探针ASPCR检测肺炎支原体 微量耐药突变A2063G方法的建立

[摘要]　目的　 建立能够特异性检测微量肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae, MP）A2063G耐药突变基因的特异性扩增等位基因的探针法实时定量PCR（probe-based allele-specific real-time PCR, 探针ASPCR）方法。方法?建立特异性检测A2063G耐药突变位点的探针ASPCR方法,并验证其灵敏度、特异度及准确度等性能。结果?特异性扩增2063G和非特异性扩增2063A/G的引物/探针组合分别扩增105拷贝野生基因型（2063A）模板的Ct值的差(△Ct)高达10.93,能够特异性检测A2063G突变。探针ASPCR方法检测2063G基因型占总MP的比例的准确度可低至1％;检测MP的灵敏度低至10拷贝,检测A2063G耐药突变比例的灵敏度低至0.01％。探针ASPCR方法与前期建立的染料ASPCR方法检测临床样本的MP感染结果一致,MP阳性检出率均为94.83%（55/58）,高于传统巣式PCR联合测序方法的检测结果（75.86%,44/58）;探针ASPCR和染料ASPCR 2种方法检测MP耐药率分别为63.64%（35/55）、70.91%（39/55）,高于传统巣式PCR联合测序方法检测结果59.09%（26/44）。结论?新建探针ASPCR方法是一种具有高特异度、准确度和灵敏度的快速检测MP微量A2063G耐药突变的方法;与染料ASPCR方法相比,探针ASPCR方法检测耐药MP的灵敏度略低,但其临床样本检测复查率也低于染料ASPCR方法,且其结果判读简单,更适合在临床中应用推广,能够为临床制定MP及耐药MP感染的治疗方案提供理论依据。     

肺炎支原体感染认识新进展

肺炎支原体在各个年龄段都是明确的呼吸道致病菌,它通过极样黏附细胞器吸附在宿主细胞表面,产生过氧化物离子和可能的外毒素,甚至可能直接入侵宿主细胞导致潜伏感染。诱发的免疫反应性损伤也是肺炎支原体引起临床症状的主要因素之一。肺炎支原体诊断最好结合PCR和血清学检测,而且鼻咽和口咽标本同时取材进行PCR检测,不同病程2次血清学检测能获得最可靠的诊断依据,培养方法对于肺外支原体感染和体外药物敏感试验十分重要。     

前列地尔脂微球载体注射液对糖尿病下肢动脉血管病变的影响

目的观察前列地尔脂微球载体注射液(Lipo-PGE1)对糖尿病下肢动脉血管病变的影响。方法选取哈尔滨医科大学附属第二医院内分泌科2004年10月至2005年6月住院的2型糖尿病下肢动脉血管病变患者36例,采用Lipo-PGE1治疗,观察治疗前后股动脉、腘动脉、胫后动脉和足背动脉的内径和血流量。结果糖尿病下肢动脉血管病变经Lipo-PGE1治疗后,股动脉、腘动脉、胫后动脉和足背动脉内径均增加,胫后动脉和足背动脉内径在治疗前后差异有显著性意义(P<0.05及P<0.01)。股动脉、腘动脉、胫后动脉和足背动脉血流量在治疗后均增加,但差异无显著性意义。经Lipo-PGE1治疗后,36例受试者均自我感觉行走有力,有间歇性跛行的18例患者无瘤行走距离和最大耐受行走距离均明显增加。结论Lipo-PGE1对糖尿病下肢动脉血管病变具有肯定的治疗作用。其可以扩张股动脉、腘动脉、胫后动脉和足背动脉的内径,增加其血流量,但是其最主要的靶向部位在胫后动脉和足背动脉,扩张这些较小的肢端动脉,可有效改善症状。     

胃螺旋CT扫描技术探讨

目的研究比较不同充填剂与不同扫描体位在胃的螺旋CT扫描中的应用。方法分别对80例胃病患者采用不同的充填剂（水和低浓度泛影葡胺），与不同的体位（单体位和双体位），进行螺旋CT扫描，评价不同的充填剂与不同体位的优缺点。结果水作为充填剂组病灶显示情况明显优于低浓度泛影萄胺组且伪影少，选择双体位组的图像质量也明显优于常规体位组。结论胃螺旋CT扫描时应首选水作为充填剂，根据病变需要选择双体位，有利于图像质量的提高，从而提高临床诊断率。     

有关阻塞性睡眠呼吸暂停综合征认知度10年对比调查

目的了解目前睡眠中打鼾患者对阻塞性睡眠呼吸暂停综合征的认知程度。方法对前来进行睡眠呼吸监测的患者进行问卷调查,并将调查结果与10年前调查结果进行比较,观察认知度是否有所改变。结果数据显示目前患者对阻塞性睡眠呼吸暂停综合征的认识程度在认识睡眠呼吸暂停综合征及需要治疗方面较10年前有显著变化,但认知度仍较低,相关知识仍旧缺乏。结论阻塞性睡眠呼吸暂停综合征是一种常见的睡眠呼吸疾病,对人体危害极大,而目前人群对此病认识不足。因此,应加强对睡眠呼吸暂停综合征的健康宣教,提高知晓率,降低心脑血管病的发病率。     

肾动脉纤维肌性发育不良的介入治疗与护理

目的探讨肾动脉纤维肌性发育不良行经皮腔内肾动脉成形术的护理方法。方法对我院收治的20例纤维肌性发育不良患者资料进行护理分析，总结介入治疗护理、预防并发症的经验。结果20例患者介入治疗后血压明显改善，部分患者停用口服降压药物或药物减量，血压维持在正常水平，减少了对重要脏器的损害。介入术后无一例并发症发生。结论经皮腔内肾动脉成形术是治疗肾动脉纤维肌性发育不良的有效手段，介入治疗前后采取完善有效的护理措施是介入治疗成功的关键。     

