2006年版CLSI/NCCLS有关抗生素敏感试验操作标准的更新要点

2006年1月美国临床和实验室标准化协会(the Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI,原名NCCLS)公布的第16版抗生素敏感试验操作标准(M100-S16)对15版进行了更新,以取代2005年及以前版本的内容。其主要变化源于2005年召开的抗生素药物敏感试验的专业会议。第16版的更新要点如下:(1)再次阐明奇异变形杆菌ESBLs检测的筛选与确认试验;(2)新增铜绿假单胞菌、不动杆菌属、洋葱伯克霍尔德菌、嗜麦芽窄食假单胞菌的纸片扩散和MIC解释标准的4个独立表格;(3)删除达托霉素(daptomycin)纸片扩散法的解释标准,修改了葡萄球菌属和链球菌属(除肺炎链球菌外)关于达托霉素琼脂稀释法药敏试验的建议,指出肠球菌属达托霉素琼脂稀释试验尚未被确认; (4)增加了万古霉素敏感性降低之金黄色葡萄菌的万古霉素BHI琼脂筛选试验;(5)修正了万古霉素对葡萄球菌属的     

microRNA-1271靶向调控白血病细胞CYLD蛋白的表达

目的探讨人白血病细胞中微小RNA(microRNA)-1271对CYLD蛋白表达的调控作用。方法 qRT-PCR检测microRNA-1271在不同的人白血病细胞系、临床初诊未治的几种类型原代白血病细胞、正常人外周血单个核细胞中的表达差异,利用 Targetscan 信息学预测软件预测 microRNA-1271靶向CYLD基因,构建携带靶基因野生型及突变型3’非翻译区(3’UTR)(缺失了整段预测的microRNA-1271结合序列)的双荧光素酶报告基因质粒,采用脂质体 Lipo-fectamine 3000包裹双荧光素酶重组质粒及 microRNA-1271模拟物(mimic)或阴性对照,共转染HEK293A细胞,应用双荧光素酶报告基因检测试剂盒测定荧光素酶活性。 FAM标记的microRNA-1271抑制物和阴性对照分别核转染至人白血病细胞系K562细胞,Western blot法检测CYLD蛋白水平的表达变化。结果 microRNA-1271在不同人白血病细胞系以及临床初诊未治的原代白血病细胞中的表达均明显高于正常人外周血单个核细胞,双荧光素酶报告基因实验验证CYLD是 microRNA-1271的潜在靶基因;K562细胞中转染microRNA-1271抑制物下调 microRNA-1271后, Western blot法检测结果显示CYLD蛋白水平明显上调。结论人白血病细胞中microRNA-1271的表达上调,下调microRNA-1271后可以促进靶基因CYLD蛋白的表达, microRNA-1271有可能成为白血病治疗的新靶点。     

荧光定量PCR检测异尖线虫类病原体

目的运用荧光定量PCR法检测异尖线虫类病原体。方法于鱼类内脏中检获6种异尖线虫类幼虫:抹香鲸异尖线虫、简单异尖线虫、内弯对盲囊线虫、带鱼针蛔线虫、灰海鳗对盲囊线虫和台湾海峡鱼类中一优势种对盲囊线虫。提取各虫体DNA,PCR扩增ITS-2序列,测序并进行数据库比对。依据测序结果设计特异引物,常规PCR检验引物特异性。将ITS-2序列扩增产物回收、纯化后经T克隆转入大肠埃希菌DH5α,提取重组质粒,鉴定后作为标准品模板建立荧光定量PCR标准曲线,并做敏感性和重复性试验。结果构建的荧光定量PCR标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数均在0.998以上。重复性实验中,6种虫体对应的变异系数(cv)最小值为0.18%,最大值为2.80%,试验间平均cv最小值为0.55%,最大值为1.94%,无非特异性扩增,溶解曲线的特异性和重复性良好。灵敏度实验中,可检出的最低模板浓度为1×102拷贝/μl,比常规PCR灵敏度高100倍。结论初步建立了SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测异尖线虫类病原体的方法 。     

