沉默PDK1基因抑制卵巢癌细胞系SKOV3的增殖及侵袭

目的研究小干扰RNA(siRNA)沉默丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)基因对卵巢癌细胞系SKOV3增殖、迁移、侵袭以及克隆形成能力的影响,并初步探讨其机制。方法采用PDK1 siRNA及control siRNA分别瞬时转染干扰实验组和阴性对照组SKOV3细胞。运用Western blot及real-time PCR验证转染效率后,CCK8法、平板克隆形成实验检测细胞增殖及克隆能力;Transwell小室法及划痕实验检测细胞侵袭及迁移能力;流式细胞计量术探索细胞周期及凋亡情况。结果实验组细胞增殖及克隆(P0.01),侵袭及迁移能力(P0.05)显著低于对照组;SKOV3细胞内PDK1基因沉默后缩短了细胞复制期并提高了其早期凋亡能力(P0.01)。结论沉默PDK1基因可显著抑制SKOV3细胞的增殖、迁移、侵袭以及克隆形成能力,并可缩短细胞S期,增加细胞凋亡率。     

Meigs’综合征免疫特征及CD4~+T细胞糖酵解相关基因表达水平分析

目的探讨Meigs’综合征(MS)患者的外周免疫特征以及CD4~+T细胞糖酵解相关基因的表达水平。方法分析2010至2018年9例MS(MS组),81例卵巢卵泡膜瘤-纤维瘤(OTF组),30例卵巢癌(OC组)和30例健康对照(HC组)的临床特征和实验室指标参数,并检测1例MS和1例OTF患者手术前后,9例卵巢癌(OC组)以及10例健康对照(HC)的外周血CD4~+T细胞的糖酵解相关基因(HIF1α、GLUT1、ENO1、LDHα)的表达水平。结果 MS组患者血清CA125和HE4水平显著高于OTF组(P0.000 1,P0.05)和HC组(P0.000 1,P0.05),而血清HE4较OC组显著降低(P0.00 1),血清CA125和HE4水平均与腹水的量呈正相关(P0.000 1,P0.01);MS组外周血淋巴细胞绝对数和百分比较OTF组(P0.05,P0.01)和HC组(P0.05,P0.01)显著降低,并且显著高于OC组(P0.01,P0.05),此外,NLR、PLR和SII较OTF组(P0.05,P0.001,P0.001)和HC组(P0.05,P0.001,P0.01)显著升高,且NLR显著低于OC组(P0.01),PLR和SII均与腹水的量呈正相关(P0.01, P0.05);术前MS患者HIF1α表达水平显著高于OTF患者(P0.000 1),OC组(P0.01)和HC组(P0.01),GLUT1和LDHα则显著低于OTF患者(P0.000 1,P0.05),OC组(P0.01,P0.01)和HC组(P0.01,P0.05),ENO1表达水平较OC组(P0.01)和HC组(P0.01)显著降低;MS患者这4个基因的表达水平在手术切除肿瘤后倾向于恢复正常水平(P0.000 1)。结论 MS患者外周免疫功能紊乱,且CD4~+T细胞糖酵解过程存在障碍。     

γδT细胞及其亚群在卵巢癌中的表达及其临床意义

目的探讨γδT细胞及其主要亚群在卵巢癌患者肿瘤组织中的表达及其与卵巢癌患者临床病理特征间的关系。方法流式细胞术检测15例卵巢癌组织、10例卵巢良性肿瘤组织和4例正常卵巢新鲜组织中γδT、Vδ1 T、Vδ2 T细胞比例;免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测上皮性卵巢癌(40例)、卵巢交界性肿瘤(20例)和卵巢良性肿瘤(20例)组织切片中γδT、Vδ1 T细胞的表达,比较卵巢癌样本中阳性表达细胞数与患者年龄、肿瘤体积、病理类型、FIGO分期、组织学分化和淋巴结转移的关系。结果卵巢癌组织γδT、Vδ1 T细胞的比例显著高于卵巢良性肿瘤组织(P0.01)和正常卵巢组织(P0.01);Vδ2 T细胞在卵巢良性肿瘤组织浸润比例高于卵巢癌组织(P0.01);免疫组化染色发现卵巢癌组织中γδT、Vδ1 T细胞数量显著高于卵巢交界性肿瘤组织(P0.01)和卵巢良性肿瘤组织(P0.01);卵巢癌组织中γδT、Vδ1 T细胞数与患者FIGO分期和淋巴结转移均有统计学关系(P0.05);另外,卵巢癌中γδT细胞数与肿瘤体积具有统计学关系(P0.05)。结论卵巢癌组织中具有较高水平的γδT细胞,尤其是亚群Vδ1 T细胞,可能与卵巢癌患者疾病临床进展有重要联系。     

