三七片DNA条形码分子鉴定及方法学考察

目的为研究DNA条形码技术在中成药鉴定中的应用,以三七片为研究对象,对方法的适用性、专属性与精密度进行考察。方法收集15批次市售三七片样品,考察三七片DNA提取条件,并对"中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则"中PCR扩增、序列获得、结果判定等方法适用性进行确认;收集三七、人参、西洋参,制作三七片及其掺伪品,考察方法的专属性和重现性。结果三七片取样量100 mg,56℃水浴8 h所获得DNA的质量浓度平均值为60.7 ng/μL,PCR扩增、序列获得和结果判定均可获成功;三七、人参和西洋参的ITS2序列长度均为230bp,三七与人参、三七与西洋参的序列间均存在7个稳定的SNP位点,自制三七片和掺伪三七片均可成功获得ITS2序列,不同比例三七与人参、三七与西洋参的测序峰图在SNP位点处呈现相应峰高比的SNP套峰具备专属性;重复性、中间精密度和重现性考察符合《中国药典》2015年版(通则9101)相关要求。结论 ITS2序列作为DNA条形码能够稳定、准确鉴定三七片的原料药材,具备良好的专属性和精密度,三七片DNA条形码分子鉴定法将为保障三七片临床用药安全提供新的技术手段,并对《中国药典》其他收载单方制剂的鉴定提供参考。     

干蟾皮、硇砂、三七治疗胃癌经验——仝小林三味小方撷萃

仝小林院士提出中医"靶药"的概念,其中干蟾皮、硇砂、三七正是治疗胃癌的三味靶药。蟾皮攻毒抗癌,清扫无形之癌毒;硇砂软坚消积,消除有形之癌块;三七化瘀止血,兼有温补之性。干蟾皮用量范围为3～9 g,硇砂用量范围为1.5～6 g,三七用量范围为15～30 g。运用干蟾皮和硇砂时,应严密监视不良反应和肝肾毒性。     

复方三七护脉汤治疗冠心病心绞痛的临床疗效观察

目的探讨复方三七护脉汤治疗冠心病心绞痛的临床疗效。方法选取我院2017年3月～2019年3月收治的冠心病心绞痛患者102例,依照随机分组原则分为观察组和对照组各51例。对照组采用常规西药治疗,观察组于对照组基础上采用复方三七护脉汤治疗,比较两组治疗前、治疗4w后临床症状(心绞痛发作次数、持续时间、硝酸甘油用量等)改善情况,观察比较血液流变学(全血高切粘度、低切粘度等)水平,比较两组临床疗效。结果观察组治疗总有效率为94.12%,高于对照组的80.39%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗4w后,观察组心绞痛发作次数、硝酸甘油用量少于对照组,心绞痛持续时间短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗4w后,观察组全血高切粘度、低切粘度水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论复方三七护脉汤治疗冠心病心绞痛疗效显著,可有效改善患者临床症状及血液流变学水平。     

三七对轻型缺血性脑卒中患者“双抗”治疗后出血事件影响的研究

目的:观察三七对轻型缺血性脑卒中患者"双抗"治疗后神经功能恢复及出血事件的影响。方法:60例脑梗死患者,以数字法随机分成三七组(30例)和对照组(30例)。对照组患者给予氯吡格雷联合阿司匹林治疗,三七组在对照组的基础上加三七粉口服,上述治疗持续21 d,之后仅口服氯吡格雷。观察并比较两组患者的NIHSS评分、mRS评分及PLT、APTT、PT、INR、FIB变化,21 d内进展型卒中发生率、出血事件发生率,90 d内卒中复发率。结果:对照组、三七组治疗后NIHSS评分、mRS评分均较治疗前减少,差异有统计学意义(P<0.05)。两组均有发生进展型卒中及卒中复发病例,两组比较无统计学差异(P>0.05)。三七组在出血事件发生率(皮肤黏膜出血)上对照组少,差异有统计学意义(P<0.05)。两组间治疗前后PLT、PT、INR、FIB变化无统计学意义(P>0.05),三七组治疗后APTT较治疗前延迟,有统计学差异(P<0.05)。结论:三七加"双抗"治疗可减少轻型缺血性脑卒中患者神经功能损伤程度,并降低患者皮肤黏膜出血率,这可能与影响内源性凝血有关。     

三七粉质量标志物研究＊

三七为常用中药材，具有散瘀、止血，消肿定痛的功效。三七粉作为三七市场应用的主要形式之一，市场逐年增大。现行标准难以评价和控制三七粉“多重功效”的质量特点。本课题组在系统辨识三七粉化学物质组及其传递规律的基础上，采用网络药理学和体内、体外模型，研究并阐明了三七粉的活血、心肌与血管保护、止血以及消肿定痛的药效物质基础；进一步结合成分的特有性分析，确定了三七粉的质量标志物；在此基础上，建立了基于质量标志物的三七粉的指纹图谱及“一测多评”的多指标含量测定方法，为建立三七粉整体质量控制方法提供了理论与实验证据。     

