β极低密度脂蛋白经细胞外信号调节激酶信号途径诱导其受体表达上调

为探讨β极低密度脂蛋白诱导极低密度脂蛋白受体表达上调的信号转导途径及其对巨噬细胞胞内脂质堆积的影响，采用Westem Blot方法检测β极低密度脂蛋白温育后巨噬细胞内的细胞外信号调节激酶活性，在体外培养的巨噬细胞中加入不同信号途径关键激酶的抑制剂，观察各信号途径对受体调控的阻断效应，测定胞内胆固醇和甘油三酯的含量，观察泡沫细胞的形成。结果发现，β极低密度脂蛋白以蛋白激酶C依赖的方式激活巨噬细胞中的细胞外信号调节激酶1／2活性。细胞外信号调节激酶1／2抑制剂和蛋白激酶C抑制剂可显著阻断β极低密度脂蛋白诱导巨噬细胞极低密度脂蛋白受体转录的效应，而P38抑制剂和蛋白激酶C激动剂对G极低密度脂蛋白诱导极低密度脂蛋白受体表达上调无明显影响。细胞外信号调节激酶1／2抑制剂可抑制β极低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞内胆固醇和甘油三酯含量升高。上述结果表明，蛋白激酶C依赖的细胞外信号调节激酶1／2信号级联可能是介导8极低密度脂蛋白诱导极低密度脂蛋白受体表达上调的主要信号转导途径，特异地抑制此信号途径可抑制β极低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞胞内脂质堆积。     

巨噬细胞氧化修饰极低密度脂蛋白及Cu2+修饰的极低密度脂蛋白对单核细胞与内皮细胞粘附的影响

极低密度脂蛋白(VLDL)与小鼠腹腔巨噬细胞温育24小时和48小时后,其硫代巴比妥酸反应物质值明显高于无细胞对照组,琼脂糖电泳速度也加快,两者一致。结果说明小鼠腹腔巨噬细胞可以氧化修饰极低密度脂蛋白。VLDL在体外用Cu~(2+)修饰后。硫代巴比妥酸反应物质明显增加,琼脂糖凝股电泳速度加快。比较正常的VLDL(n—VLDL)及Cu~(2+)氧化的VLDL(Ox—VLDL)对内皮细胞粘附单核细胞的影响时,发现在所用各种浓度下,Ox—VLDL单核细胞的粘附率比n—VLDL组大得多(P<0.0001),说明VLDL被氧化后明显增加单核细胞与内皮细胞的粘附。     

甲状腺素对胃腺癌细胞VLDL-R选择性剪接的影响

目的探讨甲状腺素对低分化胃腺癌细胞MKN45细胞中极低密度脂蛋白受体(VLDL-R)选择性剪接的影响。方法在体外,用一定浓度的甲状腺素与MKN45细胞温育不同时间后,采用RT-PCR和Western印迹技术检测两型VLDL-R mRNA和蛋白质的表达水平,以两型受体的比值间接反映甲状腺素对VLDL-R选择性剪接的影响。结果甲状腺素可明显上调两型VLDL-R的表达,Ⅱ型受体与Ⅰ型受体mRNA的比值随时间延长逐渐增大。结论甲状腺素可显著增强VLDL-R的选择性剪接,表现为Ⅱ型受体表达的增高幅度明显大于Ⅰ型受体。     

制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离与纯化豚鼠内耳抗原

粗制内耳抗原 (ｃｒｕｄｅｉｎｎｅｒｅａｒａｎｔｉｇｅｎ ,ＣＩＥＡｇ)广泛用于自身免疫性内耳病 (ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｉｎｎｅｒｅａｒｄｉｓｅａｓｅ ,ＡＩＥＤ)的研究 ,包括建立动物模型和作为抗原检测ＡＩＥＤ患者血清自身抗体[1,2 ] 。但ＣＩＥＡｇ成分复杂 ,其中何种亚组份起关键作用尚不清楚。我们通过制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅｐｏｌｙａｃｒｙ ｌａｍｉｄｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ,简称制备性ＰＡＧＥ)分离纯化豚鼠ＣＩＥＡｇ的主要亚组份 ,为深入研究ＡＩＥＤ的发病机制和寻找内耳特异…     

