HPA反义寡核苷酸对人食管癌EC9706细胞中HPA蛋白表达的影响

目的　探讨乙酰肝素酶 (HPA)反义寡核苷酸 (ASODN)对人食管癌 EC970 6细胞中 HPA蛋白表达的影响。方法　将食管癌 EC970 6细胞体外分组贴壁培养 ,实验组分别用设计合成的 10、2 0、30 μm ol/ L 三种浓度的 4条封闭肝素酶不同基因位点的 ASODN(ASODN- t1 、ASODN- t2 、ASODN- t3、ASODN- t4 )。对照 组为 1条无关寡核苷酸 (N - ODN)转染 EC970 6细胞 ,对照 组为无转染。采用免疫组化 (SP)法检测各组 EC970 6细胞中HPA蛋白表达情况。结果　实验组中 3种浓度的 4条 HPA- t2 效应最强。不同浓度的 4条 HPA ASODN对EC970 6细胞中 HPA蛋白表达的影响无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ,但均低于对照 组及对照 组 (无转染 )(P<0 .0 5 )。结论　HPA ASODN可抑制食管癌 EC970 6细胞中 HPA蛋白表达。     

卵巢癌相关成纤维细胞的培养及其对癌细胞侵袭力的影响

目的 探讨卵巢癌相关成纤维细胞(CAFs)对卵巢癌细胞株CAOV3侵袭力的影响.方法用组织块贴壁培养法获得原代卵巢CAFs和卵巢正常成纤维细胞(NFs);通过倒置相差显微镜观察细胞形态和多种蛋白的免疫组化染色,对卵巢CAFs进行鉴定,观察CAFs对CAOV3侵袭力的影响.结果获得纯化的卵巢CAFs,其波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白染色呈阳性,角蛋白呈阴性;CAFs可显著提高CAOV3的侵袭能力(P<0.01).结论与NFs相比,CAFs在形态结构、蛋白表达等方面均有显著差异,卵巢CAFs可增强CAOV3侵袭作用.     

脑心通胶囊对冠心病病人非急性期hs-CRP、MMP-2及MMP-9的影响

目的检测冠心病病人稳定期血清高敏C-反应蛋白（hs-CRP）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）水平，探讨其在冠心病预后评估中的临床意义及脑心通胶囊的干预作用。方法收集76例明确诊断为冠心病的病例为冠心病组，同时以40名年龄、性别匹配的健康人为正常对照组，比较两组血清hs-CRP、MMP-2、MMP-9水平差异。将冠心病病人随机分为常规组和脑心通组（在常规治疗基础上加用脑心通每次4粒，每日3次），干预时间8周，比较干预前后血清hs-CRP、MMP-2、MMP-9水平变化。结果冠心病病人血清hs-CRP、MMP-2、MMP-9水平显著高于对照组，但冠心病中陈旧性心肌梗死与非心肌梗死病人并无统计学意义；用药干预后，脑心通组血清hs-CRP、MMP-9水平明显减低，与常规组比较有统计学意义。结论冠心病病人非急性期血清hs-CRP、MMP-2、MMP-9水平越高，可能反映冠脉斑块稳定性越差，心脏组织的异常重构越严重；脑心通可能通过下调hs-CRP、MMP-9表达，稳定冠脉斑块，抑制或改善心脏病理重构，使冠心病病人从中获益。     

缬草波春诱导胃癌细胞凋亡与信号分子表达的关系

缬草波春是从缬草中提取的化合物，体外实验表明缬草波春对Kreb Ⅱ腹水癌细胞、肝癌细胞、骨髓造血祖细胞和人T2淋巴细胞有抑制作用。新近发现生存素是凋亡抑制因子，而p53是重要的抗癌基因，参与化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡过程。我们试图通过研究缬草波春诱导MKN-45胃癌细胞凋亡时P53蛋白、生存素mRNA及生存素蛋白的表达阐明其诱导凋亡的机制。     

孟鲁司特对哮喘大鼠气道INOS mRNA表达和炎症的影响

将SD大鼠24只随机分为正常对照组(A组)、哮喘组(B组)、孟鲁司特治疗组(C组)、地塞米松治疗组(D组)各6只,B、C、D组以卵白蛋白致敏制备哮喘模型,C组、D组分别予孟鲁司特、地塞米松1 mg/kg灌胃,A组、B组均予等量生理盐水腹腔注射.采用硝酸还原酶法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中一氧化氮(NO)水平,采用RT-PCR技术检测一氧化氮合酶(INOS)mRNA表达,通过荧光酶标记法测定BALF中嗜酸性阳离子蛋白(ECP)的水平.结果 与A组比较,B组BALF中ECP、NO水平及INOS mRNA表达显著增加,P均<0.01.NO与ECP水平呈正相关(r=0.546,P<0.05).D组ECP、NO水平及INOS mRNA表达均降低,但C组INOS mRNA表达未减少.提示孟鲁司特可减轻气道炎症,其机制可能与影响INOS mRNA表达有关.     

