含PreS1、PreS2和S抗原的重组乙型肝炎疫苗辅以不同佐剂在HBV转基因小鼠中的免疫原性

目的 研究以免疫刺激复合物(immune stimulating complex,ISCOM)或Al(OH)3为佐剂的含PreS1、PreS2和S抗原的重组乙型肝炎疫苗在HBV转基因小鼠中诱导的免疫应答.方法 将纯化的含PreS1、PreS2和S抗原的重组HBsAg(SS1S2)分别辅以ISCOM或Al(OH)3佐剂制成疫苗.HBV转基因小鼠每月肌内注射1针疫苗,共注射7针.免疫前及每针后1个月称量小鼠体重,观察小鼠生长情况.免疫前及每针后1个月采血,用ELISA检测HBV S、PreS1、PreS2抗原及其相应抗体.7针后1个月分离小鼠脾淋巴细胞,用酶联免疫斑点试验分别测定分泌IL-4、IL-5、IFN-γ的效应T细胞频数.结果 小鼠生长状况良好,每针后体重均有增长.首针后1个月,10只ISCOM+ SS1S2免疫鼠分别有3和1只抗S和PreS1抗体阳转,无一小鼠抗PreS2抗体阳转;10只Al(OH)3+ SS1S2免疫鼠的抗体均为阴性.7针后1个月,10只ISCOM+ SS1 S2免疫鼠的抗S和PreS1抗体均阳转,8只抗PreS2抗体阳转;10只Al(OH)3+ SS1S2免疫鼠分别有9、7和1只抗S、PreS1和PreS2抗体阳转;ISCOM+SS1S2组和Al(OH)3+ SS1S2组的抗S抗体几何平均滴度分别为1∶15 647和1∶1 039,差异有统计学意义0=5.18,P=0.000).7针后1个月,ISCOM+ SS1S2组和Al(OH)3+ SS1S2组分泌IL-4的细胞频数分别为219和78斑点形成细胞(spot-forming cell,SFC)/106细胞(t=10.50,P=0.000),分泌IL-5的细胞频数分别为286和34 SFC/106细胞(t=19.53,P=0.000),差异有统计学意义.结论 含PreS1、PreS2和S抗原的重组乙型肝炎疫苗辅以ISCOM或Al(OH)3佐剂在HBV转基因小鼠中均具有免疫原性,且ISCOM+ SS1 S2的免疫原性强于Al(OH)3+ SS1S2.     

重组人IL1-Ra与TGF-β1共转染软骨细胞的基因表达

目的：探讨重组人IL1-Ra与TGF-β1基因转染软骨细胞的表达情况。方法：体外分离培养兔关节软骨细胞，然后用构建的IL1-Ra与TGF-β1质粒通过脂质体介导下共转染软骨细胞，通过荧光显微镜观察转基因的表达和荧光定量PCR检测其表达。结果：荧光显微镜观察有绿色荧光蛋白表达，荧光定量PCR鉴定证实转染的软骨细胞中转基因得到表达。结论：IL1-Ra与TGF-β1基因共转染软骨细胞可以获得表达，为基因治疗骨关节炎的研究提供基础。     

电针“百会”“肾俞”对淀粉样前体蛋白/早老蛋白1转基因小鼠认知功能和神经炎症的影响

目的：从神经炎症角度探究电针改善淀粉样前体蛋白/早老蛋白1（APP/SP1）转基因小鼠认知功能的机制。方法：40只APP/PS1转基因小鼠随机分为模型组、电针组、西药组、电针+西药组,每组10只;10只C57BL/6野生鼠作为空白组。电针组给予针刺“百会”、双侧“肾俞”,西药组给予多奈哌齐灌胃,电针+西药组予以电针并给予多奈哌齐灌胃,空白组和模型组给予蒸馏水灌胃。干预28 d后,Morris水迷宫实验测试各组小鼠的逃避潜伏期、目标象限停留时间及穿越平台次数,苏木精-伊红（HE）染色观察额叶神经元的病理改变,蛋白质印迹法检测各组小鼠额叶组织内肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、核因子κB的表达。结果：Morris水迷宫实验提示,电针组、西药组、电针+西药组小鼠的逃避潜伏期减少、目标象限停留时间延长、穿越平台次数增多(P<0.05);HE染色结果提示,与模型组比较,电针组、西药组、电针+西药组额叶神经元的数量和形态均有所改善;蛋白质印迹检测结果提示,与模型组比较,电针组、西药组、电针+西药组TNF-α、核因子κB的含量均下降(P<0.05)。结论：电针可能通过抑制TNF-α、核因子κB的释放,减轻神经炎症及额叶皮层神经元凋亡,从而改善AD小鼠的认知功能。     

肿瘤淋巴管生成与肿瘤转移研究进展

现已证实淋巴管是肿瘤细胞转移播散至局部淋巴结的主要通路。但关于淋巴管发生的分子机制却了解甚少。新近研究证明血管内皮生长因子(VEGF)-C和VEGF-D及其受体VEGFR-3信号通路是淋巴管形成的基础,并在转基因动物模型观察到VEGF-C和VEGF-D可诱导肿瘤淋巴管生成,并促进其淋巴结转移。然而,VEGF-C和-D如何调节肿瘤相关淋巴管生成,对于肿瘤细胞如何从原发肿瘤逃逸,并怎样进入淋巴管,目前仍不清楚。为此,现就近期淋巴管生成与肿瘤转移研究进展作一简要综述。     