宫颈炎239例分泌物支原体检测及抗生素敏感性分析

目的对门诊宫颈炎患者解脲脲原体(解脲支原体)和人型支原体(人型支原体)进行分析,了解抗生素敏感情况,为临床诊疗提供实验依据。方法无菌采集宫颈炎患者的宫颈分泌物,支原体相关试剂盒进行支原体的培养、鉴定和药物敏感试验。结果支原体总检出率为47.3%。解脲支原体检出率为33.10%,解脲支原体合并人型支原体检出率为13.0%,人型支原体检出率为1.3%。79例单纯解脲支原体株体外抗生素敏感性显示:对四环素族多西环素97.5%,美满霉素97.4%高度敏感;对大环内酯类敏感性不一:克拉霉素94.9%,阿奇霉素75.9%,交沙霉素96.2%,红霉素44.3%,罗红霉素32.9%;对喹诺酮类如加替沙星89.9%较敏感,而对左氧氟沙星,司帕沙星敏感性差;对克林霉素和甲砜霉素不敏感;3例人型支原体的抗生素敏感性为对四环素族多西环素、美满霉素100%敏感,对交沙霉素和克林霉素100%敏感,31例解脲支原体合并人型支原体的抗生素敏感性分别为:美满霉素83.9%,多西环素87.1%,交沙霉素83.9%,加替沙星35.5%,对司帕沙星、左氧氟沙星、司帕沙星、阿奇霉素、红霉素、克拉霉素,罗红霉素、克林霉素敏感性低。结论宫颈炎患者中支原体检出率较高,其中单纯解脲支原体检出率较解脲支原体、人型支原体混合阳性率高,对四环素类、大环内酯类族中的多数抗生素敏感,治疗选择余地大。解脲支原体、人型支原体混合敏感性抗生素种类少,可选择四环素类或大环内酯类抗生素治疗。     

内皮祖细胞移植对糖尿病兔下肢缺血区血管生成相关基因表达的影响

目的研究内皮祖细胞（EPC）移植治疗糖尿病兔下肢缺血对血管生成相关基因表达的影响。方法日本大耳白兔16只，四氧嘧啶法建立糖尿病模型后，随机分为磷酸盐缓冲液（PBS）对照组与EPC治疗组，分别用PBS和骨髓来源经体外扩增的EPC移植于下肢缺血区，14天后用基因芯片分析EPC移植对血管生成相关基因表达的影响，同时检测肌浆中血管内皮生长因子（VEGF）浓度。结果EPC治疗组下肢缺血区27个血管生成基因表达上调超过2倍，移植治疗组VEGF的浓度显著高于对照组，差异有统计学意义。结论EPC植入糖尿病兔下肢缺血区，可以上调包括VEGF在内的多种血管生成相关基因，同时肌浆中VEGF水平升高。     

脑囊尾蚴病脑脊液差异凝胶电泳方法的建立

目的建立脑脊液差异凝胶电泳方法,以获得高分辨率的荧光差异双向电泳图谱。方法取确诊的4例脑囊尾蚴病患者脑脊液和4位健康人脑脊液,分别用冰丙酮沉淀法除盐提取蛋白,均等量混合后为脑囊尾蚴病组与健康人对照组,两组总蛋白等量混合为内标组。将各组蛋白分别经花青染料2（Cy2）、Cy3和Cy5标记,再进行单向十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和双向差异凝胶电泳（2-DDIGE）,分别在波长488nm、532nm和633nm激发光下扫描,所呈图像分别用ImageQuant和DeCyder 5.0图像分析软件进行蛋白表达差异分析。用DeCyder中的胶内差异分析（DIA）模块对2-DDIGE扫描图像进行蛋白质点检测和含量分析。用DeCyder中的生物学差异分析（BVA）模块分析两组蛋白表达的生物学差异。结果ImageQuant分析结果表明,所有脑脊液全蛋白样品均能被Cy2、Cy3和Cy5标记,荧光强度随蛋白含量的上升而增强。DIA分析显示,胶1和胶2分别检测到896和894个蛋白质点。胶2与胶1进行匹配,蛋白质点匹配率达90%。BVA分析发现,在脑囊尾蚴病组与健康人组脑脊液蛋白共有表达量变化超过两倍的差异蛋白质点55个,其中在脑囊尾蚴病组中表达上调2倍的有47个蛋白质点,下调2倍以上的有8个蛋白质点。结论以脑囊尾蚴病患者脑脊液建立的差异凝胶电泳方法,获得的2-DDIGE图谱,图像清晰,分辨率高,为脑囊尾蚴病蛋白质组学研究奠定了基础。     

人型支原体液体培养中pH与活菌浓度关系研究

目的探讨入型支原体液体培养过程中,培养时间、培养基pH与菌浓度的关系,研究人型支原体液体培养时的生长规律。方法用精密pH计定时测定人型支原体培养过程中培养基pH值,同时观察培养基颜色变化;采H{微量法测定菌浓度,每3h测定一次,连续测定48h。结果不同浓度的人型支原体在液体培养时呈现相同的生长规律,有类似于细菌的牛长曲线,最大菌体浓度（CCU）10^6／ml;人型支原体生长与培养基pH相关,pH6．8时,菌体活性最高．培养是呈橙红色;pHi〉7．0时,菌体活性逐渐下降,pH7．2时,培养基旱深红色,不冉发生明显的颜色改变,人型芰味体活菌量迅速降低。结论人型支原体液体培养基培养时,培养基pH6．8、液体颜色橙红时,可扶取较佳生长活性的高菌含量培养物。