川芎嗪对视网膜色素变性小鼠干预作用的机制

目的:观察川芎嗪对视网膜色素变性rds小鼠的干预作用和机制。 方法:rds新生小鼠 84只，随机分为实验组和对照组，每组42只小鼠。实验组小鼠从出生时开始，腹腔注射盐酸 川芎嗪80 mg/kg，2次/d，直至生后35 d；对照组同时注射等量生理盐水。分别在用药 后0、3、7、1 4、21、28、35 d取实验组和对照组小鼠眼球，立即经10%中性甲醛固定，常规病理切片。另取眼球经2.5%戊二醛溶液固定，电子显微镜观察。用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标 记技术(TUNEL)方法检测视网膜光感受器细胞的凋亡，用免疫组织化学方法测定bcl-2在视网膜的表达。 结果:病理观察结果显示，经盐酸川芎嗪治疗后14、21、28 、35 d，rds小鼠光感 受器细胞核层数与未用药的对照组相比较，明显增加（P＜0.01）。电子显微镜观察结果显示，川芎嗪可减缓rds小鼠光感受器细胞和视网膜外段盘膜部位线粒体的病变，减少盘膜和外界膜的破坏。rds小鼠经盐酸川芎嗪治疗后3、7、14、21、28、35 d，光感受器细胞凋 亡率比对照组明显减少（P＜0.01）；治疗后3、7、14、21、28、35 d时，bcl -2在视网膜光感受器细胞及光感受器细胞内外段的表达明显增强（P＜0.05） 。 结论:盐酸川芎嗪可延缓rds小鼠视网膜光感受器细胞的减少，其作用机制可能是通过上调视网膜 外核层及光感受器细胞内外段bcl-2的表达延缓rds小鼠视网膜光感受器细胞的凋亡。     

葛根素经腹腔注射在兔眼房水和玻璃体中的药代动力学结果比较

葛根素(puerarin,Pue)又名普乐林,为豆科植物野葛或甘葛藤干燥根中提取的有效单体成分,属于异黄酮类,化学名为8-β-D吡喃葡萄糖-4’,7’-二羟基异黄酮苷。葛根素临床应用广泛,药理作用主要有扩张冠状动脉和脑血管、降低心肌耗氧量、改善微循环、抗血小板聚集、降血糖、降血脂、清除氧自由基和抗脂质过氧化、促进细胞代谢等,常用于心脑血管疾病的治疗[1]。近年来,葛根素在眼科主要用于降低眼内压和眼底疾病的治疗[2,3],并取得较好疗效。本文就葛根素经全身用药在兔眼房水、玻璃体中的药代动力学进行研究。1材料与方法1.1仪器与试药Waters公…     

葛根素抗rds小鼠视网膜光感受器细胞凋亡及其机制探讨

目的 观察葛根素对遗传性视网膜色素变性rds小鼠的治疗作用,并探讨其抗视网膜光感受器细胞凋亡的作用机制.方法 rds新生小鼠随机分为两组,实验组和对照组.实验组小鼠从出生时开始,ip盐酸葛根素80mg/kg,每天2次,至生后35 d,对照组同时ip等量生理盐水.分别在用药后0、3、7、14、21、28、35d取眼球,立即经10%中性甲醛固定,常规病理切片.另取眼球经2.5%戊二醛溶液固定,电镜观察.用TUNEL,方法检测视网膜光感受器细胞的凋亡,用免疫组化方法测定Bcl-2在视网膜的表达.结果 病理结果显示,经葛根素治疗后14、21、28、35 d,rds小鼠光感受器细胞层数与对照组比较,明显增加(P<0.01).电镜结果显示,葛根素治疗组与对照组比较,在7、14、21、28、35 d可减轻rds小鼠光感受器细胞及其外段盘膜部位的线粒体、盘膜和外界膜的破坏.rds小鼠经葛根素药物治疗后3、7、14、21、28、35 d,光感受器细胞的凋亡率与对照组比较明显减少(P<0.01);在7、14、21、28、35 d,Bcl-2在视网膜光感受器细胞基质及其内外段的表达明显增强(P<0.01).结论 葛根素可减轻rds小鼠视网膜光感受器细胞的病变,其作用机制可能是通过上调视网膜光感受器细胞及其内外段Bcl-2的表达延缓rds小鼠视网膜光感受器细胞的凋亡.     

四种DNA提取法在遗传性眼病DNA库中的比较

目的通过对低渗溶血法、盐酸胍法、氯化钠法、NP-40法提取人类基因组DNA的比较，以得到一种最稳定、可靠、实用的DNA提取方法，应用于遗传性眼病DNA库的建立。方法用四种方法提取眼遗传性疾病患者的血液基因组DNA，紫外分光光度测定，用琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增鉴定提取的基因组DNA。结果低渗溶血法提取基因组DNA量最多，纯度最高，PCR扩增效果最好，有利于遗传性眼病DNA库的建立。结论低渗溶血法是一种实用、可靠、稳定的提取方法，在眼遗传性疾病家系DNA库建立上值得推广应用。     

发生在成视网膜细胞瘤蛋白大袋立体结构外的错义突变

目的:了解成视网膜细胞瘤(RB)患者RB1基因突变至RB发生中RB蛋白(pRB)的变化。方法: 提取RB患者的基因组DNA, PCR扩增后, SSCP/异源双链筛查RB1基因的启动子和全部27个外显子, 克隆测序鉴定突变, 并分析突变产物对pRB的影响。结果:RB患者RB1基因的外显子4存在着错义突变, 该突变发生在pRB的大袋立体结构外。RB患者RB1基因存在着不影响pRB大袋的生殖细胞性突变, 这是迄今为止第4例报道。结论:pRB氨基末端可能参与pRB对细胞的生长抑制。     

