SCCmec相关的psm-mec在血液来源人葡萄球菌中的基因定位

目的了解SCCmec相关的psm-mec基因在血液来源人葡萄球菌中的基因定位特征,为深入研究psm-mec基因在人葡萄球菌中的功能奠定基础。方法收集临床血培养分离的人葡萄球菌25株,通过PCR扩增mecA基因和psm-mec基因,多重PCR对耐甲氧西林人葡萄球菌SCCmec分型,PCR扩增mecR1/psm-mec基因与psm-mec/xylR基因间隔序列及fudoh基因,探究psm-mec基因在SCCmec上的定位特点。结果 PCR检测显示,21株为耐甲氧西林人葡萄球菌,psm-mec基因的检出率为47.6%,4株为甲氧西林敏感人葡萄球菌,未检出psm-mec基因。多重PCR结果显示,10株psm-mec基因阳性菌株中,2株属典型SCCmecⅢ型,5株属类SCCmecⅢ型,3株属SCCmec新型别。基因间隔序列和fudoh基因检测显示,10株psm-mec基因阳性人葡萄球菌中,mecR1/psm-mec基因和psm-mec/xylR基因及fudoh基因均阳性。结论 SCCmec相关的psm-mec基因广泛存在于血液来源的人葡萄球菌中,主要分布在典型SCCmecⅢ型、类SCCmecⅢ型和SCCmec新型别上,定位于mecR1基因与xylR基因之间。     

利用蛋白芯片技术诊断和评估肾损伤的临床应用

目的利用Au蛋白芯片（proteinchip gold array）技术检测肾损伤患者尿蛋白指纹图谱,探讨其灵敏、快速预测和评估肾损伤的临床应用价值。方法利用表面增强激光解析电离飞行时间质谱（surface-enhanced laser desorption-ionization time of flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS）技术及Au蛋白芯片检测477例尿蛋白指纹图,包括237例肾病患者和240例对照者。利用生物标志模型软件（biomarker patterns software,BPS）筛选标志蛋白,结合人工神经网络（artificialneural network,ANN）技术建立模型,评价其在诊断和评估肾损伤中的应用价值。通过电喷雾四级杆飞行时间质谱（electrospray ionization quadrupole time of flight,ESI-Q-TOF）结合比对标准蛋白质谱,对部分差异蛋白进行鉴定。结果肾病患者与对照者尿中差异表达的蛋白质峰有75个,其丰度值两组间比较差异均有统计学意义（t值为-11.6-28.1,P均〈0.05）,筛选质荷比（m/z）6182、88439、7402、37706、76508、0045和91 240蛋白质建立的ANN模型预测肾损伤的灵敏度为96.6%（84/87）,特异度为94.4%（85/90）。鉴定结果表明11735、15150、22871、23770、67650 h和80045m/z蛋白分别为β2-微球蛋白、血红蛋白、α1-抗胰蛋白酶、α1-微球蛋白、白蛋白和转铁蛋白。结论基于Au蛋白芯片的SELDI-TOF-MS技术检测尿蛋白指纹图,在肾脏疾病的诊断、蛋白尿类型判断、肾损伤评估及治疗评价中具有潜在的应用价值。     

血液来源人葡萄球菌生物被膜形成能力及耐药性的研究

目的探究人葡萄球菌生物被膜能力和耐药性,为预防与治疗提供理论依据。方法收集临床分离血液来源人葡萄球菌,琼脂稀释法检测16种抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC),通过耐苯唑西林表型和mecA基因型以准确区分耐甲氧西林人葡萄球菌(MRSHo)和甲氧西林敏感人葡萄球菌(MSSHo),比较二者在耐药性上的差异;体外微孔板黏附实验(TCP)测定生物被膜,并分析其对耐药性的影响。结果收集菌株共计55株,药物耐药率由高到低分别为青霉素92.73%、红霉素87.27%、苯唑西林83.64%、克林霉素67.27%、复方磺胺甲噁唑65.45%、环丙沙星47.27%、左氧氟沙星47.27%、四环素41.82%、莫西沙星34.55%、利福平16.36%和庆大霉素10.91%及万古霉素、利奈唑胺、普丁/达福、呋喃妥因和替加环素0.00%,无耐药株检出。46株(83.6%)mecA阳性为MRSHo,与MSSHo相比MRSHo更易对青霉素、四环素、奎诺酮类及复方磺胺甲噁唑耐药,差异有统计学意义(P0.05)。35株(63.6%)可产生物被膜,生物被膜阴阳性菌株组间在16种抗菌药物耐药性比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论临床分离血液来源人葡萄球菌易产生物被膜、甲氧西林耐药率高、MRSHo常为多重耐药。     

