灯盏花素通过调节Nrf2途径抑制大鼠颅内动脉瘤的形成和机制

目的 探究灯盏花素(Bre)对大鼠模型中颅内动脉瘤(IA)的形成和对核因子E2相关因子2(Nrf2)途径的影响。方法 通过弹性蛋白酶注射建立大鼠IA模型，将大鼠随机分为假手术组、模型组、Bre组，每组15只。Bre组每天腹腔注射50 mg/kg Bre,假手术组和模型组腹腔注射等体积生理盐水，持续3周，在此期间记录IA的发生率、生存率和收缩压，免疫荧光染色和qRT-PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和平滑肌22α(SM22α)的表达。使用过氧化氢(H₂O₂,0.5 mmol/L)处理大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)诱导氧化损伤，然后与Bre(100μmol/L)或(和)ML385(Nrf2抑制剂)共孵育，Western blot、qRT-PCR、ELISA、DCFH-DA荧光染色、流式细胞术分别检测Nrf2、收缩表型相关蛋白和炎性细胞因子的表达、活性氧的产生和细胞凋亡率。结果 在IA大鼠中，Bre处理上调核Nrf2的表达，改善IA病理变化，降低IA的发生率，改善生存率，并降低收缩压。在H₂O₂...     

长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的探讨长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA(lncRNA AFAP1-AS)在子宫内膜癌中的表达并分析其临床意义。方法收集2017年2月—2019年10月该院收集的子宫内膜癌患者112例为观察组,在子宫切除术中采集子宫内膜癌变组织样品,另因阴道异常出血而进行宫腔镜刮宫活检或因子宫肌瘤需要摘除子宫的同期患者50例为对照组,术中收集正常子宫内膜组织样品,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测lncRNA AFAP1-AS表达情况,分析lncRNA AFAP1-AS表达水平与子宫内膜癌患者临床病理特征及预后的关系。结果观察组lncRNA AFAP1-AS在子宫内膜组织中的表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);lncRNA AFAP1-AS在子宫内膜癌患者子宫内膜组织中表达与患者的年龄、淋巴结转移、合并高血压疾病及合并糖尿病无相关性(P>0.05),与FIGO分期、病理分级及肌层浸润有相关性(P<0.05);lncRNA AFAP1-AS高表达组5年存活率为41.94%,显著低于低表达组存活率(71.67%),差异有统计学意义(χ²=10.41,P<0.05);多因素分析显示,lncRNA AFAP1-AS表达和手术分期是影响子宫内膜癌患者预后的独立危险因素(HR=2.569,95%CI:1.727~3.812;HR=2.628,95%CI:1.386~4.983,均P<0.05)。结论 lncRNA AFAP1-AS与子宫内膜癌的发生、发展及预后密切相关,可以作为临床诊断和预后判断的一个重要参考指标。     

转化生长因子-β_1对子宫内膜上皮细胞增殖和转分化的影响

目的探究转化生长因子-β_1(TGF-β_1)对子宫内膜组织上皮细胞数目和转分化的影响。方法收集2017年6月1日—12月1日河北工程大学附属医院手术获取的正常子宫内膜组织并分离其上皮细胞。将细胞分为正常对照组(只加培养液)和实验组(培养液和不同浓度的TGF-β_1),采用噻唑蓝染色检测活细胞的数量;用酶联免疫法检测各组细胞悬液中Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)和纤黏连蛋白(FN)的分泌情况;免疫印迹法比较各组细胞胞质中的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和钙黏附蛋白-E(E-cadherin)的含量。结果经TGF-β_1作用后,子宫内膜上皮细胞增殖明显,且浓度越大,时间越长,增殖率越高;5 ng/ml TGF-β_1组细胞悬液中Col-Ⅰ和FN的分泌量显著高于正常对照组,差异有统计学意义(t=10.784、16.974,P<0.01);与正常对照组比较,实验组胞质中表达的E-cadherin含量降低,而α-SMA含量增高,且随TGF-β_1浓度增高,E-cadherin、α-SMA含量呈梯度降低/升高,差异有统计学意义(F=171.149、204.618、P<0.01)。结论 TGF-β_1能刺激子宫内膜组织上皮细胞数目增加,诱导其向肌成纤维细胞转变。     

