高压氧治疗对慢性脑缺血大鼠认知功能的影响及其作用机制

目的 探讨高压氧（hyperbaric oxygen，HBO）治疗对慢性脑缺血（chronic cerebral ischemia，CCI）大鼠 学习记忆能力的影响及其作用机制。 方法 选取240只雄性SD大鼠随机分为假手术组、CCI组和HBO组，每组80只。采用双侧颈总动脉阻 断法建立CCI模型，HBO组建模12 h后开始进行HBO治疗28 d，压力0.2 MPa，每日1次，每次60 mi n。采用 Morri s水迷宫实验评估7、14、21、28 d大鼠的学习记忆能力，每个时间点20只，检测前均进行3 d训练， 记录各组大鼠的逃避潜伏时间、穿越平台次数。28 d后处死大鼠取海马组织进行HE染色评估神经元 损伤病理变化，RT-PCR法检测Nogo-A mRNA，Western blot法检测Nogo-A蛋白的表达水平。 结果 ①与假手术组比较，CCI 组7、14、21、28 d逃避潜伏时间均延长（均P＜0.05），28 d跨越平台次 数减少（P＜0.05）；与CCI 组比较，HBO组7、14、21、28 d逃避潜伏时间均缩短（均P＜0.05），28 d跨越 平台次数增加（P＜0.05）。②HE染色显示HBO组神经元损伤程度较CCI组减轻；③CCI组Nogo-A mRNA 和Nogo-A蛋白表达水平均较假手术组升高（均P＜0.05），HBO组表达水平均较CCI组下降（P＜0.05）。 结论 HBO治疗可改善慢性脑缺血大鼠认知功能，其机制可能与下调海马组织中Nogo-A的表达水平 有关。     

血塞通对 MCAO 大鼠不同恢复时间点Nogo-A 蛋白表达的影响

目的：探讨血塞通冻干粉注射液对大鼠局灶性脑缺血模型不同恢复时间点7d，14d，28d大脑皮层的主要抑制因子Nogo-A表达的影响。方法健康雄性SD大鼠，随机分为手术组和非手术组，手术组采用改良Longa方法建立大脑中动脉阻塞（ MCAO）模型，待大鼠术后清醒2h后，进行EZLonga评分，根据评分和体重随机分为血塞通大剂量组（7．2mg／100g）、小剂量组（3．6mg／100g）、尼莫地平组（1．44mg／100g）、模型组（生理盐水），于手术当日开始给药。待7d，14d，28d时，各组取6～8只动物，迅速取脑，于视交叉处将大脑前后分开，前端脑放入10％的甲醛中固定，48h后用PBS将脑组织洗净，石蜡包埋切片，用免疫组织化学染色方法观察不同时间点Nogo-A的表达变化，分别对梗死区、梗死周边区进行平均光密度分析。结果梗死区随着时间的延长，Nogo-A的表达逐渐减弱，在各时间点内，血塞通组和尼莫地平组Nogo-A的表达高于模型组。梗死周边区，模型组Nogo-A的表达趋势是7 d时已经高表达，14 d达到高峰，28 d比14 d略低，但仍保持较高水平，在各时间点，血塞通组比同时间点内的模型组表达低，与模型组差异显著（P＜0．05）。结论血塞通可以保护大鼠梗死区及梗死周边区的神经细胞，可以下调梗死周边区不同恢复时间点Nogo-A的表达。血塞通可能是通过下调Nogo-A的表达来实现大脑神经功能的重塑重建作用。     

电刺激对海马表达Nogo-A蛋白的影响

目的 探讨慢性电刺激对大鼠海马表达Nogo=A蛋白表达的影响，以了解海马Nogo-A蛋白升高与癫痫发生的因果关系。方法 70只大鼠随机分为5组，即4个电刺激组，1个假电刺激组，分别电刺激1，3，6，9d，对海马进行免疫组织化学染色和蛋白印迹实验，检测海马表达Nogo-A蛋白的情况。结果 假电刺激组14只大鼠行为均无异常；电刺激1d与3d组大鼠亦未发生抽搐；电刺激6d组有3只发生抽搐，电刺激9d组在刺激6d时，有1只发生抽搐，刺激9d时有13只发生抽搐。同时，免疫组织化学实验发现，在电刺激3，6，9d后，海马Nogo-A蛋白表达量与假电刺激组相比均有显著升高（P〈0．05或P〈0．01），其升高趋势呈电刺激时间的依赖性（r=0．775），蛋白印迹实验结果基本相同。结论 海马Nogo-A蛋白表达的量与电刺激的时间呈正相关，而在发生癫痫之前大鼠海马Nogo-A蛋白表达已经升高。     

