shRNA介导黑素瘤A375细胞Cbl-b基因沉默前后蛋白质组学分析

目的 分析shRNA介导黑素瘤A375细胞 Cbl?b基因沉默前后差异表达蛋白。方法 使用非标记定量蛋白质组学技术鉴定分别用Cbl?b shRNA慢病毒载体（Cbl?b shRNA组）和对照慢病毒载体（对照组）转染的A375细胞的差异表达蛋白。采用生物信息学方法对筛选的差异蛋白进行基因本体富集及京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。Western 印迹验证差异蛋白（EphA2、GSK3β）表达和Cbl?b shRNA沉默后两组p?AKT表达。采用SPSS 23.0软件进行统计分析,两组间蛋白丰度比较采用两样本t检验。基因本体及KEGG富集分析结果采用Fisher精确概率法检验。结果 共鉴定3 449种蛋白,筛选出Cbl?b shRNA组和对照组差异表达蛋白74个。与对照组相比,Cbl?b shRNA组52个蛋白表达上调,22个下调。差异蛋白基因本体富集分析发现前5位显著富集生物学过程为整合素介导细胞黏附、单一生物代谢过程、整合素介导细胞黏附调节、蛋白质靶向线粒体调节、核酸代谢过程;前5位显著富集分子功能为DNA结合、2,2铁硫簇合物结合、信号受体活性、钙黏蛋白结合、细胞黏附分子结合;前5位显著富集的细胞组分为核小体、DNA包装复合体、光感器连接纤维、DNA-蛋白质复合体、胞外区部分。京都基因与基因组百科全书通路富集分析发现,前5位与黑素瘤相关的显著富集通路包括叶酸生物合成、轴突导向、细胞外基质受体相互作用、黏合连接、Wnt 信号通路。Western 印迹检测显示,Cbl?b shRNA组EphA2相对表达水平降低（0.369,以对照组表达水平为1计算）,GSK3β表达增加（3.524）,该结果与蛋白质组学检测结果一致;p?AKT相对表达水平降低（0.453）。结论 Cbl?b可能通过多种生物学通路参与黑素瘤发病;EphA2/PI3K/AKT信号通路可能是Cbl?b参与黑素瘤形成的重要机制之一。     

硬镜联合鞘管经T管窦道治疗胆道残余结石的经验和存在问题

【摘要】目的探讨应用硬质胆道镜联合鞘管经T管窦道治疗复杂胆道残余结石的临床经验和存在问题。方法2014年3月~2016年5月,对34例复杂胆道残余结石患者,在连续腰硬麻下行硬质胆道镜联合鞘管经T管窦道探查、取石治疗,对其临床资料进行分析。结果手术操作均成功取石,手术时间45~135 min,平均80 min,取尽结石33例,结石残留1例;无出血、窦道撕裂、胆管穿孔、急性胆管炎等并发症,术后随访4~30月均无发热、腹痛、黄疸等症状,转氨酶、胆红素正常范围。残留结石患者术后18月复查CT见结石大小及位置无明显变化,余患者B超检查无结石复发。结论硬质胆道镜经T管窦道治疗肝内胆管残余结石临床实践安全、可行,联合鞘管取石效率更高,但依赖术者的经验和技巧,有一定的不确定性。     

临床数据交换标准协会体系及其应用现状

临床数据交换标准协会（CDISC）是全球性的非营利性标准开发组织,其基于临床研究的共识创建了一套标准体系,主要包括核心标准、数据交换标准、受控术语集和治疗领域标准四大方面,各类标准在研究中的角色不同,贯穿于研究流程的各个环节。伴随着自动化软件的开发,国际监管机构和大型药物研发企业已实现CDISC标准的应用,该标准体系在国内逐渐得到认可和推广,专业技术服务亦正在逐步开展和普及。本文详细介绍了CDISC标准体系下的各类标准及其关系和应用流程,总结国内外应用现状并提出建议,以期为相关研究的标准化建设提供重要参考。     

鼻旁牙源性皮瘘一例

<正>临床资料患者,女,85岁。因左鼻旁结节伴间断流脓2年来我院就诊。2年前,患者无明显诱因左鼻梁旁出现一黄豆大皮肤硬结,轻度痒痛,皮损缓慢增大,反复破溃、流脓、结痂,多次院外诊治,诊断不详,予"消炎药"等治疗后可缓解,未痊愈。1年前院外诊断"化脓性肉芽肿",行激光治疗,术后3个月复发。既往有高血压、冠心病史10余年,否认近10年牙痛史,否认外伤史、手术史,否认家族遗传病史及类似疾病史。查体:一般情况可,心肺腹检查未见明显异常。     