基于蛋白质组学技术测定全蝎中β-肌动蛋白的含量

目的:通过蛋白质组学技术手段找到适用于药材全蝎含量测定的目标蛋白质及其特征肽段，用该特征肽段形成定量方法。方法:全蝎粉碎后经PBS缓冲溶液超声提取并过滤后，得到药材的蛋白质提取溶液。上述溶液经胰蛋白酶酶解后通过高分辨质谱进行分析，确定待测的目标蛋白质（β-肌动蛋白）和与之对应的特征肽段（IIAPPER），并进行特征肽段及其同位素内标物（IIA*(13C3，15N)PPER）的合成。用得到特征肽段做对照品，同位素内标物做内标进行含量测定。色谱柱为Waters ACQUITY UPLC HSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8 μm)，流动相为0.1%甲酸溶液(V/V)-水和乙腈，梯度洗脱。质谱使用电喷雾离子源（ESI）正离子模式，采用多反应监测模式（MRM）进行信号采集。定量方法为内标法。结果:β-肌动蛋白的特征肽段在0.1~40 nmol/L浓度范围内线性良好，相关系数（r2）在0.999以上。方法检出限为0.04 mg/kg，定量限为0.13 mg/kg。加标回收率在87%～93%，重复性的RSD为5.2%，中间精密度的RSD为4.8%，供试品溶液在4 h内稳定。利用该方法对来自不同产地的37批次全蝎药材中的β-肌动蛋白进行含量测定，结果在4.66～100.26 mg/kg之间。结论:该方法灵敏度高，准确度较好和重复性较稳定，可以为全蝎药材药材的质量控制提供一种有效的手段。     

健脾消癌方对结肠癌外泌体诱导HFL1活化成CAFs的影响

目的:探讨健脾消癌方对人结肠癌细胞(HCT116)来源外泌体诱导正常人胚肺成纤维细胞(HFL1)向肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)活化的影响。方法:以13.1 g·kg~(-1)的健脾消癌方灌胃SD大鼠以制备含药血清,采取超高速离心法分别提取含10%无外泌体血清培养的HCT116细胞外泌体及含20%健脾消癌方含药血清培养的HCT116细胞外泌体,纳米颗粒跟踪分析仪(Zetaview)检测外泌体的粒径分布,蛋白免疫印迹法(Western blot)鉴定外泌体的标志蛋白凋亡转接基因2互作蛋白X(Alix),热休克蛋白70(HSP70),肿瘤易感基因101蛋白(TSG101),荧光显微镜观察HFL1对细胞膜染色试剂盒(PKH67)标记的外泌体的摄取情况;将HFL1细胞分6组:空白组,转化生长因子-β1(TGF-β1)组,TGF-β1联合HCT116外泌体2 mg·L~(-1)组,TGF-β1联合HCT116外泌体4 mg·L~(-1)组,TGF-β1联合健脾消癌方外泌体2 mg·L~(-1)组,TGF-β1联合健脾消癌方外泌体4 mg·L~(-1)组,均干预48 h,Western blot和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白和mRNA的表达水平。结果:Zetaview检测粒径分布主要集中在50～100 nm,结合标志蛋白Alix,HSP70和TSG101的表达证实其为外泌体,HFL1细胞与外泌体共孵育后,荧光显微镜下可看到大量外泌体被HFL1细胞所摄取;与空白组比较,TGF-β1组和TGF-β1联合HCT116外泌体组的α-SMA蛋白及mRNA表达水平升高(P0.05);与TGF-β1联合HCT116外泌体组比较,TGF-β1联合健脾消癌方外泌体组的α-SMA蛋白及mRNA水平下降(P0.01)。结论:人结肠癌细胞外泌体联合TGF-β1可诱导HFL1活化成CAFs,健脾消癌方可通过影响α-SMA的表达水平而降低HFL1的活化能力从而达到拮抗结肠癌肺转移的作用。     

纤维软骨性间叶瘤一例

纤维软骨性间叶瘤(fibrocartilagenous mesenchymoma,FM)是一种罕见的骨内原发性交界性肿瘤。本文报道1例13岁男性,L3椎体肿物,组织形态学显示具有轻度不典型性的梭形细胞密集增生,软骨呈团巢状散在分布,部分似骺板样结构,局部有不规则新生骨形成。免疫组织化学结果:平滑肌肌动蛋白、S-100蛋白、结蛋白、CD34、上皮细胞膜抗原、p16及p53等均阴性,Ki-67阳性指数约2%。分子表型:GNAS、IDH1和IDH2基因无突变,MDM2基因无扩增。患者术后108个月无复发及转移。诊断时应着重与纤维软骨性结构不良、去分化软骨肉瘤及低级别中心性骨肉瘤等鉴别。     

辛伐他汀对慢性心力衰竭兔α-辅肌动蛋白2的影响

目的观察辛伐他汀对慢性心力衰竭(CHF)兔α-辅肌动蛋白2(α-actinin2)表达的影响。方法雄性大耳白兔45只,随机分为正常对照组、CHF模型组和辛伐他汀治疗组。CHF模型组及辛伐他汀治疗组注射盐酸阿霉素2 mg·kg-1,每周1次,连续10周,建立慢性心力衰竭模型;正常对照组给予相同容量的生理盐水。辛伐他汀治疗组在首次注射盐酸阿霉素时给予辛伐他汀,剂量为1.5 mg·kg-1·d-1,持续至第12周;CHF模型组和正常对照组给予相同容积的生理盐水灌胃12周。心脏彩色超声测量兔左心室结构和功能。处死动物留取左心室室壁观察心肌细胞结构的变化,免疫组织化学染色后检测α-actinin2表达水平。结果与正常对照组比较,辛伐他汀治疗组、CHF模型组的左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)明显增大,左心室射血分数(LVEF)明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与CHF模型组比较,辛伐他汀治疗组LVESD、LVEDD减小,LVEF升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与正常对照组比较,辛伐他汀治疗组、CHF模型组α-actinin2表达明显减少(P<0.05),辛伐他汀治疗组与CHF模型组相比表达明显增多(P<0.05)。结论辛伐他汀可明显改善CHF兔左心室重塑,提高其心功能,其机制可能与增加α-actinin2表达有关。     

