缬草波春诱导MKN-45胃癌细胞凋亡

目的:研究缬草波春诱导胃癌细胞凋亡,探讨其诱导凋亡与半胱氨酸酶(Caspase)及生存素(Survivin)mRNA、P53蛋白、Survivin蛋白表达的关系.方法:以100 mg/L的缬草波春作用于加Caspase-3抑制剂、Caspase-8抑制剂、Caspase-9抑制剂和未加Caspases抑制剂培养的MKN-45细胞24,48和72 h,用流式细胞仪分别检测细胞凋亡率;不同浓度的缬草波春(5,10,25,50,100 mg/L)作用MKN-45细胞不同时间(24,48,72 h)后,用tripure提取液提取细胞RNA,用RT-PCR法,检测Survivin mRNA的表达.不同浓度缬草波春(50和100 mg/L)作用MKN-45胃癌细胞株24 h后,用免疫组化的方法,检测P53蛋白和Survivin蛋白的表达.结果:单用Caspase抑制剂组,作用24,48和72 h对MKN-45细胞凋亡率无明显影响,与对照组比较差异无显著意义.Caspase-3抑制剂、Caspase-9抑制剂与缬草波春联合应用后24,48和72 h使MKN-45细胞凋亡率高于对照组(24 h:5.73%,5.41% vs 4.38%,P＜0.01;48 h:6.88%,6.32% vs 4.35%,P＜0.01;72 h:7.72%,8.62% vs 4.54%,P＜0.01),低于缬草波春组(24 h:5.73%,5.41% vs 8.14%,P＜0.01;48 h:6.88%,6.32% vs 12.31%,P＜0.01;72 h:7.72%,8.62% vs 26.41%,P＜0.01),与对照组及缬草波春组比较差异均有显著意义(P＜0.01).Caspase-8抑制剂与缬草波春联合应用后24,48和72 h MKN-45细胞凋亡率明显增加,与对照组比较差异有显著意义(8.02% vs 4.38%,P＜0.01;11.05% vs 4.35%,P＜0.01;24.86% vs 4.54%,P＜0.01),与单用缬草波春组比较差异无显著意义.缬草波春降低MKN-45胃癌细胞株Survivin mRNA的表达,并有浓度依赖性和时间依赖性,而且使MKN-45胃癌细胞株P53蛋白表达增加,Survivin蛋白表达降低,均有浓度依赖性.结论:缬草波春可诱导MKN-45细胞凋亡,其作用可部分被Caspase-3,Caspase-9抑制剂所抑制,但不能被Caspase-8抑制剂所抑制.缬草波春诱导MKN-45胃癌细胞株凋亡与P53蛋白表达提高及Survivin mRNA和Survivin蛋白低表达降低有关.     

缬草波春联合Caspases抑制剂诱导MKN45胃癌细胞凋亡

目的 研究中草药缬草提取物缬草波春联合Caspases抑制剂诱导MKN45胃癌细胞凋亡的作用。方法 将MKN45胃癌细胞分成4组:第1组加入同体积的生理盐水为对照;第2组分别加入浓度为10μM的Caspases-3、-8、-9抑制剂;第3组加入浓度为100 mg／L的缬草波春;第4组加入浓度为10 μM的Caspases-3、-8、-9抑制剂+浓度为100 mg／L的缬草波春混合物。药物作用24小时、48小时、72小时后,用流式细胞计分别检测凋亡率。结果　24、48、72小时作用后,第2组诱导MKN45细胞的凋亡率与对照组相似(P>0.05);第3组诱导MKN45细胞的凋亡率明显高于照组相(P<0.01);第4组中缬革波春联合Caspases-3、-9抑制剂诱导MKN45细胞的凋亡率均与对照组相似(P>0.05);缬草波存与Caspases-8抑制剂联合应用组诱导MKN45细胞的凋亡率明显高于对照组比(P<0.01),与第2组相似(P>0.05)。结论 缬草波春能诱导MKN45胃癌细胞凋亡,诱导凋亡能被Caspases-3、-9抑制剂抑制,Casoases-8抑制剂对缬草波春诱导的调亡无影响。     

