自发性高血压大鼠心脏成纤维细胞生物活性的变化

目的观察基础状态下成年高血压大鼠（SHR）心肌成纤维细胞（CFs）的吸光值、增殖细胞核抗原（PCNA）表达、3H-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）及3H-脯氨酸掺入法（3H-Proline）掺入量和NO含量的变化。方法胰酶消化法分离、培养大鼠CFs,分别用改良的MTT比色法、免疫组化法3、H-TdR掺入法观察CFs的增殖状况,用3H-Proline观察CFs的胶原合成情况,用硝酸还原酶法检测CFs培养液中的NO含量。结果培养72 h,SHR组与正常血压组比较,CFs吸光值、PCNA表达3、H-TdR及3H-Proline掺入量增高具有非常显著意义（P<0.01）,NO含量降低也具有非常显著意义（P<0.01）。结论CFs在维持基质间隙中起着关键作用,其增殖、胶原合成以及NO含量的异常都可以导致左心室肥厚的产生和发展。     

卡维地洛对高血压大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的抑制作用

目的 :探讨卡维地洛、比索洛尔、哌唑嗪对培养的 SHR和 Wistar大鼠心脏成纤维细胞 （ CFs）胶原合成的影响。方法 :采用胰酶消化法培养 CFs,用3 H-脯氨酸掺入法分别观察卡维地洛、比索洛尔、哌唑嗪干预下两组大鼠 CFs胶原合成的情况。结果 :1各种浓度的卡维地洛 （ 0 .0 1～ 10μmol/ L ）可以浓度依赖的方式抑制 CFs 3 H-脯氨酸掺入量 ,与 Wistar大鼠组相比 ,SHR组 CFs受抑制的效应更强。2同等浓度比索洛尔对两组大鼠 CFs3 H-脯氨酸掺入量表现出轻度抑制。 3同等浓度哌唑嗪对两组大鼠 CFs3 H-脯氨酸掺入量均无明显影响。结论 :卡维地洛呈浓度依赖性抑制 CFs合成胶原 ,其作用机制部分与阻滞β1 受体有关。     

卡维地洛、比索洛尔、哌唑嗪对SHR心肌成纤维细胞增殖作用的对比研究

目的观察卡维地洛(carvedilol)、比索洛尔(bisoprolol)、哌唑嗪(prazosin)对培养的SHR和Wistar大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖的影响.方法采用胰酶消化法培养CFs,用 3H-TdR法、MTT比色法分别观察carvedilol、bisolol、prazosin干预下CFs的增殖情况.结果 SHR、Wistar大鼠CFs 3H-TdR掺入及OD值随carvedilol浓度的增加而减低,呈剂量和时间依赖性.10-5 mol /L carvedilol分别干预SHR和Wistar大鼠CFs 72 h其 3H-TdR掺入分别减低52.1%和47.5%,OD值分别减低41.5% 和 35.3%, bisolol(10-8 mol/L～10-5mol/L )和prazosin(10-8 mol/L～10-5 mol/L)则无此作用.结论 Carvedilol抑制心肌成纤维细胞增殖,并呈浓度及时间依赖性,高血压时,CFs对Carvedilol更为敏感.而Bisoprolol和Prazosin则对CFs细胞增殖无影响.     

卡维地洛、比索洛尔、哌唑嗪对SHR心肌成纤维细胞增殖作用的对比研究

目的 观察卡维地洛(carvedilol)、比索洛尔(bisoprolol)、哌唑嗪(prazosin)对培养的SHR和Wistar大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖的影响。方法 采用胰酶消化法培养CFs，用^3H—TdR法、MTT比色法分别观察carvedilol、bisolol、prazosin干预下CFs的增殖情况。结果 SHR、Wistar大鼠CFs^3H-TdR掺入及OD值随carvedilol浓度的增加而减低，呈剂量和时间依赖性。10^-5mo1／L carvedilol分别干预SHR和Wistar大鼠CFs72h其h其^H-TdR掺入分别减低52．1％和47．5％，OD值分别减低41．5％和35．3％，bisolol(10^-8mo1／L一10^-5mol／L)和przosin(10^-8mol／L一10^-5mol／L)则无此作用。结论 Carvedilol抑制心肌成纤维细胞增殖，并呈浓度及时间依赖性，高血压时，CFs对Carvedilol更为敏感。而Bisoprolol和Prazosin则对CFs细胞增殖无影响。     

DnaJ类分子伴侣PBP基因的原核表达及兔抗PBP抗体的制备

目的:在原核系统中表达DnaJ类分子伴侣感光受体外周蛋白结合蛋白(PBP)基因,并制备兔抗PBP的抗体鉴定其特性。方法:应用RTPCR从人胎脑组织总RNA中扩增PBPcDNA。测序后将其克隆到表达载体pET28a中,并在大肠杆菌中以IPTG诱导表达。表达产物经NiNTA亲和层析柱纯化后,用SDSPAGE进行鉴定。以所获纯化的PBP免疫新西兰白兔,制备兔抗PBP抗体。抗体的效价及特异性用Westernblot进行测定和分析。结果:扩增和克隆出了720bp的PBP基因。构建的重组质粒pET28aPBP在大肠杆菌中得到高表达,诱导表达的蛋白存在于包涵体和细菌裂解上清中,纯化的PBP经SDSPAGE鉴定呈单一条带。以纯化的PBP免疫兔,制备了兔抗PBP抗体。Westernblot鉴定证实,该抗体可与原核表达的PBP特异性结合,抗体效价为1∶1600。结论:在原核细胞中表达了具有生物学活性的PBP,并以其为免疫原制备了兔抗PBP的抗体,为进一步研究PBP的结构与生物学活性奠定了基础。     