EZH2对HSC-T6细胞增殖活化的影响及其部分机制研究

目的探讨Zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)表达沉默对大鼠肝星状细胞HSC-T6细胞增殖活化的影响,及其部分调控机制。方法应用EZH2的抑制剂DZNep(3-Deazaneplanocin A)作用于TGF-β1诱导活化的HSC-T6细胞,采用Western blot法检测蛋白EZH2、p-ERK、p-AKT和α-SMA的表达;根据EZH2的碱基序列设计并合成小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA),通过脂质体LipofectamineTM2000转染到HSC-T6细胞内,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HSC-T6细胞的增殖变化,Western blot法检测蛋白EZH2、p-ERK、p-AKT和α-SMA的表达。结果将DZNep加入TGF-β1诱导活化的HSC-T6细胞后,EZH2蛋白水平明显降低,同时p-ERK、pAKT和α-SMA蛋白水平亦明显降低;将EZH2-si RNA转染活化的HSC-T6细胞内,HSC-T6细胞的增殖可明显被抑制,同时EZH2、p-ERK、p-AKT和α-SMA蛋白水平亦明显降低。结论抑制EZH2的表达可明显抑制HSC-T6细胞的增殖活化,EZH2可能是潜在的治疗肝纤维化的靶点。     

Calbindin-D28k与肌动蛋白在人健康及龋坏牙齿中的分布

目的 探讨calbindin—D28k与肌动蛋白在健康和龋坏人恒牙中的分布相关性及意义。方法 用免疫组化方法分别检测calbindin—D28k与肌动蛋白在正常、中龋和深龋人牙中的表达并观察比较。结果 正常组Calbindin—D28k在前期牙本质远髓2／3区域染色阳性，肌动蛋白在成牙本质细胞及住于矿化牙本质中的细胞突呈阳性；中龋组位于前期牙本质中的成牙本质细胞突Calbindin—D28k与肌动蛋白均呈强阳性，Calbindin—D28k在病损区前期牙本质全层呈阳性且较正常组明显增强；深龋组Calbindin—D28k染色部位主要位于成牙本质细胞核。结论 在第三期牙本质形成活跃的成牙本质细胞中Calbindin—D28k与肌动蛋白的分布变化具有一致性，均与牙本质基质的分泌有关。     

长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1在口腔鳞状细胞癌中的表达及其相关功能

目的 分析长链非编码RNA（lncRNA）肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1（AFAP1-AS1）在口腔鳞状细胞癌（OSCC）中的表达及其对OSCC细胞生物行为学的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测OSCC患者（55例）癌组织、癌旁正常黏膜组织及人口腔鳞状细胞癌SCC25、人正常口腔角质细胞株（NOK）细胞中lncRNA AFAP1-AS1的表达,分析AFAP1-AS1与OSCC患者病理特征的相关性,通过Kaplan-Meier生存曲线分析AFAP1-AS1与患者预后的关系。AFAP1-AS1 siRNA转染SCC25细胞,细胞计数（CCK-8）及Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭的变化,蛋白质印迹（Western blot）检测侵袭相关蛋白、肌动蛋白纤维相关蛋白1（AFAP1）及Rho GTP酶家族成员蛋白的表达情况,免疫荧光染色检测细胞骨架肌动蛋白微丝结构的变化。结果 OSCC组织中AFAP1-AS1的表达高于癌旁正常黏膜组织,SCC25细胞中AFAP1-AS1的表达高于NOK细胞（P<0.001）。AFAP1-AS1的表达与OSCC的分化程度、TNM分期及淋巴结转移密切相关（P<0.05）,AFAP1-AS1高表达患者的生存率低于AFAP1-AS1低表达者（P<0.05）。AFAP1-AS1 siRNA转染后AFAP1-AS1的表达水平下调,SCC25细胞的增殖、迁移和侵袭能力降低,AFAP1、RhoA、Rac2、Rab10、RhoGDI和Pfn1的表达上调,RhoC的表达下调,细胞骨架中应力纤维丝减少,肌动蛋白完整性丢失。结论 lncRNA AFAP1-AS1在OSCC组织及SCC25细胞中高表达,与OSCC的发生进展及预后相关。下调AFAP1-AS1能够抑制OSCC的增殖、迁移和侵袭能力,其可能是通过调控肌动蛋白纤维丝的完整性实现的。