显微镜观察细胞形态及转染效果;荧光定量RT-PCR及蛋白印迹western blot检测稳定转染细胞株Ezrin和HSP70基因及蛋白水平的变化;采用MTT、流式细胞术检测细胞增殖、凋亡能力变化,Western blot检测凋亡及周期相关蛋白表达量变化;MTT法检测HSP70刺激产生特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对靶肿瘤细胞的杀伤作用。结果 荧光图像及基因和蛋白表达分析证实,首次成功构建同时沉默Ezrin和过表达HSP70的特异性载体。较单纯沉默Ezrin,同时过表达HSP70会在一定程度上减弱沉默Ezrin蛋白促进细胞凋亡和抑制增殖的效果,但与对照细胞相比,M63细胞凋亡率仍明显上升,自11.01%±0.22%上升至24.28%±0.50%,增殖速度则自395.14%±2.24%减少至310.00%±2.83%。另外,Western blot检测发现Ezrin-shRNA可促进凋亡基因Bax的表达,相反可降低抗凋亡基因Bcl-2和细胞周期蛋白Cyclin D1的表达。而Ezrin-shRNA/HSP70组较Ezrin-shRNA组促Bax表达和降低Bcl-2、细胞周期蛋白Cyclin D1表达有所减弱,但较阴性对照组仍有明显效果。MG63细胞的CTL细胞毒杀伤效应显示各效靶浓度下CT+IL-2+HSP70组的杀伤活性高于CT+IL-2组,最高达56.33%±1.95%。结论 同时沉默Ezrin、过表达HSP70既可以促进骨肉瘤细胞凋亡抑制其增殖,并利用HSP70诱导的CTL,增强对靶肿瘤细胞的杀伤作用。     

儿童股骨远端骨肉瘤保留骨骺的定制肿瘤型假体重建术

 目的 介绍儿童股骨远端骨肉瘤保留骨骺的定制肿瘤型假体重建术,并探讨其工作原理、手术操作技巧、早期临床疗效以及并发症的防治。方法 2012年8月至2013年7月期间,应用肿瘤瘤段骨切除、保留骨骺的定制肿瘤型假体重建术治疗股骨远端骨肉瘤的儿童患者3例,均为男性,年龄8岁、9岁和15岁。术前给予新辅助化疗1~2周期,化疗结束后根据X线、CT 和MR等检查结果评价化疗疗效,对于化疗效果好且符合保留骨骺手术条件者采用此术式治疗。首先通过CT、MRI确定病变范围,根据影像学检查结果利用计算机辅助定制保留骨骺的肿瘤型假体以及模具,待假体定制完毕后行肿瘤瘤段骨切除、保留骨骺的定制肿瘤型假体重建术,术后指导患者进行功能锻炼,切口愈合1周后给予术后的规范化化疗,并进行长期随访。 结果 3例患者手术时间分别为3 h、4 h和6 h,术中出血量分别为300 ml、500 ml和2 200 ml。对3例患者术后随访时间 为12~24个月,根据美国骨肿瘤学会评分系统（Musculoskeletal Tumor Society,MSTS）,术后3个月功能评分分别为24分、26分和13分,短期随访显示患者肢体功能良好。1例患者出现假体感染,经保守治疗（抗炎补液、切口换药等）无效后行大腿截肢术,余2例患者未出现假体松动等其他并发症。2例患者双下肢长度相差均< 2 cm。结论 通过严格掌握保留骨骺保肢手术的适应证,配合术前及术后的新辅助化疗,保留骨骺的定制肿瘤型假体重建术为儿童股骨远端骨肉瘤的保肢治疗提供了新的选择方案,其疗效安全、可靠,且具有手术操作简单、手术时间短、术后恢复快等优点,但长期疗效尚需进一步观察。     

双氢青蒿素对人骨肉瘤细胞TE85细胞内尿激酶型纤溶酶原激活物和色素上皮衍生因子表达的影响

目的 观察双氢青蒿素(DHA)对人骨肉瘤细胞活性、转移能力以及细胞中尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)和色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响.方法 将不同浓度的DHA(5、10、20、40、80 μmol/L)作用于体外培养的正常人成骨细胞和人骨肉瘤细胞TE85 12、24、48 h后,噻唑蓝(MTT)法测定DHA对细胞活性的影响,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞中uPA和PEDF mRNA水平的表达,Westen blot法检测uPA和PEDF蛋白水平的表达.结果 DHA对人成骨细胞活性无明显影响(P＞0.05).DHA能够明显抑制人骨肉瘤细胞TE85的活性(P＜0.05).不同作用时间下DHA对人骨肉瘤细胞TE85的半数抑制浓度(IC50)分别为(12 h)=(41.66±0.53) μmol/L、IC50(24 h)=(32.28 ±0.27)μmol/L和IC50 (48 h)=(22.53±1.26) μmol/L.DHA能够明显减少人骨肉瘤细胞的迁移和细胞中uPA的表达水平,同时细胞中PEDF表达升高(P＜0.05).结论 DHA对正常人体骨组织无害,能够有效抑制骨肉瘤细胞生长和转移.