利用DiversiLab系统快速诊断医院感染菌的亲缘关系

目的应用DiversiLab系统对医院感染的鲍曼不动杆菌进行同源性分析,评价DiversiLab系统在诊断医院性感染细菌中的作用。方法收集该院重症监护病房暴发的鲍曼不动杆菌16株,应用VITEK 2COMPACT全自动微生物分析系统进行鉴定和药敏试验,同时应用基于重复序列聚合酶链反应(rep-PCR)技术的DiversiLab系统进行同源性分析。结果 16株鲍曼不动杆菌被分为4个克隆组,其中第1克隆组是主要的流行克隆,有4个亚克隆,9株鲍曼不动杆菌同属于第1亚克隆,亲缘关系近。结论第1克隆组是该院医院感染主要流行克隆,DiversiLab系统可在24h内快速、准确地诊断医院感染细菌的同源性,可广泛应用于医院感染细菌的诊断。     

临床分离耐甲氧西林表皮葡萄球菌SCCmec型别多样性分析

目的探讨临床分离耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)SCCmec型别。方法收集临床分离并经全自动微生物鉴定系统准确鉴定的表皮葡萄球菌84株,通过PCR扩增esp和mecA基因准确鉴定MRSE,采用多重PCR对MRSE SCCmec进行分型,分析其分布特点。结果 PCR扩增结果显示,84株临床分离表皮葡萄球菌均可扩增出esp基因,mecA检出率为76.19%(64/84),其中血液、痰液、尿液和伤口分泌物MRSE检出率分别为76.8%、68.8%、100.0%和71.4%。多重PCR扩增结果显示,64株MRSE中,SCCmec单一型别为22株,其中SCCmecⅠ型19株、SCCmecⅢ型3株;SCCmec混合型为42株,其中Ⅰ、Ⅱ混合型2株,Ⅰ、Ⅲ混合型14株,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ混合型12株,Ⅱ、Ⅲ混合型5株,Ⅲ、Ⅳ混合型9株。结论临床分离的MRSE SCCmec型别存在明显的多样性,以混合SCCmec型别为主。     

乳腺癌细胞膜蛋白的SELDI-TOF-MS分析

目的比较乳腺癌细胞株和正常乳腺上皮细胞膜蛋白指纹图谱,为乳腺癌亚细胞蛋白组学的研究奠定基础。方法试剂盒提取两株乳腺癌细胞株MDA-MB-231,MCF-7及一株乳腺正常上皮细胞HBL-100的膜蛋白,SEL-DI-TOF-MS分析蛋白指纹图谱,寻找差异蛋白。结果在分子量2kD-100kD范围内3株细胞均可检测到近100个蛋白点,MDA-MB-231和MCF-7与HBL-100相比,膜蛋白差异点分别为32个和34个(P<0.05),其中7.8kD,8.3kD和8.8kD的蛋白在两株癌细胞中表达均降低,9.6kD的蛋白在两株癌细胞中表达均增高。结论 SELDI-TOF-MS可以快速灵敏地检测到乳腺癌亚细胞蛋白水平的差异,为乳腺癌早期诊断提供依据。     