PCR扩增技术在新生儿结膜炎中的诊断应用

目的 探讨PCR扩增技术在新生儿结膜炎临床诊断中的价值。方法 采用PCR扩增技术和直接涂片镜检两种方法，分别检测1997年9月～2002年10月到中山大学中山眼科中心就诊的200例新生儿结膜炎息儿的结膜标本中的淋球菌、沙眼衣原体和解脲支原体。结果 PCR扩增检测出18例淋球菌阳性(9％)，65例沙眼衣原体阳性(32．5％)，8例解脲支原体阳性(4％)；直接涂片镜检法检出14例淋球菌阳性(7％)，47例沙眼衣原体阳性(23．5％)，5例解脲支原体阳性(2．5％)。PCR扩增的阳性率比直接涂片镜检高。结论 PCR扩增技术是一种快速、简便、灵敏的检测新生儿结膜炎常见致病病原体的方法，与传统直接涂片镜检法比较，具有一定的优势。     

p53和MDM2在3种RP小鼠视网膜中的表达

目的 了解凋亡相关基因p53和MDM2与视网膜色素变性（retinitis pigmentosa,RP)发病的关系。方法 以RP模式动物rds小鼠，rd小鼠，C3H小鼠及正常对照C3B小鼠为材料，提取不同发病时间（出生后7，12，17，23，29，37和50d)视网膜的总RNA，以β-actin和L19核糖体蛋白基因为内对照，RT－PCR分析小鼠发病过程中视网膜p53和MDM2的表达。结果 在C3B小鼠视网膜中，p53和MDM2的表达完全同步。出生后7d，高表达；7－12d期间，表达量迅速下降；12－50d期间，表达水平低，但基本稳定；p53和MDM2在rds小鼠的表达水平低，但基本上是同步，稳定表达。在rd小鼠中，p53的表达变化不大，但MDM2的表达则与p53不同步，类似于C3B小鼠MDM2的表达。在C3H小鼠的视网膜，p53和MDM2的表达也不同步。7－23d期间，p53的表达基本稳定；自23d后逐步下降，其中23－29d期间，p53的表达下降最快。而MDM2的表达总体变化不大。结论：在这3种RP模式动物中，虽然凋亡相关基因和MDM2存在着表达差异，但其发病过程中视网膜细胞的变性死亡可能是通过p53非依赖型途径进行的。     

葛根素对遗传性视网膜色素变性rd小鼠的干预作用及其抗凋亡机制研究

目的观察葛根素对视网膜色素变性rd小鼠外核层细胞和视网膜光感受器外段的病理、超微结构、凋亡和Bcl-2表达的影响,探讨葛根素对rd小鼠的干预作用和干预机制。方法rd新生小鼠随机分为2组,实验组和对照组。实验组小鼠从出生时腹腔注射葛根素80mg.kg-1,每天2次,至生后35d,对照组同时注射等量生理盐水。分别在用药后当日和3、7、14、21、28、35d取眼球,固定后,常规病理和电镜观察。用TUNEL方法检测视网膜光感受器细胞的凋亡,用免疫组化方法测定Bcl-2在视网膜的表达。结果病理结果显示,经葛根素治疗后14、21、28、35d,rd小鼠光感受器细胞层数与未用药的对照组相比较明显增加,P<0.01。电镜结果显示,葛根素可减缓rd小鼠光感受器细胞及其外段盘膜部位线粒体的病变,减少盘膜和外界膜的破坏。rd小鼠经葛根素药物治疗后d7、14、21、28、35,光感受器细胞的凋亡率比未用药的对照组明显减少,P<0.01;d3、7、14、21、28、35,Bcl-2在视网膜外核层及光感受器细胞外段的表达明显增强,P<0.05或P<0.01。结论葛根素可延缓rd小鼠视网膜外核层细胞和视网膜光感受器外段损伤。     

小儿视锥细胞与视锥杆细胞营养不良的临床 特点与候选基因突变分析

目的分析小儿视锥细胞和视锥杆细胞营养不良的临床特点及其候选基因变异情况。方法连续收集分析18例年龄4个月至8岁的视锥细胞和视锥杆细胞营养不良先证者的临床资料。应用聚合酶链反应异源双链单链构像多态法分析锥杆同源异形盒基因（cone-rod homeobox gene,CRX）全部3个外显子、GUCY2D基因（retinal-specific guanylate cyclase gene）外显子2和8,寻找可能的变异。结果18例患儿因家人发现其有明显视觉障碍来诊。 其中13例有眼球震颤,8例有畏光,7例有轻微、不典型眼底改变。11例眼底正常。4例可测 定视力者视力均低于0.3,14例小于3岁者无法测定视力。视锥细胞营养不良与视锥杆细胞营养不良的临床症状和眼部表现相互重叠。均未发现CRX基因和GUCY2D基因突变。结论小儿视锥细胞和视锥杆细胞营养不良视觉障碍明显,眼球震颤较多见。多数眼底正常,少数有眼底改变但不典型。本组病例可能与CRX基因和GUCY2D基因外显子2、8突变无关。(中华眼底病杂志,2001,17:293-295)