卵巢癌细胞促进外周血CD4+T细胞糖酵解代谢

目的探讨卵巢癌细胞对外周血CD4~+ T细胞糖酵解代谢及功能的影响。方法建立健康人CD4~+ T细胞与卵巢癌细胞SKOV3共培养体系,用实时荧光定量PCR检测共培养后CD4~+ T细胞糖酵解相关8个基因(mTORC1,HIF1α,GLUT1,GPI,ENO1,PKM2,LDHα,PDK1)的mRNA表达水平,比色法检测葡萄糖摄取和葡萄糖酵解水平,流式细胞术检测CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ T细胞的表达比例,渗入法检测CD4~+ T细胞的增殖水平。实时荧光定量PCR检测10例卵巢癌患者、10例卵巢良性肿瘤患者及10例健康人对照者外周血CD4~+ T细胞糖酵解相关8个基因的表达水平。结果与CD4~+ T细胞单独培养组相比,SKOV3共培养组CD4~+ T细胞中糖酵解相关8个基因的表达水平均升高(P均0.01),葡萄糖摄取及葡萄糖酵解水平增高(P0.05),CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ T细胞的表达比例上升(P0.05),CD4~+ T细胞增殖水平下降(P0.05)。此外,卵巢癌患者外周血CD4~+ T细胞中糖酵解相关的8个基因的mRNA表达水平显著高于卵巢良性肿瘤患者和健康人对照者(P均0.05)。结论卵巢癌细胞促进外周血CD4~+ T细胞糖酵解代谢水平增高,CD4~+ T细胞糖酵解代谢的改变可能与其分化和功能相关。     

肺癌患者肿瘤浸润淋巴细胞中IL-17的分布特征及临床意义

目的:探讨肺癌患者肿瘤浸润淋巴细胞中IL-17的分布特征及其临床意义。方法:流式细胞术检测15例肺癌组织和15例配对远癌正常组织中浸润淋巴细胞的IL-17表达水平。结果:肺癌患者肿瘤组织浸润淋巴细胞中IL-17A显著高于远癌正常组织（P＜0.000 1）,肿瘤组织中浸润产生IL-17的CD3+CD4+T细胞（Th17）（P＜0.001）、CD3+CD8+T细胞（Tc17）（P＜0.001）、γδT细胞（γδT17）(P＜0.000 1)均高于远癌正常组织;肺癌患者肿瘤组织浸润Th17和Tc17水平无明显差异（P＞0.05）,而γδT17水平显著高于Th17（P＜0.001）和Tc17（P＜0.000 1）;肿瘤组织中浸润的γδT17表达水平和淋巴结转移相关（P＜0.05）。结论:IL-17和肺癌发生相关,其早期主要来源是肿瘤浸润的γδT细胞;γδT17数量与淋巴结转移有关,提示γδT17细胞可能参与肺癌病程的进展。     

丙酮酸脱氢酶激酶1在卵巢癌中的表达及临床意义

目的:研究肿瘤代谢重组中糖代谢基因丙酮酸脱氢酶激酶1（Pyruvate dehydrogenase kinase 1, PDK1）在卵巢癌（Ovarian Cancer, OC）组织中的表达水平及其与临床病理特征和患者预后的关系。方法:实时荧光定量RT-PCR检测PDK1在卵巢癌细胞系SKOV3及人卵巢上皮细胞系HOSEpiC中mRNA表达水平;实时荧光定量RT-PCR检测PDK1在卵巢良性肿瘤（Benign ovarian tumor, BOT）及卵巢癌患者组织中mRNA表达水平;免疫组织化学染色法检测PDK1在卵巢良性肿瘤及卵巢癌患者组织中蛋白表达水平,并采用单因素和多因素logistics回归分析PDK1表达与OC临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier法进行生存分析。结果:PDK1 mRNA在卵巢癌细胞系SKOV3中的平均表达水平（0.822±0.019）较人卵巢上皮细胞系HOSEpiC（0.099±0.002）显著升高（t=38.60,P=0.0007）;卵巢癌组织中PDK1 mRNA平均表达水平（0.925±0.192）显著高于卵巢良性肿瘤组织（0.355±0.126）（t=2.411,P=0.022）;免疫组织化学染色法示PDK1主要表达于肿瘤细胞胞浆内,呈淡黄色到棕褐色颗粒状,且卵巢癌组织切片中PDK1平均表达水平明显高于卵巢良性肿瘤组织（χ2=33.874,P＜0.001）;单因素及多因素logistics回归分析,PDK1高表达与淋巴结转移明显相关,与患者年龄、肿瘤大小、肿瘤分化程度、单双侧发病、包膜是否完整无明显相关,且淋巴结转移是影响PDK1在卵巢癌组织中表达的独立危险因素。进一步生存分析示高表达PDK1的患者具有较差的预后（χ2=4.455,P=0.035）。结论:PDK1在卵巢癌组织中高表达,其作为糖代谢关键酶丙酮酸脱氢酶（Pyruvate dehydrogenase, PDH）抑制酶,参与肿瘤细胞代谢重组的过程,在卵巢癌进展中可能发挥促进作用,可作为判断OC不良预后的参考指标。     