反义生存素诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的构建反义生存素真核表达载体(anti-pcDNA3-svv),探讨其对胃癌的凋亡诱导作用。方法采用反义生存素核酸瞬时电转染法转染胃癌细胞系Skov3,筛选出阳性细胞株。以Western blot检测生存素蛋白的表达,用流式细胞仪检测其对Skov3的凋亡诱导作用,并检测实验组细胞(Skov3-SVVanti)MDR-1 mRNA的表达。结果稳定表达anti-pcDNA3-svv的Skov3-SVVanti组生存素蛋白表达较Skov3-neo和Skov3组明显降低,Skov3-SVVanti组细胞流式细胞仪检测显示其凋亡率为19%。Skov3-SVVanti组MDR-1 mRNA表达较Skov3和Skov3-neo组明显减少(P<0.01)。结论反义生存素核酸可诱导胃癌细胞凋亡,并能降低MDR-1mRNA表达。     

生存素反义寡脱氧核苷酸对人胃癌细胞株凋亡的影响

背景：生存素（survivin）是凋亡抑制蛋白（IAP）基因家族成员之一，在多数肿瘤组织中高表达。目的：观察生存素反义寡脱氧核苷酸（ASODN）对人胃癌细胞株凋亡的影响。方法：将体外培养的人胃癌细胞株SGC-7901分为不同浓度生存素ASODN组、无关寡脱氧核苷酸（N-ODN）组和对照组。以四甲基偶氮唑蓝（MTT）试验检测生存素ASODN对SGC-7901细胞生长的影响；通过形态学观察、DNA电泳和流式细胞仪分析反映细胞凋亡情况；以端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附测定（TRAP-ELISA）方法检测端粒酶活性。结果：生存素ASODN能抑制SGC-7901细胞生长，诱导细胞凋亡，抑制端粒酶活性。凋亡细胞形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成；DNA电泳呈现凋亡特征性阶梯状条带；流式细胞仪分析显示G1期前出现亚二倍体凋亡峰。结论：生存素ASODN能诱导人胃癌细胞株SGC-7901凋亡，抑制细胞生长及其端粒酶活性。     

生存素反义核酸诱导肝癌细胞株SMMC-7721凋亡和增加其对抗肿瘤药物敏感性的研究

背景：生存素是凋亡抑制蛋白家族的重要成员，生存素基因有可能成为肿瘤反义基因治疗的理想靶基因。目的：研究生存素反义核酸诱导肝癌细胞株SMMC-7721凋亡和增加其对常用抗肿瘤药物敏感性的作用，探讨生存素反义核酸用于肿瘤基因治疗的可能性。方法：应用基因重组技术构建pEGFP-C1-生存素反义核酸重组质粒，以脂质体转染法转染SMMC．7721细胞，用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测生存素mRNA的表达，用流式细胞仪检测细胞凋亡。将生存素反义核酸分别与7种常用抗肿瘤药物共同作用于SMMC-7721细胞，用四唑蓝(MTT)比色法测定细胞杀伤率。结果：生存素反义核酸可抑制SMMC-7721细胞中生存素mRNA的表达，从而导致细胞凋亡增加，其作用呈剂量依赖性。生存素反义核酸可增加SMMC-7721细胞对7种常用抗肿瘤药物的敏感性，明显增强药物的杀伤作用。结论：生存素反义核酸能靶向抑制野生型生存素基因的表达，提高肝癌细胞对常用抗肿瘤药物的敏感性，有可能成为肿瘤基因治疗的新方法。     

生存素基因突变体诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的 生存素(survivin)基因在胃癌组织中高水平表达，而在正常胃黏膜中无表达。生存素表达的水平与胃癌的预后密切相关。通过基因重组构建生存素基因突变体(pcDNA3—survivin—mutant，Cys84Ala)质粒，并以脂质体转染的方法将质粒DNA转入胃癌细胞株，观察其对胃癌细胞的生物学特性及多药耐药性的影响。方法 应用RT—PCR、Western blot、免疫组化等方法检测胃癌细胞中生存素基因mRNA和蛋白的表达，流式细胞仪和吖啶橙染色检测胃癌细胞凋亡。结果 通过RT—PCR检测，在所有的胃癌细胞株中均有不同程度生存素基因表达，生存素基因突变体Cys84Ala通过抑制野生型生存素基因的功能诱导胃癌细胞凋亡，增加caspase—3活性和促进细胞色素C的释放，增加胃癌细胞对化疗药物的敏感性。结论 突变体Cys84A1a能诱导胃癌细胞凋亡和增加胃癌细胞对化疗药物的敏感性。因此，生存素基因突变体Cys84Ala有可能成为胃癌治疗的一个候选基因。     

五味子乙素抗H2O2诱导PC12细胞凋亡的机制

目的 探讨五味子乙素(Sch B)抗H2O2诱导PC12细胞凋亡的影响及机制.方法 在H2O2诱导PC12细胞凋亡模型的基础上,采用MTT比色法分析细胞存活率; Hochest33258荧光染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡情况;DCFH-DA法检测细胞内活性氧(ROS)水平;Real Time PCR和Western印迹检测p53基因mRNA和蛋白的表达.结果 不同剂量Sch B处理PC12细胞48 h后,可剂量依赖性对抗H2O2引起的细胞凋亡,提高细胞存活率,减轻H2O2导致的细胞核固缩、聚集和碎裂,降低细胞内ROS的含量,抑制p53基因mRNA和蛋白的表达.结论 Sch B可剂量依赖性对抗H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与其抗氧化、下调促凋亡基因p53的表达等有关.     