鸡贫血病毒VP3基因体内抑瘤效应的实验研究

目的 观察鸡贫血病毒（chicken anemia virus,CAV)VP3基因的体风抑瘤效应。方法 分别将PCDNA-VP3（含VP3基因的真核表达载体），PCDNA3（空载体）和小鼠腹水型肝癌细胞株H22混合后，接种于BALB/c小鼠皮下，几天后，处死动物，取肿瘤组织称重，比较试验组和对照组瘤重差异，确定VP3基因的抑瘤效应，TUNEL法鉴定VP3在体内诱导肿瘤细胞死亡的方式。结果 注射VP3基因的试验组肿瘤生长率明显低于注射空载体的对照组。TUNEL试验的结果也表明，鸡贫血病毒VP3蛋白在体内调亡方式诱导肿瘤细胞死亡。结论 预示VP3基因可能在抑制肝癌细胞生长方面有一定的疗效。     

Oxidatively Modified Very Low Density Lipoprotein Enhances Monocyte Adhesion to Endothelial Cells

ＯｘｉｄａｔｉｖｌｙＭｏｄｉｆｉｅｄＶｅｒｙＬｏｗＤｅｎｓｉｔｙＬｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎＥｎｈａｎｃｅｓＭｏｎｏｃｙｔｅＡｄｈｅｓｉｏｎｔｏＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＣｅｌｌｓＦＥＮＧＹｏｕ－ｍｅｉ（冯友梅）；ＺＨＡＮＧＺｈｉ－ｂｉｎｇ（张志兵）；ＷＡＮＧ...     

VLDL-R中配体结合重复序列的结合特性及结构分析

目的 研究VLDL-R中8个配体结合重复序列(1igand-bindingrepeats，LBR)在配体结合中的作用并探讨结合位点的结构。方法采用基因缺失诱变方法，构建不同LBR缺失的VLDL-R重组体。将其分别导人无LDL-R功能性表达的1dl-A7细胞。配体结合实验观察转染细胞与荧光标记的VLDL、β-VLDL的结合能力，并采用同源建模的方法预测受体N-端328个氨基酸的配体结合域的空间结构。结果 配体结合实验显示LBR1和LBR2对受体结合VLDL、pVLDL最为重要；LBR3对结合VLDL也有重要作用，但对结合pVLDL无明显影响。模型显示受体N-端328个氨基酸的配体结合域呈现弧形口袋样结构，前3个LBR结构紧凑，呈棒状，负电荷相对集中，与功能特性吻合，LBR5与LBR6之间的连接区赋予口袋结构一定的伸缩性，适应配体大小的变化。结论 受体N-端的前3个LBR含有与配体结合的位点。该区域特定的空间结构与理化特性是结合功能的重要基础。     

巨噬细胞源性载脂蛋白E在VLDL亚组份代谢中的作用

高甘油三酯（TG）血症患者血中升高的极低密度脂蛋白（VLDL）主要是贫含载脂蛋白E（ApoE）的亚组份。为研究巨噬细胞（MΦ）分泌的ApoE在其代谢VLDL中的作用，将贫含ApoE的VLDL和富含ApoE的VLDL分别与MΦ保温24h，然后测定细胞内脂质和ApoEmRNA含量。结果显示：二种亚组份所引起的MΦ内胆固醇堆积程度相当（P＞0．05）；二种亚组份也均能引起MΦ内ApoEmRNA表达增加，尤以贫含ApoE的VLDL作用显著（P＜0．05）。提示：贫含ApoE的VLDL可能促进MΦ产生更多的ApoE，进而在局部结合更多的ApoE转变为类似富含ApoE的VLDL，通过ApoE介导的受体进入MΦ，使MΦ堆积脂质。由此推测MΦ产生ApoE的功能之一是促进自身对VLDL亚组份的摄取。     

Effects of Oxidized Low Density Lipoprotein on the Expression and Function of ABCA1 in Macrophages

In the present study, we examined the regulation of the expression and function of ABCA1 by modified LDL (ox-LDL) in vitro. After incubation with apoA-I for 24 h, RAW264.7 cells effluxed 37.65 % cholesterol loaded by acetyl LDL (ac-LDL), and 9.78% cholesterol in ox-LDL group. The level of ABCA1 mRNA increased about three times either when cells were incubated with .100 μg/mL ac-LDL or with 100 μg/mL ox-LDL. However, the level of ABCA1 protein rose by 1.57 times in ac-LDL group and 1.26 times in ox-LDL group. These results demonstrated that ox-LDL had different effect on the expression and function of ABCA1, ox-LDL might decrease the cholesterol efflux mediated by ABCA1 through other unknown mechanisms.