ERα基因启动子甲基化状态对乳腺癌细胞系MTA1 mRNA和蛋白表达水平的影响

目的: 探讨乳腺癌细胞系中雌激素受体α(ERα)启动子甲基化状态的改变对其MTA1 mRNA和蛋白表达水平的影响,阐明ERα启动子去甲基化对MTA1基因表达的作用。方法: 用去甲基化药物5-Aza-dC处理ERα启动子高甲基化状态的MDA-MB-435s和低甲基化状态的MDA-MB-231乳腺癌细胞系为5-Aza-dC处理组,同时设 2种细胞系的未处理组为对照组。甲基化特异性PCR(MSP)法检测各组细胞ERα启动子甲基化状态。Western blotting法检测各组细胞MTA1蛋白表达水平,RT-PCR法检测各组细胞MTA1 mRNA表达水平。结果: 5-Aza-dC逆转了MDA-MB-435s和MDA-MB-231细胞系ERα启动子甲基化状态; MDA-MB-435s乳腺癌细胞系中,与对照组比较,5-Aza-dC处理组MTA1 mRNA及蛋白表达水平均下调(P<0.05);MDA-MB-231乳腺癌细胞系中,与对照组比较,5-Aza-dC处理组MTA1 mRNA及蛋白表达水平亦均下调(P<0.05)。结论: 改变MDA-MB-435s和MDA-MB-231乳腺癌细胞系ERα基因启动子甲基化状态后,MTA1 mRNA和蛋白表达均下降,提示ERα启动子去甲基化后可以下调MTA1基因的表达,二者之间存在调控关系。     

皮肤血管内NK/T细胞淋巴瘤五例分析

目的 提高对皮肤血管内NK/T细胞淋巴瘤（CIVNKTC）的认识。 方法 回顾分析5例CIVNKTC的临床资料、组织病理学、治疗及预后,并进行讨论。 结果 5例患者中男1例,女4例,发病年龄38 ～ 83岁（平均56.2岁）,均以多发皮肤斑块或结节为初发表现。组织病理显示：真皮及皮下组织内可见血管扩张,扩张的血管内可见异形淋巴样细胞,细胞核大,可见1 ~ 2个小核仁。肿瘤细胞表达CD3ε,细胞毒蛋白（T细胞限制性细胞内抗原-1,粒酶B和穿孔素）和 EB病毒编码的小RNA,不表达细胞角蛋白CK,CD20,CD79A,CD4,CD8。2例患者表达CD56。5例患者中2例进行化疗,3例未治疗。经过24个月的随访,4例死亡,仅有1例带病生存。 结论 CIVNKTC是一种罕见的结外霍奇金淋巴瘤,具有独特的组织学和免疫表型特点,病程凶险,预后极差。     

坏疽性脓皮病1例

1临床资料 患者男,54岁.入院前20余天开始无明显诱因双足皮肤出现多处红肿,伴疼痛,并迅速出现溃烂,在当地医院诊疗(具体不详),无明显效果,溃烂及疼痛加重,遂至本院就诊.患者既往体健,否认有高血压、糖尿病等系统性疾病史,家族史无特殊.体检:T 38.5℃,血压正常,浅表淋巴结无明显肿大,不能正常站立和行走,其它系统检查未见明显异常.     

miRNA-21对人黑素瘤细胞系A375中BRAF与p27基因表达的影响

目的:确定miRNA-21对人黑素瘤细胞系A375增殖的影响。方法:采用90 nmol/L miRNA-21抑制剂,经Lipofectamine2000脂质体转染A375细胞系;用RT-PCR检测A375细胞BRAF和p27基因mRNA表达;蛋白印迹检测A375细胞BRAF和p27蛋白表达。结果:经转染miRNA-21抑制剂的A375细胞中BRAF和p27基因mRNA表达水平没有明显变化,BRAF蛋白表达下降了31%,p27蛋白表达上升了48%。结论:miRNA-21可能在转录后水平间接调控BRAF和p27基因表达而促进人黑素瘤细胞系A375增殖。     

血糖控制水平对ICU危重症患者近期预后的影响

目的探讨不同血糖控制水平对ICU危重症合并应激性高血糖患者近期预后的影响。方法对169例合并应激性高血糖的ICU危重症患者,随机分为强化血糖控制组（强化组,n=89）和常规血糖控制组（常规组,n=80）,强化组血糖控制目标为4．0～6．0mmol,／L,常规组为8．0-10．0mmol／L。比较2组近期预后。结果常规血糖控制组的ICU住院时间、呼吸机带机时间与强化组比较有显著降低（P〈0．05）,院内感染、多器官功能衰竭综合征（MODS）发生率组间差异无统计学意义（P〉0．05）,强化组病死率及低血糖发生率较常规组增高,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论积极管理危重症患者合并的应激性高血糖有利于减少并发症的发生．目标血糖在8．0～10．0mmol／L为宜。