初步筛选心血管相关基因——表达序列片段测定法

目的从正常人胎儿心脏ｃＤＮＡ文库中，用ＤＮＡ自动测序的方法筛选心血管相关基因。方法（１）人胚胎心ｃＤＮＡ文库的构建；（２）挑取有目的基因片段插入的噬菌斑，选用正向Ｔ３和反向Ｔ７引物做ＰＣＲ扩增；（３）直接使用其ＰＣＲ产物做ＤＮＡ测序模板，用荧光标记的Ｔ３Ｂ引物做再次ＰＣＲ扩增；（４）用ＤＮＡ测序仪（ｐｈａｒｍａｃｉａ）测定基因表达序列片段（ＥＳＴｓ）；（５）将所获得的ＥＳＴｓ输入Ｇｅｎｅｂａｎｋ数据库做同源序列分析。结果（１）所构建的人胎儿心脏ｃＤＮＡ文库的库容量为１×１０９克隆，平均目的基因片段１．２～１．５ｋｂ，ＰＣＲ产物阳性克隆检出率高达７０％以上，用６％尿素－聚丙烯酰胺凝胶电泳５ｈ，可测ｃＤＮＡ序列片段２１０～５５０ｂｐ，平均３００ｂｐ；（２）在所测３１３２个克隆的ＥＳＴｓ中，新ＥＳＴｓ为４７．４％，已知序列片段为４４．１％。结论利用人胎儿心脏ｃＤＮＡ文库测定ＥＳＴｓ是筛选心血管基因的有效方法；构建高质量的ｃＤＮＡ文库是成功测定ＥＳＴｓ的保证。     

恶性疟原虫杂合113肽抗原基因在减毒鼠伤寒沙门氏菌SL3261中的初步表达

我们先前已经将人工合成的恶性疟原虫杂合１１３肽基因克隆到表达载体ｐＷＲ４５０－１中，获得了重组质粒ｐＷＲＡＢ。现将ｎＷＲＡＢ先转化到ＬＢ５０００修饰后，再转化到疫苗菌ＳＬ３２６１，得到重组减毒鼠伤寒沙门氏菌ＳＬ３２６１（ｐＷＲＡＢ）。ｐＷＲＡＢ在ＳＬ３２６１中以β－半乳糖苷酶一杂合多肽抗原ＡＢ融合蛋白（ＧＺ－Ａｍ形式表达，表达量约１３．３％。免疫双扩散发现从ＳＬ３２６１（ｐＷＲＡＢ）中纯化的ＧＺ－ＡＢ可与抗ＧＺ－ＡＢ抗体反应，滴度为１：１６。蛋白质印渍技术（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）显示在ＧＺ－ＡＢ相应位置处出现特异条带。上述结果初步说明ＳＬ３２６１表达的ＧＺ－ＡＢ具有抗原性。连续传代ＳＬ３２６１（ｐＷＲＡＢ）未见质粒ｐＷＲＡＢ丢失及明显的毒性，为恶性疟口服活疫苗的制备打下了基础。     

Dynamic expression of apoptosis-related genes during development of laboratory hepatocellular carcinoma and its relation to apoptosis

AIM: To explore the expression of p53, bcl-2, bax, survivin and the cell apoptosis during the development of tree shrew hepatocellular carcinoma (HCC), the relationship between expression of these genes, its impact on HCC development, and its relation to cell apoptosis. METHODS: Tree shrew HCC was induced with aflatoxin B1 (AFB1), and regular biopsy of liver tissues was carried out and the biopsy tissues were collected during cancer inducement. Liver biopsy tissue and HCC tissue were collected from 35 pre-cancerous experimental animals at wk 30 and 60 and at the 30th-, 60th-, and 90th-wk. Liver biopsy tissues were collected from 13 blank control animals at wk 30, 60, and 90. Expression of p53, bcl-2, bax, and survivin at each stage was examined by immunohistochemistry method. Apoptotic cells were detected in situ by the terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated nick end labeling (TUNEL) technique. RESULTS: The apoptosis rate of normal hepatic cells was extremely low, whereas it increased during the formation of HCC. Expression of the apoptosis-related genes p53, bd-2, bax, and survivin during the formation of HCC presented an increasing tendency. Expression of p53 did not noticeably relate to that of bcl-2, bax, and survivin, whereas expression of bcl-2 and bax was closely related. In HCC, p53 did not present a distinct relation to cell apoptosis, whereas its high level expression was probably related to liver cell proliferation. Survivin negatively correlated apoptosis index, and its overexpression could inhibit cell apoptosis. CONCLUSION: Apoptosis-related genes p53, bcl-2, bax, and survivin are all related to the occurrence of HCC. The anti-apoptosis effect of bcl-2 is influenced by bax, and ratio bcl/bax reflects more correctly the extent of cell apoptosis.     

TTV DNA在肝组织中表达研究

目的 探索TTV DNA在肝组织表达特点。方法 选择TTV DNA高保守区设计一对引物，采用PCR扩增法，以地高辛标记TTV ORF1部分基因序列，合成Gla，G2b两种亚型的双链TTV DNA探针。应用巢氏PCR法筛选出TTV DNA阳性的慢性肝炎、肝硬化、原发性肝癌病人的肝组织标本共60份，同时用两种探针进行原位杂交。结果 TTV DNA主要见于肝细胞、肝癌细胞的细胞核内，极少数肝细胞胞浆内TTV DNA呈弱阳性。TTV DNA阳性细胞在慢性肝炎、肝硬化、肝癌组织中均呈散在分布。肝癌组织与癌周组织中TTV DNA阳性细胞密集程度差别不明显。结论 TTV是一种嗜肝病毒，TTV DNA在被感染肝组织及肝癌的细胞核内表达及复制。     

弓形虫RH株膜蛋白P30的原核表达与鉴定

目的在E.coli中表达弓形虫RH株膜蛋白P30。方法将P30基因定向克隆到pET28b,构建含目的基因的pET28b-P30重组质粒,转化E.coliBL21(DE3),接种含pET28b-P30的BL21(DE3)单菌落于LB培养基,1∶100稀释后用0.2mmol/L的IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Westernblot鉴定诱导表达产物。结果1构建了重组质粒pET28b-P30,2在E.coli中表达了一分子量约为30kDa的融合蛋白,经Westernblot鉴定正确。结论在E.coli中高效表达了弓形虫RH株膜蛋白P30,并以包涵体形式存在。