夏枯草诱导人淋巴瘤Raji细胞凋亡及其机制

目的 探讨夏枯草诱导人淋巴瘤Raji细胞凋亡的机制.方法 人淋巴瘤Raji细胞在不同浓度夏枯草干预后分别采用CCK-8法、流式细胞术及免疫组织化学法等检测细胞增殖率和凋亡率的变化及Bcl-2、p53蛋白表达.结果 夏枯草作用于人淋巴瘤Raji细胞后引起细胞凋亡增加,并出现Bcl-2蛋白表达抑制,p53蛋白表达增强.结论 夏枯草可能通过激活p53、抑制BcI-2来诱导Raji细胞凋亡.     

羟基喜树碱诱导胃癌细胞凋亡的作用机制初步研究

目的：研究羟基喜树碱（HCPT）诱导胃癌细胞的凋亡作用及对凋亡相关基因p53,c-myc,bcl-2,bcl-xl和bcl-xs表达的影响,探讨其诱导胃癌细胞凋亡的作用机制。方法：应用TUNEL染色、流式仪、免疫组化和RT－PCR技术等研究HCPT对胃细胞SGC－7901和MKN－45的诱导凋亡作用和对凋亡相关有达的影响。结果：HCPT作用于细胞后,可看到较为典型的细胞凋亡的形态学变化;细胞核固缩,染色质凝集,呈新月型紧核膜周边,核碎裂,染色质片段化,凋亡小体形成等。流式细胞仪DNA直方图上出现典型的亚二倍体的“凋亡峰”。流式细胞仪计数显示,10μg/ml的HCPT诱导胃癌细胞SGC－7901和MKN－45的凋亡率为21．88％和12．34％。TUNEL染色法显示,细胞凋亡指数在1．865－9．54％之间。免疫组化和RT－PCR结果显示：HCPT能够明显下调SGC－7901细胞的P53和bcl-2基因的蛋白和mRNA表达,对SGC－7901细胞的c-myc,bcl-xl和bcl-xs基因的蛋白表达无影响。HCPT作用后MKN－45细胞的p53蛋白和mRNA的表达增加,对MKN－45细胞的bcl-2,c-myc,bcl-xl和bcl-xs基因的表达无影响。结论：HCPT能够诱导胃癌细胞凋亡,可能是通过调控胃癌细胞的P53和bcl-2的表达而诱导胃癌细胞凋亡。     

人膀胱移行细胞癌中生存素mRNA的表达及与细胞凋亡的关系

目的检测膀胱癌中生存素(Survivin)基因表达,探讨其与细胞凋亡的关系。方法采用原位杂交、免疫组织化学技术和DNA原位末端标记技术,检测46例膀胱癌组织、15例正常膀胱组织生存素mRNA及膀胱癌中caspase3蛋白和细胞凋亡。结果与正常膀胱组织相比,生存素mRNA显著表达于膀胱癌中,并与病理分级有关(P<0.05);膀胱癌中caspase3蛋白与凋亡细胞阳性率分别为76.1%和67.4%,凋亡指数均值为8.1%;生存素阴性组AI显著高于阳性组(P<0.01)。结论生存素选择性表达于膀胱癌中,通过抑制细胞凋亡,参与膀胱癌发生发展。     

ASPP蛋白家族的研究进展

P53凋亡刺激蛋白(apoptosis stimulating protein of P53,ASPP)家族是新近发现的与P53有关的肿瘤抑制基因家族．P53是目前公认的肿瘤抑制基因,他能诱导细胞周期阻滞或直接诱导细胞凋亡,但其如何作用这两种不同选择的机制一直不清,直到ASPP家族的发现,才使这一问题逐渐明了．ASPP与P53的作用主要是能特异性增强P53的细胞凋亡功能,而对P53的细胞生长停滞功能则没有影响．     