三维球体间充质干细胞移植对大鼠缺血再灌注损伤脑组织Nogo-A及NgR表达的影响

目的 探讨胎盘来源间充质干细胞移植对脑缺血再灌注后大鼠脑组织Nogo—A及其受体NgR的mRNA及蛋白表达的影响及意义。方法 实验动物随机分为假手术组(Sham组)及模型组,模型组再分为治疗组(MSCs组)以及溶剂对照组(Vehicle组),应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型,缺血2h后拔除鱼线再灌注,1d后MSCs组注射间充质干细胞,Vehicle组注射等量培养基溶液,移植后1d,3d,7d应用RT-PCR法检测mRNA表达水平;Western blot法检测蛋白表达水平。结果 与Vehicle组相比,MSCs组大鼠7d神经运动功能有明显改善(P<0.05);MSCs组1,3,7dmRNA及蛋白水平均较Vehicle组降低(P<0.05)。结论 胎盘间充质干细胞移植可以改善脑缺血再灌注后神经运动功能,其机制可能与下调脑组织Nogo—A及其受体NgR水平有关。     

Impacts of Rho kinase inhibitor Fasudil on Rho/ROCK signaling pathway in rabbits with optic nerve injury

Objective: The aim of this study was to study the impacts of Rho kinase inhibitor Fasudil on expressions of Rho/ROCK signaling pathway associated genes in rabbits with optic nerve injury (ONI), and to explore the therapeutic mechanisms towards ONI. Methods: The rabbit ONI model was established, then the rabbits were divided into model group (treated with saline), control group (treated with dexamethasone, Dex), and intervention group (treated with Fasudil, Fas). The eyeball and optic nerve were sampled at 3, 7, 14 and 21 days after injury. The morphological changes of retina and optic nerve were observed. The expressions of RhoA, Caspase-3, Rock 2 and Nogo-A gene were determined by immunohistochemistry and real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) methods. Results: At different time after injury, there were significant differences of RhoA, Caspase-3, Rock 2 and Nogo-A gene expression among three groups (P < 0.05). Conclusions: After ONI, Fas can decrease the expression of Caspase-3 gene, and down-regulate the expressions of Nogo-A and Rock 2 gene. Therefore, it can treat ONI through affecting the Rho/ROCK signaling pathway.     

Spatiotemporal expression of Nogo-66 receptor after focal cerebral ischemia

NgR, the receptor for the neurite outgrowth inhibitor Nogo-66, plays a critical role in the plasticity and regeneration of the nervous system after injury such as ischemic stroke. In the present study, we used immunohistochemistry to investigate the regional expression of NgR in rat brain following middle cerebral artery occlusion (MCAO). NgR protein expression was not observed in the center of the lesion, but was elevated in the marginal zone compared with control and sham-operated rats. The cerebral cortex and hippocampus (CA1, CA2, and CA3) showed the greatest expression of NgR. Furthermore, NgR expression was higher in the ipsilesional hemisphere than on the control side in the same coronal section. Although time-dependent changes in NgR expression across brain regions had their own characteristics, the overall trend complied with the following rules: NgR expression changes with time showed two peaks and one trough; the ifrst peak in expression appeared between 1 and 3 days after MCAO; expression declined at 5 days; and the second peak occurred at 28 days.     

定量检测神经生长抑制因子及受体在脑梗死大鼠脑组织中的表达

目的观察神经生长抑制因子(Nogo-A)及其受体(NgR)在脑梗死大鼠不同时间点表达的变化规律。方法将80只SD大鼠制成易脑卒中型肾血管性高血压大鼠模型后,随机分为脑梗死组和对照组(各40只),脑梗死组大鼠施行右侧大脑中动脉闭塞术,用免疫组织化学法和荧光定量RT-PCR法检测术后第1、2、4和8周脑梗死灶周围Nogo-A及NgR mRNA表达的变化规律。结果免疫组织化学显示脑梗死组Nogo-A和NgR含量在病灶周围先呈逐渐上升趋势,第4周达到高峰,较对照组显著升高(P<0.05),Nogo-A在第8周降低,与对照组无显著性差异(P>0.05);而NgR略微下降,但仍高于对照组(P<0.01)。荧光定量RT-PCR显示脑梗死组Nogo-A与NgRmRNA表达均先上升,在第4周达到高峰,与对照组差异有显著性意义(P<0.01),第8周Nogo-A mRNA表达下降仍高于对照组(P<0.01);NgR mRNA表达在第8周时与对照组无显著性差异(P>0.05)。结论脑梗死损伤可使梗死灶周围组织中Nogo-A及NgR表达增加,可能与脑梗死后神经再生障碍有关。     

环孢素A对大鼠急性脊髓损伤后Nogo-A表达的影响

目的：探讨急性脊髓损伤后应用环孢素A(CsA)对Nogo-A表达的影响。方法：建立大鼠急性脊髓损伤实验动物模型,将大鼠随机分成单纯椎板切除组（对照组）、脊髓损伤组（损伤组）、脊髓损伤后CsA治疗组（治疗组）,治疗组通过腹腔注射CsA,在术后6、12 h及1、3、7、14 d处死大鼠,取材,取受损节段脊髓行HE染色及免疫...     