大蒜素对MRSA和白念珠菌后效应的研究

目的 测定大蒜素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和白念珠菌(C.alb)的最低抑菌浓度(MIC)、抗菌药后效应(PAE)和抗菌后亚抑菌浓度效应(PASME).方法 取临床分离的MRSA和C.alb各1株,以肉汤稀释法测定大蒜素MIC;以菌落计数法测定菌落形成单位(CFU),根据CFU做生长曲线,计算PAE和PAS...     

hTERT核心启动子驱动的条件复制型腺病毒载体的构建及鉴定

目的构建并鉴定一种新型人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子驱动的条件复制型腺病毒载体。方法采用PCR的方法克隆腺病毒E1区基因(E1A,E1B55K)、E1B的启动子(E1Bp)以及人端粒酶逆转录酶亚基启动子(hTERTp),以及2个目的基因:人GM-CSF和GFP(GreenFluorescenceProtein,GFP)。采用一系列分子生物学方法构建pShuttle-GFPSV55K穿梭质粒,应用此穿梭质粒与AdEasy-1腺病毒DNA在BJ5183细菌内重组得到重组腺病毒质粒,将其转染293细胞获得Ad-GFPSV55K重组腺病毒。PCR法鉴定重组腺病毒,噬斑形成实验测病毒滴度。结果经过酶切鉴定成功地构建了分别携带GM-CSF基因和GFP报告基因的腺病毒载体,病毒滴度为7×1010pfu/ml。结论成功获得由hTERT启动子驱动的条件复制型腺病毒载体,为肿瘤的基因治疗打下良好的基础。     

Xpert艰难梭菌检测系统的临床应用评价

目的评估Xpert艰难梭菌检测系统的临床应用价值。方法选取43份腹泻粪便标本,采用厌氧培养法、VIDAS检测A/B毒素法和Xpert艰难梭菌检测系统检测艰难梭菌,以产毒培养法作为金标准对检测方法进行评价,并比较不同检测方法对临床标本检测结果的一致性。通过自配027型标准菌株模拟粪便标本,验证Xpert艰难梭菌检测系统筛选027型流行株的能力。结果以产毒培养法为金标准,Xpert艰难梭菌检测系统的敏感性和特异性分别为90.9%和93.8%,阳性和阴性预测值分别为83.3%和96.8%。与产毒培养法结果一致性检验Kappa值为0.822(P0.05),与VIDAS检测A/B毒素法结果一致性检验Kappa值为0.419(P0.05);027型标准菌株模拟粪便标本检测结果阳性并报告为027型。结论 Xpert艰难梭菌检测系统能够快速准确地检测粪便标本中的艰难梭菌相关基因,且能准确报告027型高产毒力菌株。     

甜菜碱对金黄色葡萄球菌生物膜形成抑制与分散的作用

目的研究金黄色葡萄球菌生物膜形成及甜菜碱对其抑制与分散的作用。方法采用结晶紫染色法分别测定终浓度为1.0 g/L的甜菜碱对20株金黄色葡萄球菌生物膜形成的抑制能力和甜菜碱对金黄色葡萄球菌生物膜的分散能力。结果 20株金黄色葡萄球菌均能形成生物膜,其中甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA)培养24 h时形成生物膜吸光度值(A_(590 nm))达峰值,为1.99±0.53;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)培养48 h时形成生物膜A_(590 nm)达峰值,为1.13±0.47。加入甜菜碱共培养后,MSSA培养24 h后生物膜A_(590 nm)为1.74±0.61,MRSA培养48 h后生物膜A_(590 nm)为0.40±0.12,与对照组相比差异均有统计学意义(t值分别为2.43和5.84,P均0.05)。当生物膜形成后加入甜菜碱,与对照组相比,MSSA和MRSA的生物膜A_(590 nm)差异无统计学意义(P0.05)。结论 1.0 g/L甜菜碱对金黄色葡萄球菌生物膜的形成具有良好的抑制作用,但不能分散已经形成的生物膜。     

