带TAP标签的癌蛋白SET真核载体的构建及其表达

背景与目的: 为研究三氯乙烯诱导的差异蛋白SET在肝细胞L-02中的相互作用,构建带串联亲和纯化(tandem affinity purification,TAP)标签融合表达的真核表达载体pcDNA3.1/SET-TAP。 材料与方法: 从L-02肝细胞中提取总RNA,采用RT-PCR法扩增SET基因,从质粒中扩增得到TAP基因,采用重叠PCR法将基因SET与TAP连接成SET-TAP,双酶切后纯化序列定向克隆至pcDNA3.1/zeo(+)并转化E.coli DH 5α ,取阳性克隆进行酶切和测序鉴定,重组质粒瞬时转染L-02肝细胞进行表达,Real Time-PCR和Western blotting检测融合蛋白的表达。 结果: 经双酶切和DNA测序鉴定,证实pcDNA3.1/SET-TAP真核表达载体构建成功,将该载体转染L-02细胞后,融合蛋白在肝细胞中获得高效表达。 结论: 该结果为研究SET在三氯乙烯致肝细胞毒性的蛋白质相互作用以及三氯乙烯致机体损伤的机制奠定了基础。     

肠缺血再灌注损伤后肠上皮RSpo1表达及其意义

目的 探讨R-Spondinl(RSpol)在肠缺血再灌注损伤后肠道的表达及其意义.方法 健康雄性昆明小鼠50只,分为对照组(10只)和实验组(40只).对照组小鼠仪作剖腹手术,实验组小鼠麻醉后夹闭肠系膜动脉20min后松夹,分为再灌流6 h(A组)、12 h(B组)、24 h(C组)和48 h(D组).采用ELISA和RT-PCR方法检测小肠组织RSpol的表达.结果 RT-PCR和ELISA结果均显示RSpol在肠缺血再灌注损伤后6h表达较对照组显著降低(P<0.05),12 h表达逐渐增加,在24 h达到最高并显著高于对照组(P<0.05),随后其表达迅速下降,在48 h显著低于对照组(RT-PCR:P<0.05:ELISA:P<0.01).结论 缺血再灌注损伤能抑制肠道内分泌细胞早期RSpol表达,诱导中期RSpol表达,RSpol能促进肠道上皮干细胞增殖分化,参与肠黏膜受损后的修复过程.     

肠外瘘152例临床治疗分析

目的 探讨肠外瘘的综合治疗措施.方法 对我院1992年1月～2007年12 月间收治的152例肠外瘘患者的临床资料进行回顾性分析.结果 致瘘的主要原因为腹部手术后并发症(127例,83.6%),其余为腹部外伤、炎症性肠病、腹部肿瘤等;经基本治疗后瘘口自愈64例(42.1%),58例行确定性手术治愈,总治愈率80.3%,确定性手术成功率96.7%,全组死亡率7.9%.结论 肠外瘘应采取综合治疗,包括充分引流、控制感染、营养支持、生长抑素、生长激素的序贯应用和适时的确定性手术.     

2型糖尿病并发视网膜病变患者血清缺血修饰白蛋白和超敏C-反应蛋白浓度的变化

目的 探讨2型糖尿病并发视网膜病变(DR)患者血清缺血修饰白蛋白(IMA)和超敏C-反应蛋白(hs-CRP)浓度的变化.方法 病例对照研究.采用酶联免疫吸附测定法和速率散射比浊法检测79例DR组患者血清IMA和hs-CRP浓度变化,并与83例非DR(NDR)糖尿病组患者和72例对照组受检者进行比较,同时将40例增殖性DR(PDR)组患者与39例非增殖性DR(NPDR)组患者进行比较.采用PPMS 1.5统计学软件进行数据分析.两组均数比较采用t检验;多组均数比较采用单因素三水平设计定量资料方差分析,多个均数之间两两比较采用q检验.结果 DR组患者血清IMA浓度(46.51±13.29)μg/L,hs-CRP浓度(4.27±2.24)mg/L;NDR组患者血清IMA浓度(25.47±9.33)μg/L,hs-CRP浓度(2.96±1.84)mg/L;对照组血清IMA浓度(15.36±4.27)μg/L,hs-CRP浓度(1.86±0.97)mg/L;PDR组患者血清IMA浓度(54.72±15.61)μg/L,hs-CRP浓度(6.34±3.53)mg/L;NPDR组患者血清IMA浓度(38.35±11.27)μg/L,hs-CRP浓度(3.28±1.77)mg/L.DR组患者血清IMA和hs-CRP浓度明显高于对照组和NDR组,NDR组患者血清IMA和hs-CRP浓度高于对照组,差异有统计学意义(F=197.124,34.561;q=5.41～27.34;P<0.01);PDR组患者血清IMA和hs-CRP浓度明显高于NPDR患者组,差异有统计学意义(t=5.46,4.89;P<0.01);DR组患者血清IMA与hs-CRP浓度呈正相关(r=0.617,P<0.01).结论 DR患者血清IMA和hs-CRP浓度明显升高,且与病情严重程度呈正相关,可能影响DR的发展.     

