Janus激酶246/1单倍型与中国上海地区汉族PV和ET患者的相关性

目的 研究中国汉族人群中JAK2 46/1单倍型的tSNP rs12343867基因型与PV和ET患病易感性以及与JAK2 V617F突变的关系.方法 收集125例PV患者和87例ET患者及213名健康人全血DNA,用PCR结合高分辨熔解曲线法检测JAK2 rs12343867位点的基因型,并用简单随机抽样法从425份经熔解曲线法分析的标本中选取20份标本进行基因测序验证,x2分析PV和ET患者JAK2 46/1单倍型与MPNs患病风险的关系.结果 125例PV患者中C等位基因占62.8%,T等位基因占37.2%;87例ET患者C等位基因占45.4%,T等位基因占54.6%.20例随机选取的标本经基因测序法验证与高分辨熔解曲线法分析结果一致.JAK2 rs12343867 3种基因型分布差异有统计学意义(x2=78.69,P＜0.01).CC和CT基因型携带者均较TT型携带者发生MPNs的风险显著增加[比值比(OR)分别为18.56、3.60,95%可信限(CI)分别为8.70～39.58、2.28～5.69,P均＜0.01).PV组的等位基因频率在V617F阳性与阴性组之间的分布差异无统计学意义(x2=2.47,P=0.12);而在ET组中V617F阳性患者的等位基因C的检出率与V617F阴性组之间的分布差异有统计学意义(x2=7.75,P＜0.01).结论 JAK2 46/1单倍型是中国汉族PV和ET患者的易感基因.在ET患者中,个体携带的JAK2 46/1单倍型与后天获得JAK2 V617F突变相关.     

强生Vitros 950生化检测系统性能验证

目的对强生V itros 950生化检测系统进行性能验证。方法参照强生公司提供的验证方案,对总蛋白(TP)等11个项目的精密度、准确度、线性范围和临床参考区间进行验证,并与日立-罗氏系统进行相关性比较。结果TP、白蛋白(A lb)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰氨基转移酶(GGT)、乳酸脱氢酶(LDH)、尿素(Urea)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)、血糖(G lu)的准确度、精密度、可报告范围、临床参考区间均符合厂商说明;观察到有部分标本的Cr、UA检测结果与日立-罗氏系统有一定差异。强生V itros 950检测Cr可能由于体内肌酸浓度过高而导致底物耗竭,可以通过稀释的方法解决;UA检测中出现的干扰现象,可能是由于高浓度黄嘌呤的存在所引起。结论强生V itros 950的基本性能均符合公司声明的要求。     

强生Vitros 950生化检测系统性能验证

目的对强生Vitros 950生化检测系统进行性能验证。方法参照强生公司提供的验证方案，对总蛋白（TP）等11个项目的精密度、准确度、线性范围和临床参考区间进行验证，并与日立．罗氏系统进行相关性比较。结果TP、自蛋白（Alb）、丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ATP）、γ-谷氨酰氨基转移酶（GGT）、乳酸脱氢酶（LDH）、尿素（Urea）、肌酐（Cr）、尿酸（UA）、血糖（Glu）的准确度、精密度、可报告范围、临床参考区间均符合厂商说明；观察到有部分标本的Cr、UA检测结果与日立．罗氏系统有一定差异。强生Vitros950检测Cr可能由于体内肌酸浓度过高而导致底物耗竭，可以通过稀释的方法解决；UA枪测中出现的干扰现象，可能是由于高浓度黄嘌呤的存在所引起。结论强牛Vitros950的摹本性能均符合公司声明的要求。     

运用高分辨率熔解曲线技术检测痛风患者SLC22A12基因intron5(+4668C/T)多态性

Objective To investigate a new single nucleotid polymorphism (SNP) intron5(+4668C/T) in SLC22A12 in primary gout patients and the association between clinical characteristics and genotypes. Methods One hundred and one primary gout patients and 186 healthy subjects were recruited into this study. Blood pressure, body mass index (BMI) was recorded. Serum uric acid, glucose, lipid and creatinine were detected. DNA was extracted from peripheral blood to amplify the fragment located in intron 5. The genotypes of SLC22A12 can be detected with high-resolution melting (HRM) assay, followed by sequencing analysis. Chi-square test was used for statistical analysis. Results ① A new SNP in intron 5 of SLC22A12 was identi-fied successfully by HRM, which was defined as intron 5 (+4668C/T). CC, CT and TT genotypes were unam-biguously distinguished with HRM technology, which was fully concordant with sequencing. ②The genotypes of CC, CT and TT in male and female groups were 28.1%, 33.7%, 38.2% and 20.0%, 47.1%, 32.9%, respectively.③ However, no significant differences of genotype distribution were found concerning BMI, blood pressure, creatinine, total cholesterol and triglyceride in both male group and female group. But the serum uric acid levels in the CC genotype were significantly higher than those with the CT+TT genotypes. ④ The genotype frequencies of CC and CT+TT in high uric acid group were remarkably different from those in low uric acid group (21.2%, 78.8%,; 35.0%, 65.0%; P<0.05). Conclusion A new SNP has been successfully discovered with HRM technology with simplicity, rapidity and accuracy. T allele of intron 5 (+4668C/T) may be a genetic protective factor for hyperuricemia among Chinese population.     