白念珠菌和非白念珠菌血症的流行病学、危险因素与预后

目的：探讨白念珠菌和非白念珠菌血症的流行病学、危险因素和预后。方法：回顾分析南京医科大学第一附属医院2016年1月—2020年12月171例念珠菌血症患者临床资料。通过卡方检验和二元Logistic回归分析对白念珠菌组和非白念珠菌组血流感染患者的临床危险因素进行比较,确定与念珠菌感染有关的危险因素,并进一步分析与念珠菌血症预后相关的独立危险因素。结果：光滑念珠菌是念珠菌血症患者中最常见的分离菌（28.65%）,其次为白念珠菌（28.07%）、热带念珠菌（21.64%）、近平滑念珠菌（18.13%）和其他念珠菌（3.51%）,非白念珠菌占71.93%（123/171）。多因素分析显示机械通气（OR=2.588,95%CI：1.119~5.987,P=0.026）是白念珠菌血症的独立危险因素。所有念珠菌对两性霉素B均敏感,白念珠菌、光滑念珠菌和近平滑念珠菌对氟康唑的敏感率分别为91.8%、91.7%和90.3%,热带念珠菌的耐药性相对较高。171例念珠菌血症患者中,48例死亡,病死率为28.07%。多因素分析显示年龄（OR=1.027,95%CI：1.004~1.050,P=0.022）、深静脉置管（OR=2.489, 95%CI：1.033~5.996,P=0.042）和入住ICU（OR=2.921,95%CI：1.020~8.362,P=0.046）是与病死率相关的独立危险因素。结论：本院念珠菌血症的念珠菌分布与其他医院存在差异。除热带念珠菌外,绝大多数念珠菌对抗真菌药物敏感性较高,为经验抗真菌药物的选择提供有用信息。     

质谱直接鉴定血培养阳性菌的前处理方法评估

目的：评估基于分离胶的两种前处理方法联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix?assisted laser desorption ionization?time of flight mass spectrometry,MALDI?TOF MS）直接鉴定血培养阳性病原菌的临床应用价值。方法：收集2020年5—11月南京医科大学第一附属医院血培养阳性标本302例,分离胶?皂甙法和分离胶沉淀法分别处理后对阳性血培养标本进行快速鉴定,结果分别与培养鉴定结果比较。结果：分离胶?皂甙法可在45 min内完成鉴定,分离胶沉淀法需20 min;单数菌感染标本288例,使用两方法直接鉴定的准确率均为86.81%（250/288）,其中两方法分别鉴定革兰阴性杆菌、革兰阳性球菌、革兰阳性杆菌、真菌的准确率差异无统计学意义（P > 0.05）;复数菌感染标本14例,仅分离胶?皂甙法1例与培养鉴定结果一致,其余标本两种方法均仅可准确鉴定其中的一种细菌。结论：两种基于分离胶的前处理方法联合质谱均可直接、快速、准确地鉴定血培养病原菌,分离胶沉淀法可作为本实验室血培养快速鉴定常规的前处理方法。     

社区获得性血流感染病原菌分布及预后危险因素分析

目的：分析社区获得性血流感染（community?acquired bloodstream infection,CABSI）的病原菌分布、耐药情况及预后危险因素,为临床医师诊断及治疗提供依据。方法：收集2017年1月—2019年12月CABSI患者分离的病原菌及临床资料,并按治疗28 d转归分为死亡组和存活组。用χ2检验进行单因素分析,与死亡相关的变量采用Logistic二元回归进行多因素分析。结果：292例CABSI患者分离病原菌323株,其中革兰阴性菌192株,革兰阳性菌118株,真菌9株和厌氧菌4株。革兰阴性菌对头霉素类、碳青霉烯类和氨基糖苷类抗菌药物耐药率均在10%以下,金黄色葡萄球菌对庆大霉素和莫西沙星的耐药率小于20%,链球菌属对青霉素类耐药率为6.7%。292例患者中55例死亡,病死率为18.8%。单因素分析显示脑梗死、感染性休克、肺炎克雷伯菌感染、α溶血链球菌感染、降钙素原（procalcitonin,PCT）升高与患者死亡有关。脑梗死、感染性休克和PCT水平升高是CABSI患者预后相关的独立危险因素（P < 0.05）。结论：CABSI患者病原菌对临床常用抗菌药物耐药率较低。脑梗死、感染性休克和PCT升高能显著增加患者病死率,临床医师应及时采取相应防治措施。