肺炎伴巨细胞病毒感染患儿外周血免疫功能分析

目的探讨肺炎伴巨细胞病毒感染患儿的外周血免疫功能状态。 方法选取2012年1月至2016年9月南京医科大学第一附属医院收治的2个月～2岁肺炎患儿共154例，按照巨细胞病毒（CMV）病原学检测结果分为CMV阳性组（90例）和CMV阴性组（64例），对两组患儿的临床资料和实验室指标进行回顾性分析。比较两组肺炎患儿的外周血细胞计数以及住院时间，根据血细胞参数分析系统性炎症反应相关指标包括中性粒细胞/淋巴细胞（NLR）、血小板/淋巴细胞（PLR）、淋巴细胞/单核细胞（LMR）和系统性免疫性炎症指数（SII）（中性粒细胞/淋巴细胞×血小板）的差异。 结果与CMV阴性组患儿相比，CMV阳性组患儿外周血白细胞[（7.83 ± 2.92）× 10⁹/L vs. （9.59 ± 4.03）× 10⁹/L，Z =－4.291、P < 0.001]、单核细胞[（0.63 ± 0.35）× 10⁹/L vs. （0.78 ± 0.47）× 10⁹/L，Z =－3.104、P = 0.002]、中性粒细胞[（1.73 ± 1.60）× 10⁹/L vs. （2.64 ± 1.65）× 10⁹/L，Z =－5.017、P < 0.001]和血小板[（331.50 ± 140.50）× 10⁹/L vs. （364.00 ± 163.80）× 10⁹/L，Z =－2.013、P = 0.044]计数均显著降低，差异均有统计学意义。CMV阳性组患儿NLR[（0.35 ± 0.35） vs. （0.51 ± 0.50），Z =－3.388、P < 0.001]和SII[（107.10 ± 133.16） vs. （182.40 ± 173.3），Z =－4.029、P < 0.001]较CMV阴性组患儿亦显著降低，差异均有统计学意义。CMV阳性组患儿较CMV阴性组患儿住院时间延长[（9.12 ± 2.88） vs. （8.28 ± 1.79）d，Z =－2.063、P = 0.039]，住院时间超过2周的患儿比例亦升高（14.44% vs. 1.56%，χ² = 7.510、P = 0.006），差异均有统计学意义。 结论伴巨细胞病毒感染的肺炎患儿存在外周血细胞免疫功能紊乱。     

IL-17A在卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的探讨炎症因子IL-17A在卵巢癌组织中的表达及其与卵巢癌患者临床病理特征间的关系。方法免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测上皮性卵巢癌(34例)、卵巢交界性肿瘤(23例)、卵巢良性肿瘤(24例)石蜡组织切片中IL-17A的分布及表达情况,分析IL-17A表达与卵巢癌患者年龄、肿瘤大小、病理分型、临床分期、淋巴结转移等临床病理特征间的关系。结果免疫组化染色发现IL-17A主要表达在淋巴细胞胞浆,肿瘤细胞几乎不表达。卵巢癌患者组织中IL-17A阳性率为64.7%,卵巢交界性肿瘤和卵巢良性肿瘤患者组织中IL-17A阳性率分别为21.7%、8.3%。卵巢癌患者组织中IL-17A阳性表达水平明显高于卵巢交界性肿瘤、卵巢良性肿瘤患者,差异具有统计学意义(P0.001;P0.000 1)。IL-17A表达与卵巢癌患者病理分化水平、淋巴结转移相关(P0.05),而与年龄、肿瘤大小、病理类型、临床分期无关。结论卵巢癌患者组织中高表达IL-17A可能参与卵巢癌患者疾病的进程,有望作为卵巢癌临床预后辅助预测指标。