牛肾上腺毛细血管内皮细胞的长期培养及生物学特性

目的：建立肾上腺毛细血管内皮细胞的长期培养的方法。方法：无菌取出新生牛肾上腺进行长期培养,观察生物学特性。结果：牛肾上腺毛细血管内皮细胞内皮细胞在加入肿瘤条件培养基及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)培养液中,能够长期培养至31代,不同代次细胞r-谷氨酰胺转酶（GGT）,碱性磷酸酶（AKP）等生化指标稳定。结论：在含肿瘤条件培养基及bFGF培养液中能够长期培养牛肾上腺毛细血管内皮细胞。     

人内皮抑素克隆表达及对血管内皮细胞生长的抑制作用

目的　获得具有抑制血管内皮细胞生长活性的重组人内皮抑素 (recombinanthumanen dostatin)。方法　从肝细胞中分离总RNA ,经反转录多聚酶链反应 (RT PCR)得到endostatin全基因。用原核细胞表达载体构建了pBV2 2 0 /endostatin重组质粒 ,经DNA测序确认后 ,将其转化大肠杆菌DH5α进行表达、初步纯化及活性测定。结果　经SDS PAGE分析 ,表达产物相对分子质量 (Mr)约 2 0× 10 3,薄层扫描显示表达产物可达细菌总蛋白的 30 %。结论　经生物学活性测定 ,表达蛋白能够抑制碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对牛毛细血管内皮细胞 (BCEC)的增殖作用     

DnaJ类分子伴侣PBP的基因克隆及亚细胞定位研究

目的:从人骨骼肌cDNA文库中,分离、鉴定视网膜感光受体外周蛋白的结合蛋白(PBP)-DnaJ(HSP40)类分子伴侣,并初步分析其在转染的哺乳动物细胞中的表达及分布。方法:以33p-dCTP标记探针杂交筛选人骨骼肌cDNA文库,对阳性克隆进行序列分析,并以脂质体介导转染哺乳动物细胞,用免疫印迹及间接免疫荧光染色法检测目的蛋白的表达。结果:筛选出全长pbp基因,经与GenBank中的序列比较分析证实,与DnaJ家族的1个成员-mrj(1.5 kb)的序列相同,且含140 bp左右富含GC的非编码区上游序列。在COS-7细胞 中瞬时表达的PBP,大多呈典型的胞浆分布,而J-domain缺失的pbp片段多为胞核分布。而在CHO细胞中稳定表达的PBP,在处于不同细胞周期时相的细胞中的分布不同。结论:DnaJ除与HSP70(DnaK)协同发挥重要功能外,其本身作为分子伴侣也可能发挥着重要作用,且与细胞周期可能存在某种密切联系。     

感光受体外周蛋白结合蛋白对虫荧光素酶体外折叠的促进作用

目的 探讨感光受体外周蛋白结合蛋白(PBP)在体外是否有促进变性蛋白质复性的作用。虫荧光素酶用盐酸胍变性,然后在PBP、HSP70、HSP60存在下进行体外复性，用虫荧光素酶分析系统检测该酶的复性程度。结果显示PBP对虫荧光素酶的复性能力很低，当与HSP70同时作用时，酶活力明显高于PBP或HSP70组，而PBP与HSP60组合对酶的复性能力较HSP60组未见有明显差异；当PBP，HSP70，HSP60三同时存在时，酶活力恢复率最高。去除复性缓冲液中的ATP及其再生系统，酶活力的复性率明显下降。结果表明PBP具有协助HSP70，在ATP依赖的情况下促进变性虫荧光素酶体外复性的分子伴侣功能。     

飞行员血管紧张素转换酶基因插入/缺失多态性及其血清水平的研究

目的了解飞行员血管紧张素转换酶(ACE)基因插入/缺失（I/D）多态性及其血清水平,探讨ACE基因多态性与飞行员耐力可能的关系。方法飞行员118例,健康对照者96例,用聚合酶链反应（PCR）扩增技术检测ACE基因I/D多态性,用比色法测定血清ACE水平。结果位于ACE基因第16内含子的I/D多态性经PCR扩增后呈三种基因型纯合子插入型（II）、纯合子缺失型（DD）和杂合子插入/缺失型（I/D）。飞行员组II基因型（44.07%）和Ⅰ等位基因频率（0.65）显著高于健康对照组(分别为31.25%和0.52)。ACE基因多态性与血清ACE水平明显相关(DD>ID,DD>II)。结论ACEⅠ基因有可能在飞行员的飞行耐力中起重要作用。