热带病研究新进展

一种新型抗疟原虫药物已经被报道 ,代号Ｇ2 5的这种药物可以阻止红内期的疟原虫构建它的细胞壁。在体外和猴 (Ｏｗｌｍｏｎｋｅｙｓ)体内的实验显示它和奎宁相比有显著的活性和相对低的毒性[1] 。第一个对自然感染的恶性疟原虫有明显保护作用的红细胞前期疫苗是ＲＴＳ ,Ｓ。据报道在冈比亚 ,该疫苗与新型佐剂ＡＳＯ2合用 ,对那些免疫不完全的恶性疟原虫感染者部分有效。保护作用是部分而且短时的 ,但是这种疫苗在低度流行区域或低传播季节可能具有潜在的应用价值[2 ] 。ＷＨＯ已将Ｃｏａｒｔｅｍ ,一种青蒿素和非青蒿素混合物 (蒿甲醚 / )的…     

运用蛋白质组学技术研究EB病毒诱导鼻咽癌细胞CNE2表达变化的蛋白质

【目的】寻找并鉴定CNE2细胞在EB病毒感染后表达发生变化的功能蛋白质，为阐明该病毒诱导鼻咽上皮细胞发生生物学变化的作用机制提供线索。【方法】分别从EB病毒感染后的CNE2细胞和未经感染的CNE2细胞中抽提总蛋白质，通过双向电泳分离。运用软件比较分析上述两组的蛋白质表达图谱，寻找表达有差异的蛋白质点。从凝胶上切下差异蛋白质点，通过基质辅助激光解吸，离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定。【结果】图像分析显示，EB病毒感染后的CNE2细胞和未经感染的CNE2细胞之间存在一些明显差异的蛋白质点。通过MALDI-TOF-MS成功地鉴定了其中4个蛋白质点，EB病毒感染CNE2细胞后蛋白质GRP78和硫氧还蛋白过氧化物酶1表达上调，蛋白质肌动蛋白胞浆组分2和蛋白酶体。链表达下调。【结论】EB病毒感染鼻咽上皮细胞后引起生物学变化的分子机制可能包括：①诱导细胞大量合成蛋白质以促进增生．同时上调蛋白质GRP78的表达而抗凋亡；②提高细胞内氧化状态而诱导蛋白质硫氧还蛋白过氧化物酶1的表达，并可能通过该蛋白质调控NF-κB和AP-1来影响细胞生长。     

粉尘螨主要变应原Derf1基因的改造与可溶性表达

目的在大肠杆菌中提高粉尘螨1类变应原（Derf1）的可溶性表达。方法用RT-PCR方法扩增得到Derf1的全长序列与成熟肽序列（mDerf1）；以已知DerP5基因的前导序列替换Derf1前导序列和原酶序列，重新构建出rDerf1基因；将上述3个基因分别克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中表达，经Western-blot对三者的表达产物进行分析鉴定。结果Western-blot表明，pGEX-Derf1与pGEX-mDerf1的表达产物分别为分子量约63000与51000的重组蛋白质，重组蛋白质主要存在于细胞裂解液的沉淀中。pGEX-rDerf1大量表达了可溶性目的蛋白质，分子量约53000，并被成功地分离纯化。以上三种表达产物均可被鼠抗GST抗体与螨过敏患者血清特异地识别。结论表达了含Derf1，mDerf1与rDerf1的三种GST融合蛋白质，它们均具免疫反应性，纯化获得了GST-rDerf1融合蛋白质，为后期的诊断及治疗奠定了基础。     

华支睾吸虫ATP合酶B亚基全长基因的生物信息学分析

目的从华支睾吸虫全长cDNA质粒文库中识别ATP合酶B亚基,利用生物信息学方法预测其结构和功能特征,用以指导实验研究。方法利用生物信息学网站的各种在线分析工具和Vector NT Isuite软件包,识别华支睾吸虫ATP合酶B亚基基因并预测编码蛋白质的各种结构与功能特征,并根据该基因构建种系分子进化树。结果Blastx分析该基因为全长基因,属于ATP合酶B亚基家族,其分子进化树与种系进化过程非常吻合。该基因全长1008bp,编码300个氨基酸,含有线粒体转运肽、两个跨膜区、一个核定位序列和多个磷酸化位点,具有较稳定的理化性质。结论ATP合酶B亚基是一个理想的真核种系进化的分子标志。华支睾吸虫ATP合酶B亚基具有线粒体和细胞核的双重定位序列,提示该蛋白可能在华支睾吸虫的能量代谢途径中发挥独特的调节作用。     

天冬氨酸蛋白酶与寄生虫

寄生虫来源的天冬氨酸蛋白酶是一种重要的蛋白水解酶,参与寄生虫的生长发育、入侵与锚定、获取营养、改造宿主环境及免疫逃逸等过程。研究其结构和功能特性不仅有助于揭示寄生虫的致病机理,亦能促进以天冬氨酸蛋白酶作为靶点的抗寄生虫药物及疫苗的研发。本文就寄生虫来源的天冬氨酸蛋白酶的种类、结构和功能作一综述。     