血液来源携带psm-mec基因人葡萄球菌SCCmec型别分析与生物被膜能力的研究

目的研究血液来源携带psm-mec基因人葡萄球菌SCCmec型别和psm-mec基因与生物被膜的相关性,为其临床感染的防治提供依据。方法收集临床血液来源经全自动微生物鉴定仪确认的人葡萄球菌。通过PCR扩增mecA基因区分耐甲氧西林人葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus hominis,MRSHo)和甲氧西林敏感人葡萄球菌(methicillin-susceptive Staphylococcus hominis,MSSHo)。体外粘附实验(Microtite Plate Assay,TCP)检测生物被膜。PCR扩增psm-mec基因并测序,分析其与生物被膜的相关性。PCR扩增psm-mec与mecR1及xylR基因的间隔序列和对psm-mec基因阳性菌株做SCCmec、mec和ccr型别检测,探究其在SCCmec上的定位与分布特征。结果共收集菌株55株,其中46株检出mecA基因为MRSHo,18株携带psm-mec基因,35株产生物被膜。携带与未携带psm-mec基因的菌株形成生物被膜的比率分别为83.33%和54.1%,二者差异显著(P=0.03)。DNA测序显示,3株psm-mec阳性生物被膜阴性的菌株中,2株于psm-mec编码区上游-12处发现G>A的点突变。所有psm-mec与mecR1及xylR的基因间隔序列阳性。携带psm-mec基因菌株分为,2株SCCmecⅢ型,7株Ⅲ型的变异型,9株SCCmec新型别;所有菌株均为Class A类mec;6株为ccr type 1,1株为ccr type 1+2,2株为ccr type 1+3,2株为ccr type 3,7株未扩增出ccr。结论在血液来源人葡萄球菌中,psm-mec基因与生物被膜存在相关性,其定位于mecR1与xylR两个基因之间,主要分布于SCCmecⅢ型、Ⅲ型变异型和新型别中,ccr基因存在高度变异,是造成SCCmec多态性的原因。     

产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌基因型分析

目的 了解我院临床分离大肠埃希茼产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的发生率和基因型分布情况.方法 确证试验鉴别临床分离大肠埃希菌中产ESBLs株,PCR扩增CTX-M耐药基因,PCR.RFLP和DNA测序确定CTX-M基因型.结果 确证实验证明,88株大肠埃希菌中有57株ESBLs阳性,其中54株CTX-M基因扩增阳性.PCR-RFLP分析发现,10株携带CTX-M-1组基因,39株携带CTX-M-9组基因,另外5株同时携带CTX-M-1和CTX-M-9组基因.测序证实7株CTX-M-9组扩增产物均为CTX-M-14型,3株CTX-M-1组扩增产物均为CTX-M-3型.结论 大肠埃希菌中产CTX-M型ESBLs的检出率较高,其基因型以CTX-M-14和CTX-M-3型为主.     

尿蛋白标志物模型诊断糖尿病肾病的初步研究

目的探索基于Au蛋白芯片的尿蛋白标志物模型早期快速诊断糖尿病肾病（DN）的应用价值。方法应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术及Au芯片检测86例DN患者、40例糖尿病（DM）患者及55名健康人（对照组）尿蛋白质谱。获得的谱图用Biomaker Wizard 3．1软件筛选差异蛋白,通过BPS软件建立决策树辨别分析模型,评价其临床诊断价值。部分筛选的差异蛋白通过比对标准蛋白质谱数据进行鉴定。结果DN患者与对照组尿差异蛋白质峰有37个（P〈0．05）,BPS筛选66916质荷比（m／z）蛋白建立的模型诊断DN敏感度100％,特异度97．78％。对DM和DN患者尿蛋白质谱图分析后得到24个差异蛋白质峰（P〈0．05）,BPS筛选4008、11619、66916m／z蛋白建立的模型区分两者的灵敏度和特异度均为100％。比对标准蛋白质谱数据,DN患者尿中11619、23529、66916、79378m／z蛋白,可能分别为β2-微球蛋白、α1-微球蛋白、自蛋白、转铁蛋白。结论利用SELDI及Au芯片检测尿标志蛋白在鉴别蛋白尿来源、DN快速诊断及肾损害评估中具有重要应用价值。     

表面增强激光解析电离飞行时间质谱快速鉴定血液大肠埃希菌感染

目的探讨用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)快速鉴定引起血流感染的大肠埃希菌。方法用SELDI-TOF-MS建立大肠埃希菌的蛋白质指纹模型。临床分离的168株菌经SELDI-TOF-MS检测,数据与大肠埃希菌模型进行相似度比较,对该模型进行评价。SELDI-TOF-MS检测88株微生物血培养分析仪阳性报警的革兰阴性杆菌,与大肠埃希菌蛋白质指纹模型进行相似度比较,对其中的大肠埃希菌进行鉴定。结果 19株建模组菌株经PCR及测序鉴定均为大肠埃希菌,并建立了该菌的蛋白质指纹模型;用168株验证组菌株对该模型进行验证,对大肠埃希菌鉴定的符合率为100%(60/60);用该模型对88株引起血流感染的革兰阴性杆菌进行鉴定,鉴定结果与传统微生物学鉴定结果具有较高的一致性(k=0.905)。结论 SELDI-TOF-MS可快速鉴定引起血流感染的大肠埃希菌,为血流感染细菌的快速诊断提供了新技术。