HPLC波长切换法同时测定益安宁丸中7种活性成分

目的建立HPLC波长切换法同时测定益安宁丸中7种活性成分的方法。方法采用HPLC法,同时测定益安宁丸中三七皂苷R_1、五味子醇甲、丹酚酸B、五味子酯甲、人参皂苷Rg_1、人参皂苷Rb_1、丹参酮Ⅱ_A的含量,采用Shim-pack GIST-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱:0～5 min,5%乙腈;5～12 min,5%～12%乙腈;12～17 min,12%～20%乙腈;17～30 min,20%乙腈;30～36 min,20%～50%乙腈;36～45 min,50%～80%乙腈;45～70 min,80%乙腈;检测波长203 nm(三七皂苷R_1、人参皂苷Rg_1、人参皂苷Rb_1)、220 nm(五味子酯甲)、250nm(五味子醇甲)、268nm(丹酚酸B)和270nm(丹参酮Ⅱ_A),体积流量1.0 mL/min,柱温35℃,进样量10μL。结果三七皂苷R_1、五味子醇甲、丹酚酸B、五味子酯甲、人参皂苷Rg_1、人参皂苷Rb_1、丹参酮Ⅱ_A检测质量浓度的线性范围分别为0.015～0.150、0.077～0.766、0.006～0.062、0.009～0.092、0.050～0.503、0.067～0.670、0.011～0.108 mg/mL;平均加样回收率分别为99.5%、99.8%、99.2%、98.9%、96.9%、98.8%、97.1%。结论该方法简单、有效、结果准确,可用于益安宁丸中上述7种活性成分的同时测定。     

注射用血栓通中三七元素迁移的规律

目的:分析注射用血栓通中三七从原料到成品全过程的元素迁移规律,以便更好地控制成品中元素杂质。方法:采用ICP-MS法全面分析三七药材、三七总皂苷(中间体)和注射用血栓通中21种元素的含量。结果:21种元素的标准曲线相关系数r均在0. 999以上,回收率在92. 71%～107. 07%之间,RSD均在5%以内。三七药材中铝、铁含量较高,铅、砷、汞、镉、铜符合中华人民共和国药典的相关规定,三七总皂苷(中间体)和注射用血栓通中多数元素均未检出或含量极低。结论:注射用血栓通的提取工艺可有效去除三七中大部分元素,重金属及有害元素也降到较低水平。     

丹参多酚酸与三七总皂苷合用保护OGD/R损伤胶质细胞线粒体、促进神经因子表达作用研究*

目的 探讨丹参多酚酸（Salvianolate Acid，SAL）和三七总皂苷（Panax Notoginseng Saponins，PNS）合用保护氧糖剥夺/复氧复糖（Oxygen-Glucose Deprivation/Reoxygenation，OGD/R）损伤后星形胶质细胞线粒体、促进神经营养因子表达的作用及机制。方法 大鼠星形胶质细胞原代培养，建立OGD/R损伤模型。Cell counting kit-8（CCK-8）法检测星形胶质细胞活力，流式细胞仪检测活性氧（reactive oxygen species，ROS）释放量、胞内Ca2+ 浓度、线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential，MMP）变化，实时定量PCR（real time polymerase chain reaction，RT-PCR）和蛋白质免疫印迹（western blot，WB）法检测HIF-1α、PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白及脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）、神经生长因子（nerve growth factor，NGF）、胰岛素样生长因子（insulin-like growth factors，IGF-1α）的表达情况。结果 胶质细胞OGD/R条件确定为OGD4h/R24h，给药浓度确定为SAL 25 μg·mL-1、PNS 6.25 μg·mL-1。与OGD/R组相比，SAL 25 μg·mL-1、PNS 6.25 μg·mL-1、SAL 25 μg·mL-1与PNS 6.25 μg·mL-1合用均能增强损伤后星形胶质细胞活力（P＜0.05），升高MMP，降低ROS释放量（P＜0.05），降低损伤后星形胶质细胞HIF-1α蛋白和mRNA的表达，升高磷脂酰肌醇激酶（PI3K）磷酸化水平（P＜0.05）；SAL还可升高mTOR蛋白磷酸化水平（P＜0.05），PNS可提高Akt磷酸化水平（P＜0.05），增加损伤星形胶质细胞BDNF mRNA 表达（P＜0.05）；SAL、SAL与PNS合用能增加损伤后星形胶质细胞 BDNF、NGF、IGF-1α mRNA 表达（P＜0.05）。结论 丹参多酚酸和三七总皂苷组分合用可保护OGD/R损伤后星形胶质细胞线粒体、促进胶质细胞表达神经营养因子BDNF、NGF、IGF-1α。