哺乳动物精原干细胞技术的研究进展

精原干细胞（spermatogonial stem cells SSCs）具有高度的自我更新能力和分化潜能。其体外培养以及近年来兴起的移植、基因转染的深入研究，为探讨精子的发生机理、重建不育个体的精子发生、生产转基因动物提供了新的途径。本文对SSCs技术的研究进展作一综述。     

逆转录病毒的高效包装及转基因鸡技术平台的建立

转基因鸡及输卵管生物反应器正日益成为生物领域研究的热点之一,当前研究转基因鸡最成功的方法即为逆转录病毒介导法,但目前国内尚无系统报道逆转录病毒法制备转基因鸡的平台技术。为加快国内这一领域的研究步伐,本文较详尽的介绍了从逆转录病毒包装、竞争法包装泛嗜性VSV-G病毒、病毒包装条件的优化、病毒的浓缩、辅助病毒检测、鸡胚盘下腔注射等方法技术,并分别在体外鸡胚胎原代成肌细胞(CFM)和体内鸡胚中检测目的标记基因GFP的病毒感染整合效率,为今后转基因鸡的研究提供了一个实用的技术平台。     

脊椎动物P450s超家族在转基因动物中的研究进展

细胞色素P450s超家族参与生物体内许多物质的代谢反应。现就P450s家族的概况，人P450s家族的分类和主要功能，以及斑马鱼P450s的研究现状作一综述。同时介绍了应用转基因小鼠研究人P450s功能的进展，并对应用转基因斑马鱼研究人P450s在药物代谢方面的作用作一展望。     

p21活化激酶在APP/PS1转基因AD小鼠模型海马内表达的年龄变化(英文)

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)与突触障碍密切相关,p21活化激酶(p21-activated kinase,PAK)在突触功能调节中起重要作用。然而,PAK与AD病理学变化之间的关系,尚不清楚。本实验用分子生物学及组织化学等方法检测了不同周龄APP/PS1转基因AD小鼠模型海马中PAK3(PAK的代表性亚型)、pPAK(磷酸化的PAK)和Aβ42(含42个氨基酸片断的Aβ多肽)的表达水平以及神经元的形态学变化。Western Blot结果显示,海马中PAK3的表达,在不同年龄的APP/PS1转基因AD模型小鼠和非转基因小鼠中,均没有显著性差别;而pPAK表达则出现显著性降低(32周),并且随年龄增长进一步下降。Aβ42的水平在转基因AD小鼠模型海马中增加较早(22周),并随年龄的增长而显著增加。Nissl染色显示,转基因AD小鼠模型海马神经元无明显数量变化;而Golgi银染法显示,转基因AD小鼠模型海马神经元的树突显著变形、紊乱。这些结果说明,在APP/PS1转基因AD小鼠模型PAK表达正常,但PAK的磷酸化过程出现了异常,导致其活性不足。Aβ42的毒性作用可能是导致pPAK活性下降的原因,而pPAK的下降又可能是影响海马神经元树突发育、造成其变形、紊乱的直接原因。     

重组抗HBsAg单链抗体在HBV转基因小鼠体内作用的研究

目的　研究重组人源抗HBsAg单链抗体 (HBscFv)在HBV转基因小鼠体内的活性作用 ,探讨HBV转基因小鼠作为HBsAg特异性抗体的结合活性评价模型的可行性。方法　工程菌表达的HBscFv包涵体经固定化金属螯合层析和分子排阻层析两步纯化后 ,分步透析复性。复性后的HBscFv(0 .9g L)经尾静脉注射HBV转基因小鼠 ,一定时间后测定鼠血清中HBsAg的浓度 ,计算抗体注射前后HBsAg浓度下降的百分比 (结合率 ) ,同时以人血源HBsAbIgG(40U ml)和生理盐水作为对照。结果　两步纯化获得纯度达到 98%的重组HBscFv。HBscFv制品能够结合转基因小鼠体内的HBsAg,其结合率为 (30 .4 7± 9.85 ) % ,与生理盐水组差异有显著性 (P <0 .0 0 1) ,与HBsAbIgG组差异无显著性(P >0 .0 5 ) ;对照品HBsAbIgG的结合率为 (39.0 0± 7.4 3) % ,与生理盐水组差异也有显著性 (P <0 .0 0 1)。比较HBscFv和HBsAbIgG的结合率及其浓度 ,求得HBscFv的结合效价为 31.5 8U mg。结论　HBscFv在转基因小鼠体内具有特异性结合HBsAg活性 ,HBV转基因小鼠可发展为评价HBsAg特异性抗体的体内结合活性的候选模型。     

转人溶菌酶基因小鼠乳腺生物反应器的建立

目的 研究人溶菌酶（human lysozyme，hLYZ）动物乳腺生物反应器制备的可行性。方法 将hLYZ基因与动物乳腺特异表达载体p205C3连接，所得重组载体p205C3-hLYZ用显微注射法建立转基因小鼠。结果 共出生了136只F0代小鼠，PER和Southern杂交检测基因整合阳性率分别为5．15％（2♀5♂）和2．94％（1♀3♂）。Western印迹检测结果表明，分泌在小鼠乳汁中的表达产物与正常hLYZ具有相同的分子量。目前转基因小鼠已经繁殖到B代，每一代基因整合阳性母鼠的乳腺均表达hLYZ，乳汁中的表达量最高达750mg/L。斑点杂交试验证明，表达有较强的组织特异性，除在乳腺表达外，仅在脾脏和小肠有一定的异位表达。结论 成功建立了hLYZ小鼠乳腺生物反应器。