重组日本血吸虫亲环素A的原核表达及免疫保护作用的研究

目的 克隆、表达日本血吸虫亲环素A(SjCyPA)基因,并对重组蛋白的免疫保护效果进行实验室评价.方法 构建pET28-SjCyPA重组质粒,转化感受态大肠杆菌BL21/DE3.用IPTG诱导表达,经亲和层析纯化目的蛋白.用PBS、rSjCyPA分别免疫小鼠后进行日本血吸虫尾蚴攻击感染,观察其免疫保护效果.结果 成功表达了可溶性SjCyPA蛋白并得到纯化,经Western blot鉴定为血吸虫蛋白.rSjCyPA免疫小鼠产生60.10％的减虫率和43.42％的减卵率,HE染色及Masson染色揭示实验组肝脏虫卵肉芽肿及纤维化明显减轻.结论 rSjCyPA具有较好的抗血吸虫感染和抗血吸虫病的作用,是一个有前景的血吸虫疫苗候选分子.     

基础医学导读作为通识课程的教学理念与教学实践

基础医学导读作为中山大学的通识课程,经过3年的教学实践,逐步形成了包括3个模块的课程体系:基础医学框架和健康维护知识学习、医学思辨能力培养以及公共卫生健康问题讨论。随着课程体系和教学方式的不断优化,从最初主要是推介医学科普知识到通识教育的理念愈来愈得以体现,初步表明将基础医学纳入高校通识教育是一种有益且有效的尝试。     

刚地弓形虫MIC8 CTD作用蛋白的筛选及鉴定

目的从刚地弓形虫速殖子裂解液中筛选并鉴定微线体蛋白8羧基端胞质尾(MIC8CTD)的作用蛋白。方法分别以GST-MIC8CTD蛋白和GST蛋白(对照)作为探针蛋白,采用GST pull-down技术从弓形虫裂解液中筛选目标蛋白并进行SDS-PAGE分析;将目标蛋白转印至PVDF膜,测序,通过BLAST2在线对比搜索相似蛋白序列,初步确定目标蛋白;以目标蛋白抗体为一抗进行Western blot,分析GST pull-down产物与目标蛋白抗体的相互作用;分别用GSTMIC8CTD多克隆抗体和兔免疫前血清结合的sepharose与弓形虫裂解液进行免疫共沉淀试验,沉淀物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果 PAGE显示GST-MIC8CTD蛋白的pull-down产物中有一蛋白条带(分子质量单位约35~45ku),GST蛋白的pull-down产物中无此蛋白;BLAST2比对目标蛋白的氨基酸序列与弓形虫醛缩酶序列一致;ECM检测GST-MIC8CTD多克隆抗体的免疫共沉淀产物中有蛋白组分可被相应的抗体识别,免疫前血清的免疫共沉淀产物中无可被识别的蛋白。结论经GST pull-down技术和免疫共沉淀试验筛选、鉴定,弓形虫MIC8CTD的作用蛋白为醛缩酶。     

广州管圆线虫Ⅳ期幼虫cDNA文库的筛选及EST序列分析

目的 筛选和鉴定广州管圆线虫未知基因序列,丰富该虫的基因序列数据,为寻找诊断或药物靶点分子提供实验依据.方法 构建广州管圆线虫Ⅳ期幼虫cDNA噬菌体文库,随机挑选单个噬菌斑,提取噬菌体DNA进行PCR,扩增其插入的cDNA片段并对PCR产物进行序列测定;采用生物信息学方法对表达序列标签(expressed sequence tags,EST)序列进行分析.结果 获得了51条广州管圆线虫基因的EST序列,并提交至GenBank,这些基因包括半乳糖凝集素10,半乳糖凝集素140,表皮蛋白,CRE-RPS-24蛋白等.序列分析结果提示,表皮蛋白和CRE-RPS-24蛋白可能为具有诊断价值的抗原分子,值得进一步研究.结论 获得51条广州管圆线虫基因序列,为进一步研究广州管圆线虫致病机制及候选抗原分子提供了新的序列信息.     

寄生虫感染中髓系抑制性细胞的免疫抑制机制研究

髓系抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSC)是髓系来源的一群异质细胞,具有强大的免疫抑制功能.在病理情况下可大量扩增,包括各种感染、肿瘤和急慢性炎症等.在肿瘤模型和肿瘤患者体内均发现有MDSC,其促进肿瘤免疫逃避的机制已取得很大进展.寄生虫感染一般都伴随免疫逃避和显著抑制机体免疫应答的现象,而目前较少关注MDSC在寄生虫感染中的免疫抑制功能.该文综述了一些种类的原虫和蠕虫感染中,MDSC的扩增、活化、趋化、表型和功能.