Survivin反义核酸诱导肝癌细胞凋亡及降低化疗药物耐药的研究

目的构建Survivin反义核酸真核表达载体(anti-pcDNA3-svv),探讨其对肝癌细胞的凋亡诱导作用及降低化疗耐药的机制。方法采用Survivin反义核酸瞬时电转染法转染肝癌细胞系Skov3,筛选出阳性细胞株。以Western-blot检测生存素蛋白的表达,用流式细胞仪检测其对Skov3的凋亡诱导作用,并检测实验组细胞(Skov3-SVVanti)MDR-1mRNA的表达。结果稳定表达an-ti-pcDNA3-svv的Skov3-SVVanti其生存素蛋白表达比未转染者明显降低,Skov3-SVVanti组细胞流式细胞仪检测显示其凋亡率为19%。Skov3-SVVanti组MDR-1mRNA表达较Skov3组明显减少(P0.01)。结论 Survivin反义核酸可诱导肝癌细胞凋亡,并通过降低MDR-1mRNA表达,降低化疗药物耐药性。     

生存素反义寡核苷酸诱导结肠癌细胞株凋亡的实验研究

背景:生存素(survivin)是凋亡抑制蛋白家族的成员之一,在肿瘤组织和人类胚胎组织中有高水平表达,在分化成熟的组织中不表达或低水平表达。有研究显示,64.5%～85%的结肠癌组织中存在生存素基因表达,其表达与结肠癌患者的不良预后有关。目的:观察生存素反义寡核苷酸对结肠癌细胞株凋亡的影响。方法:通过基因工程技术构建生存素反义寡核苷酸质粒pcDNA3鄄sur鄄As,以脂质体转染的方法将质粒DNA转入结肠癌细胞株。应用逆转录聚合酶链反应(RT鄄PCR)和蛋白质印迹法(Westernblot)检测结肠癌细胞株中生存素mRNA和蛋白的表达,流式细胞仪和碘化丙啶(PI)染色检测细胞凋亡,比色测定检测caspase鄄3活性的变化。结果:SW1116、COLO205、HT鄄29和SW1417四株结肠癌细胞株中均有生存素mRNA和蛋白表达。瞬时转染生存素反义寡核苷酸后,4株结肠癌细胞株的细胞凋亡率均明显增加,并呈剂量依赖性(P<0.01);结肠癌细胞株SW1116在荧光显微镜下呈现典型的凋亡细胞形态,细胞中生存素蛋白表达水平明显降低,caspase鄄3活性显著增加(P<0.01)。结论:应用生存素反义寡核苷酸抑制生存素基因的表达能诱导结肠癌细胞株凋亡,以生存素为靶基因的治疗方案可能有助于结肠癌患者的治疗。     

沥水调脂胶囊对氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞凋亡及Bcl-2、BaX、P53和Caspase-3蛋白表达的影响

目的：研究沥水调脂胶囊抑制内皮细胞凋亡的机制。以氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞凋亡，观察Bcl-2,Bax,P53和Caspase-3蛋白表达。方法：用流式细胞术检测细胞凋亡并进行周期分析；用细胞免疫荧光标记结合流式细胞术检测Bcl-2,Bax,P53和Caspase-3蛋白表达水平。结果：沥水调脂胶囊对氧化型低密度脂蛋白诱导的内皮细胞凋亡有抑制作用。在此过程中沥水调脂胶囊上调了Bcl-2蛋白表达水平，对Bax蛋白表达未见明显影响，同时下调了P53和Caspase-3蛋白表达水平。结论：推测沥水调脂胶囊可能是通过上调Bcl-2蛋白表达，下调P53和Caspase-3蛋白表达抑制内皮细胞凋亡的。     

槲皮素诱导人结肠癌Lovo细胞凋亡及其机制的研究

目的 目的 :探讨槲皮素诱导结肠癌Lovo细胞凋亡的机制.方法 结肠癌Lovo细胞在不同浓度槲皮素干预后分别采用流式细胞术、Western印迹法等检测细胞周期变化、凋亡及Bcl-2、Bax、p53及Caspase-3蛋白表达.结果 槲皮素作用于结肠癌Lovo细胞后,引起细胞凋亡增加,并出现G2/M期阻滞,Bcl-2蛋白表达抑制,p53、Bax及Caspase-3活性增强.结论 槲皮素可能通过激活p53、Bax及Caspase-3,抑制Bcl-2来诱导Lovo细胞凋亡.     