神经病理性痛大鼠背根神经节和脊髓背角Nogo-A蛋白表达的变化

目的 评价神经病理性痛大鼠背根神经节和脊髓背角Nogo-A蛋白表达的变化.方法 健康成年雄性SD大鼠72只,体重250～300 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组(n=24):对照组(C组)、假手术组(S组)和神经病理性痛组(NP组).C组不做任何处理,NP组采用结扎并剪断胫神经和腓总神经的方法制备大鼠神经病理性痛模型,S组仅切皮暴露坐骨神经但不结扎和剪断神经.于结扎后1、7、14、21 d时采用yon Frey丝测定大鼠机械痛阈.于各时点随机取6只大鼠处死后取损伤侧L5背根神经节和L4,5脊髓,采用免疫荧光标记法测定Nogo-A蛋白的表达(n=3),采用Westernblot法测定Nogo-A蛋白的表达(n=3).结果 与C组和S组比较,NP组大鼠结扎后7、14、21 d时机械痛阈降低,结扎后7、14 d时背根神经节Nogo-A蛋白表达下调,结扎后14、21 d时脊髓背角Nogo-A蛋白表达上调(P＜0.05).结论 背根神经节及脊髓背角Nogo-A蛋白可能在外周神经损伤诱发大鼠神经病理性痛过程中发挥重要作用.

Abstract：

Objective To investigate the changes in the expression of Nogo-A protein in the dorsal root ganglion (DRG) and spinal dorsal horn in a rat model of neuropathic pain (NP) .Methods Seventy-two male SD rats weighing 250-300 g were randomly divided into 3 groups ( n = 24 each) : control group (group C) , sham operation group (group S) and NP group. NP was induced by ligation and severance of tibial and common fibular nerves according to the technique described by Isabelle et al. The mechanical withdrawal threshold (MWT) to von Frey filament stimulation was measured at 1, 7, 14 and 21 days after ligation. Six rats in each group were randomly selected at each time point and sacrificed (3 for determination of Nogo-A protein expression by immunofluorescence, 3 for determination of Nogo-A protein expression by Western blot) . The L5 DRG and L4,5 segment of spinal cord on the injured side were removed for determination of Nogo-A protein expression by immunofluorescence and Western blot. Results Compared with the groups C and S, MWT was significantly decreased at 7, 14 and 21 days after ligation, the expression of Nogo-A protein in the DRG was down-regulated at 7 and 14 days after ligation and the expression of Nogo-A protein in the spinal dorsal horn was up-regulated at 14 and 21 days after ligation ( P ＜0.05) .Conclusion The Nogo-A protein in the DRG and spinal dorsal horn may play an important role in peripheral nerve injury-induced NP in rats.     

Nogo—A及NgR在墨西哥钝口螈脑组织中的表达及意义

目的探讨勿动蛋白A（Nogo．A）及勿动蛋白受体（NgR）在正常墨西哥钝VI螈及其中脑胆碱能神经元损伤后脑组织中的表达。方法以正常墨西哥钝口螈脑组织和中脑胆碱能神经元损伤后第3、7、14、21天脑组织作为研究对象,采用免疫荧光技术观察正常墨西哥钝口螈脑组织中Nogo—A及NgR的表达;分别用荧光定量PCR和蛋白质印迹法（WB法）检测正常墨西哥钝口螈和损伤组脑组织中Nogo—A及NgR的mRNA含量和蛋白含量的变化。结果正常墨西哥钝口螈脑组织中存在Nogo．A及NgR的表达,在墨西哥钝口螈中脑胆碱能神经元损伤后（注入AF64A）第3天,中脑乙酰胆碱转移酶（CHAT）阳性细胞数明显减少,与正常组比较差异有统计学意义（P〈0．01）,损伤后第7、14、21天均有ChAT、5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）双阳性细胞,且随时间的延长而增加。中脑胆碱能神经元损伤后第3、7、14、21天脑组织中,Nogo．A的mRNA和蛋白水平的表达量与正常组比较差异均无统计学意义;而NgR的mRNA和蛋白水平的表达量均下降,与正常组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论中枢神经系统损伤后的再生可能与NgR表达量的下降有关。