腹腔镜胆囊切除术856例手术体会

我院 2 0 0 0年 2月～ 2 0 0 4年 1月共实施腹腔镜胆囊切除术 (laparoscopiccholecystectomy ,LC) 85 6例 ,取得了满意的效果。现将手术体会报告如下。1　临　床　资　料1.1　一般资料 :本组共 85 6例 ,男性 389例 ,女性4 6 7例 ,年龄 7～ 93岁 ,平均 5 2岁。其中 70岁以上高龄     

谷氨酰胺对脓毒症大鼠心肌细胞Caspase-3基因及蛋白表达的影响

目的:研究脓毒症大鼠心肌细胞凋亡的变化及其与Caspase-3基因及蛋白表达的关系,同时探讨谷氨酰胺(Gln)对脓毒症心肌损伤的保护作用及机理.方法:采用内毒素(LPS)腹腔注射法制作脓毒症大鼠模型,大鼠随机分为对照组、LPS组及LPS+Gln组,再分为0 h、6 h、12 h、24 h亚组(n=6),检测各时点心肌细胞凋亡率和Caspase-3蛋白的含量,同时检测心肌Caspase-3 mRNA表达,对各组结果进行比较.结果:LPS组大鼠心肌细胞凋亡率均明显高于对照组(P<0.05);心肌细胞Caspase-3蛋白表达均高于对照组(P<0.05);Caspase-3mRNA较对照组均明显上调(P<0.05).LPS+Gln组与LPS组比较,心肌细胞凋亡率明显低于LPS组(P<0.05);Caspase-3蛋白表达下降(P<0.05);Caspase-3 mRNA较LPS组均明显下调(P<0.05).结论:依赖Caspase-3基因的凋亡通路在脓毒症发病机制中起到重要作用,Gln通过阻止Caspase-3 mRNA及蛋白表达而减少脓毒症心肌细胞凋亡程度,可利用它对脓毒症进行早期干预.     

槽状活动封口塑料袋在微生物检验中的应用

本课题组在开展用中药改良病原体培养基研究时,需要对系列稀释的菌液进行微量培养以寻找最佳稀释浓度.因一时购不到少量的无菌微孔板与密封膜,即利用日常用的槽状活动封口塑料袋做试验,并取得良好效果.再者槽状活动封口塑料袋有密封性好、开关方便的特点,故进而挖掘其在微生物检验工作中的其它用途,如厌氧菌的分离培养、菌种及培养基的保存等,结果满意,现将几种用法介绍如下.     

L-精氨酸对严重腹腔感染大鼠肠上皮细胞凋亡的影响

目的 了解L-精氨酸对严重腹腔感染大鼠肠上皮细胞凋亡的影响.方法 18只Wistar大鼠随机分为CLP组(n=6)、ARG组(n=6)和对照组(n=6),CLP组和ARG组均采用大鼠盲肠结扎加穿孔(CLP)制作严重腹腔感染模型;ARG组术后于腹腔注射L-精氨酸(300 mg/kg·d),CLP组术后注射等量生理盐水,对照组仅行剖腹术.各组均于术后24 h取小肠组织,采用原位末端标记法计数各组凋亡细胞.结果 与对照组大鼠比较,CLP组和ARG组小肠黏膜上皮细胞凋亡细胞数量显著升高(P＜0.001);与CLP组比较,ARG组小肠黏膜上皮细胞凋亡细胞数量显著降低(P=0.038).结论 严重腹腔感染可导致大鼠肠黏膜上皮细胞凋亡增多,应用L-精氨酸可减少肠黏膜上皮细胞凋亡.     

长期低剂量红霉素治疗慢性鼻窦炎

目的观察长期低剂量红霉素治疗慢性鼻窦炎的疗效。方法自2002年5月-2002年10月,对68例慢性鼻窦炎患者应用低剂量红霉素治疗,3个月、6个月后分别观察其症状、鼻内镜检查、鼻窦CT检查及鼻窦黏膜病理的改善情况,同时检测治疗前后的糖精传输时间(saccharinetime,ST)。结果3个月、6个月后各项症状及检查好转率分别为:63.2%、69.1%鼻腔通气改善;58.8%、64.7%鼻涕量减少;70.3%、75.7%头痛减轻;23.8%、23.8%嗅觉改善;52.8%、62.3%鼻内镜检查好转;50.8%、55.9%CT扫描较用药前改善:46.7%、53.3%病理检查示鼻窦黏膜炎症减轻。平均ST治疗前为35.6±6.5分钟,用药3个月后为28.3±6.4分钟,6个月后为18.9±7.6分钟。结论长期低剂量应用红霉素对治疗慢性鼻窦炎有较好的疗效。     

血管内皮生长因子与脑梗死的关系概述

脑梗死（cerebral infarction,CI）是内科常见的严重性疾病。因为其具有发病率、致残率、死亡率及复发率高的特点,故对脑梗死的荫治已成为当今社会关注的重要课题。实验研究也证实,如能及时恢复缺血区的血供,脑组织的损伤基本是可逆的。但如果半暗带区的缺血情况不能及时得到改善,随着缺血时间的延长,半暗带区中的死亡神经细胞将会逐渐增多、融合,最后会发展为完全的梗塞灶。由此可见,及时改善缺血半暗带区的血液供应,是缩小梗塞面积的关键所在。