丹参素对胃癌MGC803细胞周期的影响及凋亡诱导作用

目的研究丹参素的体外抗肿瘤细胞增殖作用及其分子机制。方法 MTT法检测丹参素对人肿瘤细胞的抗增殖作用,流式细胞术检测细胞周期分布的改变及细胞凋亡,Western blot检测细胞周期素CyclinB1蛋白的表达,比色法测定Caspase-3和Caspase-6的活性。结果丹参素可诱导MGC803细胞出现G2/M期阻滞并诱导细胞凋亡。细胞中CyclinB1蛋白表达下调,Caspase-3和Caspase-6的活性显著升高。结论丹参素具有抗肿瘤细胞增殖作用,通过抑制细胞周期素CyclinB1表达诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡。     

丹参素诱导人肝癌细胞株SMMC7721凋亡的研究

丹参素是传统中药丹参的一种水溶性提取物,具有抗氧化和潜在的抗肿瘤作用。目的：探讨丹参素体外对人肝癌细胞株SMMC7721的诱导凋亡作用及其机制。方法：分别以0mg／L、10mg／L、20mg／L、30mg／L、40mg／L丹参素作用SMMC7721细胞24、48和72h后．采用MTT法检测细胞抑制率。透射电子显微镜观察细胞凋亡形态。AnnexinV-FITC／PI双染法检测不同浓度（O-40mg／L）丹参素和40mg／L丹参素作用不同时间（0-48h）对SMMC7721细胞的凋亡：RT-PCR法检测不同浓度（0-40mg／L）丹参素作用SMMC7721细胞24h后p53mRNA表达。结果：丹参素可呈时间和剂量依赖性地抑制SMMC7721细胞增殖和诱导凋亡：透射电子显微镜下可见典型的细胞凋亡特征。随着丹参素浓度的升高．D53mRNA表达亦明显上调。结论：丹参素在一定浓度范围内可呈时间和剂量依赖性地抑制SMMC7721细胞增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与p53表达上调有关。     

存活素反义寡核苷酸对甲状腺癌细胞生长的抑制作用

目的 探讨利用凋亡抑制基因存活素反义寡核苷酸（ASODN）诱导甲状腺癌细胞凋亡的效应。方法 设计合成特异性靶向存活素的ASODN，以不同浓度和时间对人甲状腺髓样癌细胞进行转染，并设空白、正义（SODN）对照组进行比较。采用RT-PCR、Western印迹、免疫细胞化学技术检测各组细胞中存活素mRNA、蛋白表达水平，DNA裂解分析、吖啶橙／溴化乙锭（AO／EB）染色法、流式细胞仪检测细胞凋亡水平和形态变化，MTT法检测细胞生长抑制情况。结果 转染ASODN各组细胞存活素mRNA和蛋白表达均较空白对照组、SODN组明显减弱；细胞凋亡率显著增加，细胞生长相应受抑，上述效应在ASODN转染24h最为明显，并呈浓度依赖性；而各时段SODN组与空白对照组间各项指标差异均无统计学意义。结论 ASODN能够特异性地下调甲状腺癌细胞中存活素基因表达，进而诱导肿瘤细胞凋亡，并抑制其增殖。     

苦参素对膀胱癌T24细胞影响的研究

将苦参素作用于体外培养的膀胱癌T24细胞，光镜、电镜下观察其形态学变化，检测p53蛋白的表达。结果0．625-10mg／ml的苦参素对T24细胞的抑制率为13．75-91．03％；T24细胞核质比缩小，形成多个凋亡小体；p53阳性率由76．25％降至25．75％。提示苦参素对T24细胞生长有抑制作用并可诱导其凋亡，其机制可能为下调p53蛋白表达。     

外源性碱性成纤维细胞生长因子对吸烟大鼠脑细胞凋亡及p53表达的影响

目的 研究外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对吸烟大鼠脑细胞凋亡及p53表达的影响.方法 将40只大鼠随机分为4组:正常对照组、长期大量吸烟组、短期大量吸烟组、吸烟+bFGF组(吸烟最后15 d经腹腔内注射bFGF).采用线栓大脑中动脉法建立大鼠脑梗死模型.采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL法)及免疫组化法检测细胞凋亡和p53蛋白表达.结果 各吸烟组脑细胞凋亡及p53蛋白表达较对照组明显增加(P＜0.01),凋亡细胞数量和p53蛋白表强度随吸烟时间和剂量增加而增加(P＜0.01).bFGF治疗组大鼠脑细胞凋亡数及p53蛋白表达较单纯吸烟组明显减少(P＜0.01).结论 吸烟可使大鼠脑细胞凋亡及p53蛋白表达增加,p53介导吸烟诱导的细胞凋亡,细胞凋亡及p53蛋白表达强度与吸烟时间及数量相关,bFGF 通过抑制p53表达减少细胞凋亡.