高分辨熔解方法的建立及在真菌感染患者CYP2C19遗传多态性检测中的应用

目的 探讨高分辨熔解方法 (high resolution melting,HRM)检测真菌感染患者CYP2C19遗传多态性的可行性.方法 建立HRM方法 检测CYP2C19 * 2和CYP2C19 * 3两个多态性位点的基因型,并与传统方法 PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)及序列分析结果 相比较,进一步应用于47例真菌感染患者基因型的检测与分析.结果 2种方法 检测CYP2C19 * 2和CYP2C19* 3基因型结果 完全一致,与DNA序列分析结果 也相吻合,而HRM方法 操作更为简便,耗时更短.47份临床标本检测结果 显示,CYP2C19的2个多态性位点存在不同基因型,CYP2C19 * 1/ * 1所占比例为48.9%(23/47),CYP2C19 * 1/ * 2为25.5%(12/47),CYP2C19 * 1/ * 3为6.4%(3/47),CYP2C19 * 2/ * 2为12.8%(6/47),CYP2C19 * 2/ * 3为6.4%(3/47).结论 HRM方法 能有效检测CYP2C19基因多态性,且较PCR-RFLP方法 更为简便、快速.此外,CYP2C19基因在真菌感染患者中存在明显的遗传多态性.     

运用高分辨率熔解技术检测骨髓增殖性疾病患者JAK2 V617F突变

JAK2基因V617F突变与真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)、原发性骨髓纤维化(PMF)等慢性骨髓增殖性疾病(MPD)的病理变化明显相关,在新修订的2008年WHO分类系统中,有无JAK2突变已经成为慢性MPD主要的诊断指标[1].     

视网膜母细胞瘤中DLC-1启动子甲基化异常

目的探讨肝癌缺失基因1(deleted in liver cancer-1,DLC-1)启动子在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中的甲基化情况及与临床参数的关系。方法收集37例RB石蜡切片,4例正常眼部组织标本和2株RB细胞系(WERI-Rb1及Y79)。用甲基化敏感性高分辨率熔解(MS-HRM)法定量检测DLC-1甲基化情况,用亚硫酸氢盐测序对其进行验证,并用RT-PCR检测WERI-Rb1和Y79细胞系中DLC-1 mRNA的表达。结果 35.1%的RB中存在DLC-1启动子甲基化,而在正常眼部组织中未发现甲基化;WERI-Rb1和Y79检测出DLC-1 mRNA表达。DLC-1启动子甲基化与肿瘤分化、伴随其他肿瘤和家族史均无显著关系,但单侧RB患者中的DLC-1甲基化率明显高于双侧患者(P<0.05)。结论 RB患者DLC-1启动子存在一定程度的甲基化,DLC-1甲基化在RB的发生、发展中具有一定的作用。     

淫羊藿苷拮抗脂多糖炎症模型的体内和体外研究

目的 从前炎症细胞因子、炎性介质、黏附分子等环节,评价淫羊藿苷的抗炎作用。     

运用高分辨率熔解技术检测骨髓增殖性疾病患者JAK2 V617F突变

JAK2基因V617F突变与真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)、原发性骨髓纤维化(PMF)等慢性骨髓增殖性疾病(MPD)的病理变化明显相关,在新修订的2008年WHO分类系统中,有无JAK2突变已经成为慢性MPD主要的诊断指标[1].     

运用高分辨率熔解技术检测骨髓增殖性疾病患者JAK2 V617F突变

JAK2基因V617F突变与真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)、原发性骨髓纤维化(PMF)等慢性骨髓增殖性疾病(MPD)的病理变化明显相关,在新修订的2008年WHO分类系统中,有无JAK2突变已经成为慢性MPD主要的诊断指标[1].